Этот метод может быть использован в качестве новой клинической стратегии лечения остеоартрита коленного сустава. Эта методика безопасна, проста для местных инъекций, а лечение эффективно в экспериментах на животных. Наночастицы серебра могут быть применимы и при других воспалительных заболеваниях, и это требует дальнейших исследований.
Поэтому важно быть осторожным при инъекциях по размеру колена мышей, обеспечивая правильную процедуру. Оцените наполнение коленного сустава рукой в коленях и не допускайте утечки препарата. Начните с того, что положите мышь под наркозом на операционный стол.
Обмотайте конечности мыши скотчем, затем сбрейте шерсть бритвой. Далее трижды продезинфицируйте выбритый участок чередующимися скрабами из 0,1% йодоформа и спирта. С помощью ножниц делают надрез на коже, последовательно обнажая подкожную клетчатку и подколенную связку.
Инсулиновым шприцем объемом один миллилитр введите в полость сустава 10 единиц коллагеназы второго типа. Зашить подкожную клетчатку, затем зашить кожу. Теперь простерилизуйте зашитый участок 0,1% йодоформом.
Поместите мышь в индивидуально вентилируемую клетку, как только она очнется от анестезии. Начните с добавления 400 микролитров коллагена первого типа в пробирку микроцентрифуги объемом 1,5 миллилитра, помещенную на лед. Теперь добавьте 200 микролитров АТС, хорошо перемешайте и поместите пробирки на лед.
Добавьте в эту суспензию 400 микролитров наночастиц серебра, в результате чего конечная концентрация наночастиц составит один миллимоль. Хорошо перемешайте суспензию. Через неделю после инъекции коллагеназы извлеките мышей КОА из клеток.
Перед введением наночастиц серебра обезболите и хирургически подготовьте мышь, как было показано ранее. С помощью ножниц последовательно обнажайте кожу, подкожную клетчатку и связки колена. Затем с помощью иглы инсулинового шприца объемом один миллилитр ввести в полость сустава под углом 15 градусов и медленно ввести 20 микролитров коллагеновой смеси с наночастицами серебра.
Во время инъекции коленный сустав будет опухать, обеспечивая успешную инъекцию препарата. После наложения швов и стерилизации места операции, как и ранее, поместите мышей в индивидуально вентилируемые клетки, как только анестезия закончится. Хирургически стерилизовать и препарировать конечности усыпленной мыши.
Соберите коленные суставы, включая бедренную и большеберцовую кости, и удалите мышечную ткань. Соберите ткани коленного сустава, включая бедренную и большеберцовую кости и окружающие мягкие связки. Инкапсулировать 10%-ным формалином для консервации и фиксации.
После ночной фиксации тканей, заделайте срезы в парафин. С помощью микротома разрежьте вросшие ткани на срезы толщиной 0,4 микро. Подвергните ткани различным техникам окрашивания.
Средняя масса тела мышей КОА была значительно ниже, чем у мышей контрольной группы. Средняя масса тела мышей в группе коллагеназы и наночастиц серебра второго типа была выше по сравнению с мышами КОА. Окрашивание ПЭ показало, что толщина синовиальной оболочки мышей в группе КОА была значительно выше по сравнению с контрольной группой.
Толщина синовиальной оболочки группы, обработанной наночастицами, была уменьшена относительно группы КОА. Сосудистая гиперплазия синовиальной оболочки наблюдалась в группе КОА и была значительно снижена в группе, получавшей наночастицы. Окрашивание Safranin-O выявило разрушенный хрящевой матрикс у мышей KOA, в то время как мыши, обработанные смесью наночастиц коллагена, показали значительно лучший хрящевой матрикс.
Показатели морфологических признаков были выше в группе, получавшей коллаген II, по сравнению с контрольной группой. Иммуногистохимическое окрашивание показало снижение инфильтрации нейтрофилов в синовиальных областях мышей, обработанных наночастицами, по сравнению с группой КОА. Важно избежать блокировки препарата во время инъекции коллагеназы II типа и нескольких наночастиц.
Терапевтический эффект нескольких наночастиц может быть опробован на животных моделях повреждения передней крестообразной связки.
