반복된 측정에 대 한 수 있도록 전극 이식된 카 테 터와 깨어 있는 쥐에 Cystometric 및 외부 요도 괄약근 측정

요약

이 프로토콜 먼저 외부 요도 괄약근 전극, 그리고 두 번째, 오 줌 방광 및 요도 외부의 함수의 측정 함께 방광 카 테 터의 영구 이식의 수술 절차에 설명 이식된 깨어 동물에 괄약근입니다.

초록

더 낮은 요로 함수는 주로 설치류에 cystometric 방광 기능 분석을 통해 평가 됩니다. 기존의 cystometries는 일반적으로 우 레 탄 마 취 터미널 분석으로 수행 됩니다. 그것은 잘 알려진 마 취 약물 방광 기능을 좌우할 수 있다입니다. 따라서,이 기법의 목표 가볍게 절제 된 깨어 쥐에서 방광 및 외부 요도 괄약근의 cystometric 측정을 수행 것입니다. 이 위해 방광 카 테 테 르 방광 돔에 이식 합니다. 그 후, 두 개의 전극 외부 요도 괄약근에 양측 이식 되 고 접지 전극 응답 골격 근육을 봉합. 방광 카 테 터와 3 개의 전극은 마침내 목 지역으로 피하 터널링 고 마구에 부착. 이 기술은 낮은 요로 더 낮은 요로 기능을 평가 하기 위해 같은 동물에 여러 개의 시간 지점에서 측정할 수 있습니다. 이 기술의 주요 응용 프로그램 동시 오 줌 방광 및 외부 요도 괄약근 기능 깨어 건강 한 쥐에는 질병 또는 상해의 유도 후의 후속 이다. 또한, 이후 더 낮은 요로 모니터링 평가 질병/부상 및 치료 효능을 모니터링 하는 동안 수행할 수 있습니다.

서문

오 줌 저장 및 무효화 기능 및 역 기능 분석, 대부분 연구 설치류 모델을 사용 했습니다. 반사의 순차적 활성화를 통해 방 생산 됩니다. 이러한 반사의 효율적인 배설¹필수적 이다. Cystometric 기록 하는 기술을 신경 제어¹방광 기능을 분석 하기 위한 유용한 도구를 제공 합니다.

쥐에 있는 대부분의 전통적인 cystometries에서 마 취, 주로 우 레 탄은², 단일, 최종 분석으로 행해진다 고 방광에 전적으로 초점. 그러나, neurogenic 더 낮은 요로 기능 장애 (NLUTD) 같은 일부 pathologies에 오 줌 방광 뿐만 아니라 외부 요도 괄약근, 방광 출구는 역 기능^3,4. 이것은 NLUTD 후속, 어려운 경우에 단일 cystometric 측정에서 방광 검사 합니다. 인 간에 게 비교는 신뢰할 수 있는 결과를 얻으려면, 방광 외부 요도 괄약근 기능 및 그것의 상호 작용²정확 하 게 측정 하기 위해 필수적 이다. 또한, 그것은 마 취는 방광 기능^2,,56변경 가능성이 깨어 쥐에 기능 분석을 수행 하는 중요 한. 깨어 있는 동물에 기록 하는 좋은 cystometric 방광 기능과 오작동⁷의 식별을 위한 기초 이다.

작은 동물 cystometry 역 사용 (예를 들어, 고양이 cystometry 역 (CCS)) 작은 깨어 동물⁸cystometric 분석을 수행 하는 단위입니다. 영구 방광 카 테 터 및 이식된 외부 요도 괄약근 전극, 긴 시간 기간²동안 반복 측정을 수행할 수 있습니다. CCS에 대 한 유용한 도구를 제공 하는 따라서, neurogenic 비 및 NLUTD 평가 설치류 모델는 pathomechanisms 짧은 또는 중간 속 행 동안 변경할 수 있습니다. 또한,이 메서드는 restrainer 깨어 있는 쥐가에서 방광 측정을 사용 하 여 인 위 감소 cystometric 분석을 포함 합니다.

