Мы продемонстрируем простой метод создания и внедрения системы легких ex vivo с нуля. Это обеспечивает доступную и модульную конфигурацию, которую можно реализовать для различных конфигураций. Представленная здесь методика является доступной, модульной и адаптируемой к лабораториям, устанавливающим протокол.
Операция ex vivo может быть использована для дополнения моделей in vivo, чтобы помочь пролить свет на новые механизмы. Эта установка «сделай сам» предназначена для изучения легких в контролируемой среде. Это согласуется с основным направлением исследований нашей лаборатории, которое заключается в изучении различных подходов к улучшению результата после СЛР.
Тем не менее, установка может быть адаптирована к различным исследовательским целям, что делает ее очень универсальной, Хирургия требует базовых знаний анатомии и физиологии дыхания и может быть быстро освоена в соответствии с протоколом. Тем не менее, жизненно важно усердно следовать шагам, описанным в нашем протоколе, и, прежде всего, защищать легкие, особенно при удалении ребер. Чтобы выполнить трахеостомию, щипцами защемите кожу крысы, находящейся под наркозом, над трахеей и разрежьте кожу.
Тупо рассеките мышцу и ткань, чтобы добраться до трахеи, не допуская кровотечения. Затем проведите изогнутые щипцы под трахеей и откройте их, чтобы освободить место для наложения 3-0 швов под ними. Затем предварительно завяжите швы в коробчатый узел.
Сделайте небольшой разрез между хрящевыми кольцами трахеи и вставьте трахеальную канюлю. Завяжите шов, чтобы предотвратить выход воздуха из разреза трахеи и убедиться, что канюля не создает нагрузку на трахею. Как только трахейная канюля будет закреплена, начните вентилировать крысу.
С помощью больших хирургических ножниц и щипцов удалите шерсть с брюшка крысы. Захватите мечевидный отросток щипцами и сделайте небольшой горизонтальный разрез ниже ребер, стараясь сохранить диафрагму в целости. Расширьте горизонтальный срез, чтобы обнажить всю диафрагму.
С помощью шприца 22 калибра введите гепарин в нижнюю полую вену, стараясь не проколоть легкие. Захватите мечевидный отросток щипцами и разрежьте краниально вдоль грудины, постоянно визуализируя легкие, чтобы не допустить их разрезания. Раздвиньте грудную клетку с помощью двух больших щипцов и разрежьте нижнюю полую вену, чтобы усыпить крысу путем обескровливания.
Обрежьте избыток тимуса, чтобы облегчить визуализацию легочной сосудистой системы. Найдите легочную артерию и пропустите под нее небольшие изогнутые щипцы. Снова проденьте шов 3-0 снизу и предварительно завяжите в коробчатый узел.
Затем сделайте небольшой разрез в правом желудочке сердца и вставьте канюлю PA. Закрепите канюлю с помощью шва и начните перфузию с 1,5 миллилитра в минуту. Немедленно иссекайте верхушку сердца, чтобы предотвратить повышение давления в легких.
С помощью небольших изогнутых щипцов разорвите митральный клапан и визуально подтвердите, что щипцы могут беспрепятственно проникать в левое предсердие. Плотно оберните шов 3-0 вокруг сердца ниже предсердия и вставьте канюлю PV в левое предсердие, убедившись, что буфер может вытекать из него, прежде чем перевязывать шов. Затем с помощью ножниц с тупым концом обрежьте лишнюю ткань между грудной полостью и разрезом трахеостомы, чтобы не повредить трахею.
Убедитесь, что трахея ниже трахейной канюли и весь блок сердца и легких видны. Чтобы удалить блок сердца и легких и трахею, возьмитесь за канюлю трахеи и с помощью изогнутых ножниц с тупым кончиком иссеките соединительную ткань за трахеей. Представлена жизнеспособность легких после ишемии и реперфузии.
Самое продолжительное время ишемии для 150 минут реперфузии составляло восемь минут. Крайне важно правильно канюлировать сосудистую сеть, чтобы изолированные легкие оставались жизнеспособными на протяжении всего эксперимента. Легкие остаются неповрежденными после процедуры, что позволяет провести основные измерения, такие как влажный или сухой вес или гистология, после эксперимента.
