אנו מדגימים שיטה פשוטה ליצירה ויישום של הגדרת ריאות ex vivo מאפס. זה מאפשר התקנה מודולרית במחיר סביר שניתן ליישם עבור מגוון הגדרות. הטכניקה המוצגת כאן היא זולה, מודולרית וניתנת להתאמה למעבדות המקימות את הפרוטוקול.
ניתן להשתמש בפעולת ex vivo כדי להשלים מודלים in vivo כדי לעזור להבהיר מנגנונים חדשים. מערך DIY זה נועד לחקור את הריאות בסביבה מבוקרת. זה עולה בקנה אחד עם מוקד המחקר העיקרי של המעבדה שלנו, שהוא לחקור גישות שונות כדי לשפר את התוצאה לאחר החייאה.
עם זאת, ניתן להתאים את ההתקנה כך שתתאים למטרות מחקר שונות, מה שהופך אותה לרב-תכליתית ביותר, הניתוח דורש ידע בסיסי באנטומיה ופיזיולוגיה נשימתית וניתן לשלוט בו במהירות על ידי ביצוע הפרוטוקול. עם זאת, חיוני לעקוב בחריצות אחר הצעדים המתוארים בפרוטוקול שלנו, ויותר מכל, להגן על הריאות, במיוחד בעת הסרת הצלעות. כדי לבצע קנה נשימה, לצבוט את העור של חולדה מורדמת מעל קנה הנשימה עם מלקחיים לחתוך את העור.
נתחו בבוטות את השריר והרקמה כדי להגיע לקנה הנשימה, וודאו שאין דימום. לאחר מכן מעבירים מלקחיים מעוקלים מתחת לקנה הנשימה ופותחים אותם כדי לאפשר מקום לעבור 3-0 תפרים מתחת. לאחר מכן קשרו מראש את התפרים לקשר קופסה.
בצע חתך קטן בין טבעות הסחוס של קנה הנשימה והכנס את צינורית קנה הנשימה. קשרו את התפר כדי למנוע מהאוויר לברוח מהחתך בקנה הנשימה וכדי לוודא שהצינורית אינה מעמיסה על קנה הנשימה. לאחר שצינורית קנה הנשימה מאובטחת, התחילו לאוורר את החולדה.
בעזרת מספריים ומלקחיים כירורגיים גדולים, מסירים את הפרווה מבטנה של החולדה. תופסים את תהליך הקסיפואיד בעזרת המלקחיים ומבצעים חתך אופקי קטן מתחת לצלעות, תוך הקפדה על שלמות הסרעפת. הרחיבו את החתך האופקי כדי לחשוף את הסרעפת כולה.
עם מזרק 22 מד, להזריק הפרין לתוך הווריד נבוב נחות, נזהר לא לנקב את הריאות. לתפוס את תהליך xiphoid עם מלקחיים לחתוך גולגולת לאורך עצם החזה, כל הזמן לדמיין את הריאות כדי למנוע לחתוך אותם. פזרו את כלוב הצלעות בנפרד באמצעות שני מלקחיים גדולים וחתכו את הווריד הנבוב התחתון כדי להרדים את החולדה על ידי הרדמה.
יש לחתוך את עודפי בלוטת התימוס כדי לאפשר הדמיה קלה יותר של כלי הדם הריאתיים. אתרו את עורק הריאה והעבירו מתחתיו מלקחיים קטנים ומעוקלים. שוב, להעביר תפר 3-0 מתחת ומראש לקשור לקשר קופסה.
לאחר מכן לבצע חתך קטן לתוך החדר הימני של הלב ולהכניס את צינורית PA. הדקו את הצינורית באמצעות התפר והתחילו לנקב במהירות של 1.5 מיליליטר לדקה. מיד הבלו את קודקוד הלב כדי למנוע הצטברות לחץ בריאות.
באמצעות מלקחיים מעוקלים קטנים, לקרוע את המסתם המיטרלי ולאשר חזותית כי המלקחיים יכולים להיכנס אטריום שמאל ללא חסימה. עטפו בחוזקה תפר 3-0 סביב הלב מתחת לאטריום, והכניסו את צינורית ה-PV לאטריום השמאלי, כדי להבטיח שחיץ יכול לזרום ממנו לפני קשירת התפר. לאחר מכן, באמצעות מספריים קצה קהה, לחתוך כל רקמה עודפת בין חלל החזה לבין חתך קנה הנשימה כדי למנוע נזק בקנה הנשימה.
ודא שקנה הנשימה מתחת לצינורית קנה הנשימה וכל גוש הלב-ריאה גלויים. כדי להסיר את גוש הלב-ריאה ואת קנה הנשימה, החזיקו את צינורית קנה הנשימה והשתמשו במספריים קהות מעוקלות כדי לכרות את רקמת החיבור שמאחורי קנה הנשימה. כדאיות הריאות לאחר איסכמיה ורפרפוזיה מוצגת.
זמן האיסכמיה הארוך ביותר שאפשר 150 דקות של רפרפוזיה היה שמונה דקות. חיוני לסדר כראוי את כלי הדם כדי שהריאות המבודדות יישארו בנות קיימא לאורך כל הניסוי. הריאות נשארות שלמות לאחר ההליך, מה שמאפשר לבצע מדידות בסיסיות כגון משקל רטוב או יבש או היסטולוגיה לאחר הניסוי.