이 문서에서 우리 영구적으로 방광 카 테 터와 외부 요도 괄약근 전극, 깨어 있는 쥐에 cystometric 측정 함께 임 플 란 트 수술 접근 방식을 설명 합니다.

프로토콜

여기에서 설명한 모든 절차는 동물 연구에 대 한 오스트리아 정부 윤리 위원회에 의해 승인 했다 (Bundesministerium 위한 Wissenschaft, Forschung und 엔터테인먼트, WF / V /3b) 연구소의 평가 대 한 협회 준수 했다 동물 사용에 대 한 동물 치료 지침입니다. 이 접근 방식을 사용 하는 쥐 여성, 12 주 된 루이스 쥐 했다. 프로토콜을 통해 불 임 악기를 사용 합니다.

1. 재료 준비

1. 카 테 터의 제조
   1. 동물의 크기에 맞게 적절 한 길이 (20-25 cm)에 카 테 테 르 (폴 리 에틸렌 PE-50 튜브)를 잘라.
      참고: 터널링 하 고 쉽게 처리에 대 한 몇 가지 여분의 길이 남겨 주세요.
   2. 플레어 한쪽 둥근된 끝을 라이터. 최종 적절 한와 카 테 터의 무뚝뚝한 끝 확인 하십시오.
   3. 봉기 끝 바로 아래 거짓말까지 2 m m 긴 실리콘 튜브 카 테 터를 놓습니다.
2. 전극의 제조
   1. 20-25 cm는 (동물의 크기에 따라 적절 한 길이)의 소계 코팅 강철 와이어를 준비 합니다.
   2. 실버 와이어 길이 2 cm를 준비 하 고 작은 루프 남아 때까지 끝을 트위스트. 한쪽 끝에 테 플 론 절연의 2mm 떨어져 스트립. 트위스트 실버 와이어 박탈된 강선에 결말 땜 납.
   3. 기존의 매니큐어 코팅 영역에 적용 됩니다. 코팅 지구 4 m m 긴 폴 리 에틸렌 튜브를 준비 하 고 압축 집게에 열을 적용 하 여 끝 인감.

2. 동물 준비

1. 마 취
   1. 칵테일 적절 한 마 취를 사용 하 여 마 취를 일반에 대 한 기관에 의해 승인.
   2. Medetomidine (0.15 mg/kg)와 midazolam (0.08 mg/kg), 펜타닐 (0.01 mg/kg), 마 취 칵테일을 준비 하 고 27 게이지 바늘 1 mL 주사기에 의해 피하 주사.
2. 수술 준비
   1. 전기 면도기, 성 기 영역과 견의 수준에서 다시 지역을 포함 하 여 함께 복 부를 면도.
   2. 복 부를 소독 하 고 70% 에탄올 첫 번째 및 다음 3 번갈아 스크럽 povidone-요오드 솔루션 영역을 목.

3. 방광 카 테 테 르 주입

1. 제 3의 그리고 제 4 젖꼭지 (길이 약 2 ~ 2.5 c m)의 수준에서 낮은 중순 라인 개복 술은 피부와 복 부 근육에 대 한 수술 시저에 대 한 메스를 사용 하 여 수행 합니다.
2. Cranio 꼬리 방향으로 복 벽을 안내 하 여 방광을 노출 하 고 다시 위치 피하기 위해 방광 뒤에 집게의 뒷면을 배치 하 여이 위치에 그것을 수정.
3. 테이퍼 팁 바늘으로 6-0 비 흡수 monofilament 봉합 사를 사용 하 여 방광 돔 주위 지갑 문자열 봉합을 놓습니다.
4. 내 지갑-문자열, 메스 팁 또는 18 G 바늘, 방광 카 테 터를 삽입 하 여 방광 돔 incise (프로토콜 단계 1 참조).
5. 멸 균 생리 0.9% 염화 나트륨 해결책 prefilled 카 테 터를 삽입 하 고 신중 하 게 테의 봉기 오프닝 방광 돔 바로 아래 위치까지 방광 카 테 터를 제거.
6. 지갑-문자열 봉합 테 주위를 확보 하 고 추가 고정을 위한 카 테 테 르 몸 주위 중지 봉합.
7. 천천히 무 균 생리 0.9% 염화 나트륨 해결책으로 카 테 터를 통해 방광을 작성 하 여 방광 돔 통해 누설에 대 한 확인 합니다.

