Progettazione e realizzazione di un modello di perfusione polmonare ex vivo di ratto

Dimostriamo un metodo semplice per creare e implementare da zero una configurazione polmonare ex vivo. Ciò consente una configurazione conveniente e modulare che può essere implementata per una varietà di configurazioni. La tecnica qui presentata è conveniente, modulare e adattabile ai laboratori che impostano il protocollo.

L'operazione ex vivo può essere utilizzata per integrare i modelli in vivo per aiutare a chiarire nuovi meccanismi. Questa configurazione fai-da-te è progettata per studiare i polmoni in un ambiente controllato. È in linea con l'obiettivo principale della ricerca del nostro laboratorio, che è quello di studiare vari approcci per migliorare l'esito dopo la RCP.

Tuttavia, la configurazione può essere adattata per adattarsi a diversi obiettivi di ricerca, rendendola altamente versatile, La chirurgia richiede una conoscenza di base dell'anatomia e della fisiologia respiratoria e può essere rapidamente padroneggiata seguendo il protocollo. Tuttavia, è fondamentale seguire diligentemente i passaggi descritti nel nostro protocollo e, soprattutto, proteggere i polmoni, soprattutto durante la rimozione delle costole. Per eseguire una tracheostomia, pizzicare la pelle di un ratto anestetizzato sopra la trachea con una pinza e tagliare la pelle.

Sezionare senza mezzi termini il muscolo e il tessuto per raggiungere la trachea, assicurandosi che non si verifichi sanguinamento. Quindi passare le pinze curve sotto la trachea e aprirle per lasciare spazio per far passare le suture 3-0 sottostanti. Quindi pre-legare le suture in un nodo a scatola.

Praticare una piccola incisione tra gli anelli di cartilagine della trachea e inserire la cannula tracheale. Legare la sutura per evitare che l'aria fuoriesca dall'incisione tracheale e per assicurarsi che la cannula non metta a dura prova la trachea. Una volta fissata la cannula tracheale, iniziare a ventilare il ratto.

Usando grandi forbici chirurgiche e pinze, rimuovi il pelo dall'addome del topo. Afferrare il processo xifoideo con la pinza e praticare una piccola incisione orizzontale sotto le costole, facendo attenzione a mantenere intatto il diaframma. Allargare il taglio orizzontale per esporre l'intero diaframma.

Con una siringa calibro 22, iniettare l'eparina nella vena cava inferiore, facendo attenzione a non perforare i polmoni. Afferra il processo xifoideo con una pinza e taglia cranialmente lungo lo sterno, visualizzando costantemente i polmoni per evitare di tagliarli. Allargare la gabbia toracica usando due grandi pinze e tagliare la vena cava inferiore per sopprimere il ratto mediante dissanguamento.

Tagliare il timo in eccesso per consentire una più facile visualizzazione del sistema vascolare polmonare. Individua l'arteria polmonare e fai passare sotto una piccola pinza ricurva. Ancora una volta, passa una sutura 3-0 sotto e pre-lega in un nodo a scatola.

Quindi praticare una piccola incisione nel ventricolo destro del cuore e inserire la cannula PA. Fissare la cannula utilizzando la sutura e iniziare a perfondere a 1,5 millilitri al minuto. Asportare immediatamente l'apice del cuore per evitare l'accumulo di pressione nei polmoni.

Utilizzando una piccola pinza curva, rompere la valvola mitrale e confermare visivamente che la pinza può entrare nell'atrio sinistro senza ostruzioni. Avvolgere strettamente una sutura 3-0 attorno al cuore sotto l'atrio e inserire la cannula PV nell'atrio sinistro, assicurandosi che il tampone possa fuoriuscire prima di legare la sutura. Successivamente, utilizzando le forbici a punta smussata, tagliare il tessuto in eccesso tra la cavità toracica e l'incisione della tracheostomia per evitare di danneggiare la trachea.

Assicurarsi che la trachea sotto la cannula tracheale e l'intero blocco cuore-polmone siano visibili. Per rimuovere il blocco cuore-polmone e la trachea, tenere la cannula tracheale e utilizzare le forbici a punta smussata curva per asportare il tessuto connettivo dietro la trachea. Viene presentata la vitalità polmonare dopo ischemia e riperfusione.

Il tempo di ischemia più lungo per consentire 150 minuti di riperfusione è stato di otto minuti. È fondamentale incannulare correttamente il sistema vascolare affinché i polmoni isolati rimangano vitali durante l'esperimento. I polmoni rimangono intatti dopo la procedura, consentendo di effettuare misurazioni di base come il peso umido o secco o l'istologia post-esperimento.