اختبار نشاط Protozoacidal من يجند - lytic هضميدات ضد النمل الأبيض غوت البروتوزوا في المختبر (الثقافة البروتوزوا) و في الجسم الحي (Microinjection في المعى المؤخر النمل الأبيض)

Summary

نقدم إجراءات لإثبات أن يغاندس ربط غشاء سطح هذه هضم السليولوز الأوليات في أمعاء النمل الأبيض الفرموزية الجوفية باستخدام المجهر الفلورسنت ويغاندس أن يقترن الببتيدات lytic تقتل البروتوزوا في المختبر (البروتوزوا اللاهوائية الثقافة) و في الجسم الحي (الحقن في المعى المؤخر النمل الأبيض).

Abstract

نحن نعمل على تطوير مقاربة جديدة لمكافحة النمل الأبيض الجوفية التي من شأنها أن تؤدي إلى تقليل الاعتماد على استخدام المبيدات الكيماوية. النمل الأبيض الجوفية التي تعتمد على الأوليات في hindguts العمال في هضم الخشب بكفاءة. وقد تبين أن الببتيدات Lytic لقتل مجموعة متنوعة من الطفيليات (Mutwiri آخرون 2000) والبروتوزوا أيضا في أمعاء النمل الأبيض والجوفية الفرموزية ، Coptotermes formosanus (Husseneder وكولير 2009). الببتيدات Lytic هي جزء من الجهاز المناعي اللانوعي من حقيقيات النوى ، وتدمير الأغشية من الكائنات الحية الدقيقة (Leuschner وهانسيل 2004). الببتيدات معظم lytic ليس من المرجح أن يضر ارتفاع حقيقيات النوى ، لأنها لا تؤثر على حيادية كهربائيا أغشية الخلايا التي تحتوي على الكوليسترول العالي حقيقيات النوى (Javadpour وآخرون 1996). ويمكن توجيه عمل Lytic الببتيد لأنواع معينة من الخلايا من خلال إضافة ليجند. على سبيل المثال ، أفادت هانسيل وآخرون (2007) التي يمكن استخدامها الببتيدات lytic مترافق مع يغاندس سرطان الخلايا مستقبلات الغشاء لتدمير خلايا سرطان الثدي ، في حين أن الببتيدات lytic وحدها أو مترافق مع الببتيدات غير محددة لم تكن فعالة. الببتيدات Lytic كما تم مترافق للهرمونات البشرية التي تربط لمستقبلات على خلايا الورم لتدمير تستهدف خلايا البروستات وسرطان الخصية (Leuschner وهانسيل 2004).

في هذا المقال نقدم التقنيات المستخدمة للتدليل على وجود نشاط protozoacidal الببتيد lytic (هيكات) إضافة إلى يجند ببتيد سباعي الذي يربط لغشاء سطح البروتوزوا من أمعاء النمل الأبيض والجوفية الفرموزية. هذه التقنيات تشمل استئصال الأمعاء من العمال النمل الأبيض ، والثقافة اللاهوائي للأمعاء البروتوزوا (Pseudotrichonympha grassii ، Holomastigotoides hartmanni ،
Spirotrichonympha leidyi) ، وتأكيد أن يجند المجهرية التي تحمل صبغة الفلورسنت بربط الأمعاء النمل الأبيض وغيرها من الأوليات حرة المعيشة البروتوزوا ولكن ليس للبكتيريا أو أنسجة الأمعاء. نظهر أيضا أن يجند نفسه بالإضافة إلى الببتيد lytic يقتل بكفاءة الأمعاء البروتوزوا النمل الأبيض في المختبر (الثقافة البروتوزوا) والحية (microinjection في المعى المؤخر العمال) ، ولكن أقل من الببتيد bacteriacidal lytic وحدها. خسارة يؤدي إلى موت الكائنات ذات الخلية الواحدة من النمل الأبيض في أقل من أسبوعين.

في المستقبل ، فإننا سوف مهندس وراثيا الكائنات الحية الدقيقة التي يمكن أن يعيش النمل الأبيض في المعى المؤخر وينتشر عن طريق مستعمرة النمل الأبيض بأنه "حصان طروادة" للتعبير عن يجند - lytic الببتيدات التي من شأنها أن تقتل الطفيليات في الأمعاء النمل الأبيض ، وقتل لاحقا في مستعمرة النمل الأبيض . يجند - lytic الببتيدات يمكن أيضا أن تكون مفيدة لتطوير العقاقير لمكافحة الطفيليات.

Protocol

التجربة 1 : استخراج أمعاء النمل الأبيض تحت الظروف اللاهوائية البروتوزوا

1. استخدام مربع المروحة (مختبرات كوي) في علبة القفازات أن يعمم باستمرار من خلال الهواء المجففة ونوع D - Stak باكس حافزا للسيطرة على مستويات الرطوبة والأكسجين ، ودرجات حرارة متفاوتة القضاء. ملء علبة القفازات مع دفق مستمر من النيتروجين لمدة 20 الى 30 دقيقة. رصد مستويات الأوكسجين مع جهاز استشعار الأوكسجين (C - التربيعية ، وشركة) لمدة 1 ساعة. استخدام النيتروجين للوصول والحفاظ على الظروف اللاهوائية عند الحاجة.
2. إعداد Trager يو ....

Discussion

وقد يجند - lytic الببتيدات استخدمت بنجاح لهدف على نحو فعال وتدمير الخلايا السرطانية (هانسيل وLeuschner 2004 ، هانسيل وآخرون 2007). بناء على هذا المفهوم ، قمنا بتطوير يجند ببتيد سباعي التي تربط إلى سطح الأوليات في أمعاء النمل الأبيض الفرموزية الجوفية وبالإضافة إلى الببتيد lyt.......

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Name	Company	Catalog Number	Comments
Sigmacote		Sigma Aldrich	SL-2
EDANS		Novabiochem
Anaerobic glove box		Coy Laboratories, Inc.	Custom made
Intellus environmental controller		Percival	I36NL
PC-10 Glass micropipette puller		Narishige Scientific Instrument Lab	PC-10
Glass needles (Model GD-1, 1 X 900 mm)		Narishige Scientific Instrument Lab	GD-1
Leitz micromanipulators		Vermont Optechs, Inc.	ACS01
Microinjector		Tritech Research, Inc.	MINJ-1
Microcaps		Drummond Scientific Company	1-000-0005
LEICA fluorescence imaging system		Leica	DMRxA2
LEICA dissecting scope		Leica	MZ16
LEICA microscope		Leica	DMLB
Olympus dissecting scope		Olympus	SZ61