4. 요도 괄약근 전극 이식

1. 3 개의 전극 이식에 대 한 준비 (프로토콜 단계 1 참조).
2. 하나의 전극 미래 null 전극의 추가 확인을 위해 색된 영구 펠트 펜으로 표시 합니다. 전극 70% 에탄올으로 소독.
   참고:는 카 테 터는 열 및 화학 살 균 절차에 적합 합니다. 대신 감기 24 h에 대 한 전극 소독.
3. 복 부 절 개 수술가 위 치 골까지 확장 하지만 음모 관절을 잘라 하지 마십시오.
4. 요도 식별 하 고 무딘 주머니는 요도의 양쪽에 미세 집게를 사용 하 여 만들지만 혈관 또는 신경의 외상을 방지.
5. 이 창에서 요도 가까이 적절 한 지방 주머니를 식별 합니다.
6. 6-0 비 흡수 monofilament 봉합 사를 사용 하 여 적절 한 지방 주머니에 양측 전극 수정.
   참고: 전극의 최종 위치는 요도의 중간 영역에서 양자 해야 합니다.
7. 묶어 6-0 비 흡수 monofilament 봉합 함께 2 개의 전극.
8. 요도의 거리 내에서 복 벽 근육을 표시 null 전극 봉합 모든 3 개의 전극 하나의 봉합 사를 함께 묶어.

5. 터널링

1. 터널링에 대 한 견 사이 작은 피부 절 개를 확인 합니다.
2. 목에 전극 와이어를 터널 정확한 위치에 대 한 최종 점검을 할 고 터널링 후 전극의 위치를 확인 합니다.
3. 터널 방광 카 테 터 견 수준-방광 왜곡을 피하기 위해 카 테 터를 터널링 하는 동안 방광에 주의. 이 위해 방광의 왜곡을 피하기 위해 방광 돔 들어가면서 테를 잡으십시오.
4. 4-0 polyfilament 흡수 봉합으로 연속 또는 중단 바늘으로 복 부 근육을 닫습니다. 중단된 매트리스 봉합 하 여 피부 절 개를 닫습니다.
5. 전극 와이어 및 카 테 터의 최대한 팽창 하 그것의 전체 길이에 동물을 스트레칭.
6. 어깨 근육 봉합 침 몰 하 여 카 테 터 및 전극 와이어를 해결.
7. 4-0 봉합으로 단일 스티치에 의해 피부를 닫습니다.

6. 마구 피팅

1. 동물의 머리 위로 마구 당겨 동물을 마구 하 고 두 개의 실리콘 스트립 사이 끝 위치를 앞 발을 당겨 있습니다. 배포자와 수술 전에 동물의 무게에 의해 마구 크기를 확인 합니다.
2. 전극 와이어의 크기를 조정 하는 드릴으로 마구 및 주문 품 구멍을 통해 전극의 중앙 구멍을 방광 카 테 터 터널.
3. 실리콘 스트립을 당겨 하네스를 조정 합니다. 그것은 너무 느슨한 하네스를 조정 하지만 일부 공간 쥐의 이동 능력을 유지 하기 위해 유지.
4. 케이블 스트랩 실리콘 스트립을 해결 하기 위해 사용 합니다.
5. 3 cm 위의 방광 카 테 터의 길이 잘라 하네스, 23-G 마 개에 연결 하 고 마지막으로 프로그램을 수정.

