Этот метод увеличивает уровень глюкозы спинномозговой жидкости или спинномозговой жидкости у мышей, не влияя на концентрацию глюкозы в крови. Это помогает исследовать прямое влияние высокого уровня глюкозы в спинномозговой жидкости на функцию мозга животного. Этот метод может создать модели на животных для изучения теологической роли более высокого уровня глюкозы в спинномозговой жидкости в когнитивной дисфункции.
Это привело к открытию новых молекулярных мишеней для улучшения когнитивных функций. Метод также поможет определить, достаточен ли высокий уровень глюкозы в спинномозговой жидкости для опосредования фенотипов нейродегенеративных расстройств у мышей. Необходимо обратить внимание на правильную сборку и подготовку канюли, установку и вставку канюли в мозг в правильных координатах.
Чтобы начать операцию по имплантации осмотического мини-насоса, поместите анестезированную мышь на стереотаксическую раму. Положите голову животного на резец. Накройте нос носовым конусом для поддержания анестезии и подключите поток изофторана к носовому конусу со скоростью от 1,5 до 2%Поместите грелку под мышь, чтобы поддерживать температуру тела.
Продезинфицировав операционную область и сделав разрез, обнажить поверхность черепа шпателем и вытереть кровь, если таковая имеется, ватными кончиками. Используйте прижигатель, если обильное кровотечение. Потрите ватным наконечником, смоченным в 3%-ной перекиси водорода, чтобы обнажить черепные швы.
Работая под микроскопом, обратите внимание на брегму и лямбду, чтобы ориентироваться в координатах черепа. Установите все координаты равными нулю в bregma. С помощью электродрели осторожно и не разрывая твердую мозговую оболочку, сделайте отверстие в координатах 0,5 миллиметра кзади от брегмы и на 1 миллиметр сбоку от средней линии справа.
Вставьте гемостат и аккуратно открывайте и закрывайте его, чтобы получился карман для мини-насоса. Удерживая насос от наконечника модулятора потока, протолкните его через надрезанную кожу в образовавшийся карман. Нанесите немного клея на нижнюю сторону канюли и закрепите ее в держателе канюли.
Убедитесь, что канюля не забита и раствор течет правильно. Затем медленно опустите канюлю через просверленное отверстие, на два миллиметра вентрально к поверхности черепа. Оставьте его там минимум на пять минут, чтобы клей затвердел.
С помощью ножниц обрежьте верхнюю часть канюли, чтобы она не сместилась с поверхности черепа. Покройте канюлю слоем стоматологического цемента для дополнительной поддержки. Для сбора спинномозговой жидкости или спинномозговой жидкости поместите должным образом анестезированную мышь на стереотаксическую рамку.
После фиксации головы на раме, как показано ранее, поверните ручки, чтобы наклонить голову так, чтобы нос был обращен вниз. Продезинфицировав операционную область и сделав разрез, снимите опору с тела мыши и дайте мыши отдохнуть вертикально, чтобы шея была полностью вытянута дорсально. Используя изогнутые тупые щипцы, аккуратно разделите пополам задние мышцы шеи от средней линии, чтобы создать небольшое окно.
Затем с помощью влажного аппликатора с ватным наконечником аккуратно сместите мышцы шеи от средней линии к периферии. Обратите внимание, открыта ли цистерна magna в виде треугольного окна с прозрачной мембраной твердой мозговой оболочки. Поместите узел микроманипулятора на стереотаксическую рамку рядом с мышью, следя за тем, чтобы наконечник капилляра не касался какой-либо поверхности.
Аккуратно разорвите наконечник капилляра, не нарушая настройку. Поверните соответствующие ручки на микроманипуляторе, чтобы медленно выровнять, и переместите наконечник капилляра к большой цистерне. Некоторое сопротивление ощущается, когда наконечник капилляра касается большой мембраны цистерны.
Очень медленно прижимайте наконечник к мембране с помощью ручек, стараясь не повредить кровеносные сосуды в мембране. Когда мембрана прокалывается, спинномозговая жидкость сразу же поступает в капилляр из-за отрицательного капиллярного давления. Оставьте установку на несколько минут, пока в капилляре не соберется примерно 10 микролитров спинномозговой жидкости.
Осторожно извлеките капилляр из шприца и приложите его к дозатору колбы с микроколпачком. Нажмите на колбу, чтобы перенести спинномозговую жидкость в стерильную микроцентрифужную пробирку. Поместите опору под мышь и вращайте стереотаксические ручки, чтобы выровнять голову.
Закройте рану капроновыми швами. Введите 300 микролитров стерильного физиологического раствора подкожно, прежде чем извлекать мышь из аппарата. Обеспечьте послеоперационный уход за животными до тех пор, пока не придет время снимать швы, примерно через 7-10 дней после операции.
Спинномозговая жидкость, собранная через 10 дней после операции, показала примерно шестикратное увеличение уровня глюкозы у мышей, которым вводили 50% глюкозы, по сравнению с мышами, которым вводили спинномозговую жидкость. Однако уровни глюкозы в крови не различались между группами. Опуская канюлю в мозг, втяните ее обратно и проверьте, выходит ли спинномозговая жидкость из отверстия.
Также очень важно правильно идентифицировать цистерну magna и предотвратить загрязнение спинномозговой жидкости кровью. Этот метод также может быть использован для доставки любого лекарства, которое не может пересечь гематоэнцефалический барьер, чтобы проверить его влияние на функцию мозга. Существует очень ограниченное количество животных моделей диабета, и они нарушают гомеостаз глюкозы в периферической среде.
Эта модель, однако, помогает исследовать специфические для мозга изменения регуляции глюкозы в нейронной функции.
