우리는 처음부터 ex vivo lung setup을 만들고 구현하는 간단한 방법을 보여줍니다. 이를 통해 다양한 설정에 대해 구현할 수 있는 경제적인 모듈식 설정이 가능합니다. 여기에 제시된 기술은 저렴하고 모듈식이며 프로토콜을 설정하는 실험실에 적용할 수 있습니다.
ex vivo operation은 in vivo 모델을 보완하여 새로운 메커니즘을 규명하는 데 사용할 수 있습니다. 이 DIY 설정은 통제된 환경에서 폐를 연구하도록 설계되었습니다. 이는 CPR 후 결과를 개선하기 위한 다양한 접근 방식을 조사하는 우리 연구실의 주요 연구 초점과 일치합니다.
그러나 설정은 다양한 연구 목표에 맞게 조정할 수 있어 매우 다재다능합니다. 수술에는 호흡기 해부학 및 생리학에 대한 기본 지식이 필요하며 프로토콜에 따라 빠르게 마스터할 수 있습니다. 그럼에도 불구하고 프로토콜에 설명된 단계를 부지런히 따르는 것이 중요하며, 무엇보다도 특히 갈비뼈를 제거할 때 폐를 보호하는 것이 중요합니다. 기관절개술을 시행하려면 마취된 쥐의 피부를 집게로 기관 위쪽에 끼우고 피부를 자릅니다.
근육과 조직을 뭉툭하게 절개하여 기관에 도달하여 출혈이 없도록 합니다. 그런 다음 기관 아래에 구부러진 겸자를 통과시키고 열어 아래에 3-0 봉합사를 통과시킬 수 있는 공간을 확보합니다. 그런 다음 봉합사를 상자 매듭에 미리 묶습니다.
기관의 연골 고리 사이를 작게 절개하고 기관 캐뉼라를 삽입합니다. 기관 절개 부위에서 공기가 빠져나가는 것을 방지하고 캐뉼라가 기관에 부담을 주지 않도록 봉합사를 묶습니다. 기관 캐뉼라가 고정되면 쥐를 환기시키기 시작합니다.
큰 수술용 가위와 집게를 사용하여 쥐의 복부에서 털을 제거합니다. 집게로 xiphoid 돌기를 잡고 갈비뼈 아래를 수평으로 작게 절개하여 횡격막이 손상되지 않도록 주의합니다. 전체 다이어프램이 노출되도록 수평 절단을 넓힙니다.
22 게이지 주사기를 사용하여 폐에 구멍을 뚫지 않도록 주의하면서 하대정맥에 헤파린을 주입합니다. 집게로 시푸스 돌기를 잡고 흉골을 따라 두개골을 자르고 폐를 지속적으로 시각화하여 절단을 방지합니다. 두 개의 큰 집게를 사용하여 흉곽을 벌리고 하대정맥을 잘라 쥐를 절제하여 안락사시킵니다.
폐 혈관 구조를 더 쉽게 시각화할 수 있도록 과도한 흉선을 잘라냅니다. 폐동맥을 찾아 그 아래에 작은 구부러진 집게를 통과시킵니다. 다시 말하지만, 3-0 봉합사를 아래에 전달하고 상자 매듭에 미리 묶습니다.
그런 다음 심장의 우심실을 작게 절개하고 PA 캐뉼라를 삽입합니다. 봉합사를 사용하여 캐뉼라를 고정하고 분당 1.5밀리리터로 관류를 시작합니다. 폐에 압력이 쌓이는 것을 방지하기 위해 심장의 정점을 즉시 절제하십시오.
작은 구부러진 겸자를 사용하여 승모판막을 파열시키고 겸자가 막히지 않고 좌심방으로 들어갈 수 있는지 육안으로 확인합니다. 심방 아래의 심장 주위에 3-0 봉합사를 단단히 감고 PV 캐뉼라를 좌심방에 삽입하여 봉합사를 묶기 전에 완충액이 흘러나올 수 있도록 합니다. 다음으로, 뭉툭한 끝 가위를 사용하여 흉강과 기관 절개 사이의 여분의 조직을 잘라내어 기관이 손상되지 않도록 합니다.
기관 캐뉼라 아래의 기관과 전체 심장-폐 블록이 보이는지 확인하십시오. 심장-폐 블록과 기관을 제거하려면 기관 캐뉼라를 잡고 구부러진 뭉툭한 끝 가위를 사용하여 기관 뒤의 결합 조직을 절제합니다. 허혈 및 재관류 후 폐 생존력이 제시됩니다.
150분의 재관류를 허용하는 가장 긴 허혈 시간은 8분이었다. 고립된 폐가 실험 내내 생존 가능한 상태를 유지할 수 있도록 혈관 조직을 적절하게 캐뉼레이션하는 것이 중요합니다. 시술 후에도 폐가 손상되지 않아 습식 또는 건식 체중 또는 조직학과 같은 기본 측정을 실험 후에 수행할 수 있습니다.