7. 전극 커넥터의 제조

1. 3 개의 작은 열 수축 튜브 (null 전극에 대 한 다른 색)을 준비 합니다. 적절 한 큰 크기에서 두 개의 추가 열 수축 튜브를 준비 합니다.
2. 나중에 연결할 여성 플러그 없이 너무 느슨하거나 너무 짧은 수 최적의 길이로 전극 와이어의 길이 단축. 3 개의 와이어 (약 2 m m), 테 플 론 절연을 벗기십시오 고 문자열로 강철 와이어 트위스트.
3. 모든 와이어에 큰 열 수축 튜브를 놓고 개별적으로 모든 3 개의 와이어에 대 한 작은 튜브 놓고 null 전극에 대 한 컬러 튜브를 사용 합니다.
4. 남성 3-연결-플러그 전극 땜 납. 중간에 null 전극 배치 하 고 3 개의 작은 개별 튜브 위의 납땜 영역 축소.
5. 남성 플러그 테두리를 개별 튜브 엔딩의 끝에 큰 튜브와 마지막 큰 튜브의 첫 번째를 축소 합니다.
6. 암 커넥터 하네스, 그리고 수정에 더 안전에 대 한 테이프의 조각을 고정 하 남성 플러그를 연결 합니다.

8. 수술 후 관리

1. 외과 영역을 청소 하 고 povidone-요오드 소독.
2. 생리대까지 깨어에 동물을 놓고 물 대체, 동안에 그리고 수술 후 현지 동물 보호 지침에 따라 0.9% 염화 나트륨 해결책을 제공 합니다.
3. 진통제를 관리 (meloxicam 1 mg/kg)과 항생제 (sulfadoxinum 200 mg, trimethoprimum 40 mg, 15 mg/kg) 결합 된 주입 솔루션으로 피하. 매일 두 번 (아침과 저녁), 진통제를 주고 5 연속적인 일 동안 항생제, 하루에 한 번 줄.
4. 주당 2 ~ 3 주사에 모든 후속 기간 동안 동일한 복용량에 항생제를 계속.
5. 마구의 적절 한 피팅을 위해 매일 확인 하 고 특히 목의 수술 필드 검사 수행. 면 그것은 너무 꽉 실리콘 스트립에서 신중 하 게 당겨 하네스를 조정 합니다.
6. 봉쇄를 피하기 위해 주에 한 번씩 정기적으로 테를 플러시.

9입니다. Cystometric 측정을 위한 준비

1. 수술 후 6 일 후 첫 번째 cystometric 측정을 수행 합니다.
   참고: 이전 측정 카 테 테 르 주입 때문에 진통 약물 및/또는 urothelial 자극에 의해 좌우 될 수 있다.
2. 메인 스위치, 컴퓨터, 그리고 EMG 앰프를 켭니다.
3. 주사기 펌프를 실내 온도 따뜻하게 0.9% 염화 나트륨을 채우십시오. 3 방향 커넥터 하나 다른 펌프에서 시작 내림차순 방식으로 열고 튜브를 플러시.
   참고: 확인 신중 하 게 나머지 공기 거품으로 거품 cystometric 측정을 변경할 것입니다.

10입니다. 교정

1. 프로그램 uroflowmeter 소프트웨어를 시작 하 고 교정에가 서.
2. 펌프와 동물에 대 한 3 방향 커넥터를 닫습니다.
3. 연결 된 압력 계 밸브 열고 프로그램에서 0을 누릅니다.
4. 100 mmHg로 압력 계에 압력을 조정 하 고 프로그램에서 100 mmHg 버튼을 누릅니다. 보도 교정 조정을 하기 확인 합니다. 창이 자동으로 닫힙니다.
5. 밸브는 압력 계를 닫고 측정을 위한 준비를 동물에 펌프에서 3 커넥터를 엽니다.

11. 동물 데이터베이스 (DB 동물)

1. 동물을 등록 하 게 동물 간결한 id입니다.
2. 스키, 치료의 시작, 카 테 테 르 주입, 실험적인 그룹, 및 동물의 생년월일의 날짜의 날짜와 같은 추가 데이터를 입력 합니다.
3. 데이터를 마지막으로 로그를 "기록 저장"을 눌러 하 고 파일을 저장 합니다.

12. 녹음 전에 측정 설정

1. 시작 버튼을 눌러 소프트웨어 프로그램을 시작 합니다.
2. 동물을 선택 하 고 자체 규모와 제로 압력을 누릅니다.
   참고: 주의 restrainer에 동물을 배치 하는 동안 케이블 붙어 그런 EMG 케이블의 와이어의 제거 발생할 수로.

