滑液分析は、筋骨格症状および関節滲出液を有する患者の初期評価中に炎症の程度および病原性結晶の存在を明らかにすることができる。この手法の主な利点は、そのシンプルさと信頼性です。いくつかのステップで、臨床医は患者の疾患に関する重要な診断情報を得ることができます。
特定の結晶の同定は、診断と治療に不可欠です。尿酸塩結晶は痛風を示しますが、ピロリン酸カルシウムおよび他のカルシウム結晶はカルシウム関連関節症またはより重症の変形性関節症を示します。はじめに、患者の腫れた関節の関節穿刺中に収集された滑液サンプルを採取します。
サンプルの容量にミリリットル単位で注釈を付け、抗凝固剤EDTAを含むチューブと添加剤を含まない別のチューブに別々に移します。感染が疑われる場合は、数ミリリットルの滑液サンプルを微生物学的検査用の培養ボトルに無菌的に移します。サンプルを肉眼的に調べるには、サンプルを含むチューブを取り、サンプルの色(淡黄色から濃い黄色までの範囲)を定義します。
もしあれば、血液の存在を記録します。バックライトでサンプルを観察し、サンプルを含むチューブを通して印刷されたページを読みやすくすることで、サンプルの透明度を定義します。次に、使い捨てピペットからサンプルを滴下してサンプルの粘度を評価します。
長い一連の液体の出現は高粘度を示すが、液滴の形成は低粘度を示す。組織片やフィブリンなどの粒子状物質が存在するかどうか、バックグラウンドで光を当ててチューブを通してサンプルを観察します。総白血球数を決定するには、マラセポテンピペットを使用してEDTAAを含むチューブから0.5マイクロリットルのサンプルを引き出します。
同じピペットを使用して、9.5マイクロリットルの0.1%メチレンブルー溶液を吸引します。サンプルとメチレンブルー溶液をピペット内で穏やかに反転させて混合します。混合物を血球計算盤の計数室に注ぐ前に、最初の数滴を捨ててください。
次に、9つのうち2つの連続した正方形のセルを数え、得られた数に100を掛けます。総白血球数を立方ミリメートルあたりの白血球数として表します。チューブからの滑液サンプルを添加物なしで使用して、滑液サンプルの差白血球数を決定します。
超バイタル染色を使用して差細胞数を決定するには、クリスタルバイオレットとメチレンブルーでプレコーティングされたすぐに使用できるスライドを取り、スライドの中央に少量のサンプルを1滴置きます。次に、サンプルドロップをカバーガラスで覆い、カバーガラスの上に顕微鏡浸漬オイルを一滴置きます。従来の染色を使用して差細胞数を推定するには、まず、きれいなスライドの最後にサンプルを少量ずつ入れます。
次に、2番目のスライドまたはカバーガラスを使用して、スライドに沿ってドロップを前方に動かして広げます。塗抹標本を空気中で乾かします。1, 000X油浸対物レンズの下で空気乾燥塗抹標本を含むスライドを調べます。
多形核細胞、単球、リンパ球を区別しながら100個の連続した細胞を数えて、差細胞数を推定します。エタノールを吸収させた光学紙または軟紙でスライドガラスを清掃します。添加剤と混合していないサンプルをスライドガラスに少量ずつ塗布し、カバーガラスで覆ってからスライドを顕微鏡下に置きます。
低倍率の対物レンズを使用して顕微鏡下でスライドの焦点を合わせ、40倍の対物レンズを備えた明視野下で慎重に観察します。細胞の内側と外側を見て、菱形、針状、棒状など、サイズと形状に応じて結晶を識別します。次に、光源と試料の間に偏光フィルターを挿入します。
暗い背景を作成するには、光軸がアナライザーに垂直になるまで偏光子を回転させます。複屈折結晶が特定されたら、偏光子と試料の間に補償器を挿入し、結晶の光軸に対して平行または垂直に動かします。結晶によって明らかにされた色を観察します。
アリザリンレッド染色の場合は、滑液サンプルのドロップを、きれいなスライド上で等量の以前に調製したアリザリンレッド溶液と混合します。スライドをカバーガラスで覆い、顕微鏡で400倍の倍率で調べて結晶を特定します。滑液サンプルの肉眼的特徴は炎症の程度を示した。
淡黄色で透明度の高いサンプルは、一般に変形性関節症などの非炎症性状態に関連しています。一方、濃い黄色で濁った外観を持つサンプルは、炎症性滲出液に関連する細胞、破片、ヒアルロン酸、およびフィブリンフラグメントの存在を示しています。変形性関節症患者の滑液サンプルで観察された白血球は、ほとんどが単球と滑膜細胞のような他の単核球でした。
ピロリン酸カルシウム結晶は、比較的高いレベルの炎症性サイトカインを示す滑液サンプルで検出されました。さらに、陽性のアリザリンレッド染色により、サンプル中に塩基性リン酸カルシウム結晶が存在することが明らかになりました。結晶を探すときは、通常の光の下でスライドを注意深く調べることが非常に重要です。
ピロリン酸結晶はしばしば弱複屈折性であり、偏光下で見逃す可能性があることを忘れないでください。滑液中のカルシウム結晶の存在と、より重篤な形態の疾患との関連により、研究者は変形性関節症の病因と進行における新しいメカニズムを探求するようになりました。
