Визуализация ATG9A, многодиапазонного мембранного белка

В нашей лаборатории мы заинтересованы в понимании того, какие липиды и белковые механизмы участвуют в транспортировке везикул ATG9A. ATG9A имеет решающее значение в пути аутофагии для образования и созревания фагофоров. Тем не менее, недавно мы изучали влияние ATG9A на гомеостаз органелл.

Самая большая проблема заключается в том, чтобы раскрыть молекулярные детали того, как функционируют белки и белковые механизмы. Такие технологии, как белковая инженерия, основанная на AlphaFold и крио-ЭМ с высоким разрешением, в настоящее время обеспечивают наибольший прогресс. Работа моей лаборатории позволила получить фундаментальное представление о том, как формируются аутофагосомы.

Эти идеи были подкреплены передовыми методами молекулярной клеточной биологии, такими как описанная здесь. Описаны некоторые недостатки использования определенных белковых меток и то, как поведение ATG9A может меняться в зависимости от локализации метки. Таким образом, либо N, либо C-конец.

Мы также предлагаем способы обнаружения этих недостатков и способы их избежать. Кроме того, мы также обеспечиваем рабочий процесс количественной оценки дисперсии ATG9A воспроизводимым образом. Здесь мы обеспечиваем рабочий процесс от иммунофлуоресценции и визуализации в реальном времени до получения и анализа изображений для анализа рассеивания ATG9 между различными клеточными компартментами.

И мы считаем, что стандартизация конвейеров для анализа изображений является приоритетом для клеточных биологов, чтобы иметь возможность повысить надежность и воспроизводимость наших результатов.