13. 동물 준비

1. 카 테 터 플러그를 제거 하 고 마구에서 EMG 플러그를 분리 하십시오.
2. restrainer에 쥐를 넣어. restrainer 닫고 마구 클램프 잠금.
3. 카 테 터와 EMG는 restrainer에서 플러그를 얻을.
4. 고양이 단위로 restrainer 장소입니다. 튜브를 통해 꼬리를 넣고 움직임을 피하기 위해 테이프와 튜브를 수정.
5. 녹음 여성 EMG 커넥터 남성 EMG 플러그를 연결 합니다.
6. 0 압력을 한 번 더 누르고 작성/기록 관 카 테 터를 연결할. 소프트웨어에서 압력을 확인 하십시오.
   참고: 압력 긍정적인, 5-10 cm H₂O 기준선에 주위 해야 합니다. 압력 부정적인 경우에, 카 테 터는 정 맥에서 분리, 제로 압력 누르고 카 테 터를 다시 연결.

14입니다. 녹음

1. 카 테 터와 EMG 케이블 연결 실행된 펌프와 녹음을 누릅니다.
2. 충전 속도 μ/분에서 실험 요구에 적응.
3. 참고 시간 녹음 시작 및 로그도 서에 실내 온도.
4. Cystometric 녹음을 중지 하려면 실행을 누르면 펌프 펌프를 중지 하 고 다시 한 번 녹음을 누릅니다.
   참고: 펌프 해제 되며 펌프에 녹색 표시등이 꺼져.
5. 테 고 23 G 마 개 플러그를 사용 하 여 카 테 터 끝을 닫습니다. EMG 케이블을 분리 합니다.
6. restrainer의 전면 열고는 restrainer에서 쥐를 안내 합니다.
   참고: 신중 하 게, 쥐를 처리 하 고 전선 케이블의 모든 잠금을 모니터링 합니다.
7. 테 하네스 다시 연결 합니다. 하네스, EMG 플러그를 다시 연결 하 고 플러그 주위에 테이프의 조각을 넣어.
   참고: 경우 동물 병 적인 낮은 요로 상태, 방광의 overdistention를 방지 하려면 수동으로 끝에 방광을 표현 한다.
8. 동물의 집으로 다시 놔입니다.
9. 눌러 종료 하 여 프로그램을 닫습니다.
10. 청소 restrainer와 비 커.
11. 펌프와 동물 콘센트에 3 방향 커넥터를 닫습니다.
12. 컴퓨터, EMG 단위와 메인 스위치를 통해 시스템을 종료 합니다.
    참고: 데이터 측정된 쥐 ID의 하위 폴더 파일 "로그 데이터" 별도 폴더에 저장 됩니다. 단일 녹음 단일 쥐 ID 폴더에 날짜별으로 정렬 됩니다.

결과

깨어 cystometric 측정의 과정을 보여주는 회로도 그림 1 에서 제시 하 고 방광 카 테 테 르 주입에 대 한 내부 해부학 그림 2에 표시 됩니다. 수술 수술 후 진통 약 2 헤 고 항생제, 프로토콜에 설명 된 대로 커버 통증과 감염 수술 후 5 일 이상. 통증의 흔적 그 후 발견 되었다. 복 부, 복 부 봉합, 그리고 목 봉합의 두 번 매일 주의 검?...

토론

이 프로토콜 영구 카 테 터와 요도 괄약근 전극 이식 기술 깨어, 가볍게 절제 된 쥐 오 줌 방광의 동시 분석 모두를 포함 하 여 기록 하는 cystometric의 수술 절차에 설명 하 고 외부 요도 괄약근입니다.

수술 하는 동안 중요 한 단계는 주의 방광 카 테 터, 누설 및 광범위 한 조작을 피하 이식 합니다. 또한, 요도 외부 괄약근에 양측 전극의 정확한 주입은 외부 요도 괄약근의 사운?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Polyethylene tubing PE 50	Becton Dickinson	427411	Catheter
Prolene 6-0 (BV-1, 9.3 mm, 3/8c)	Ethicon	EH7403H	Suture
Teflon coated steel wire	Cooner wire	AS631	Electrode material
Silver wire 0.250 mm	World Precision Instruments	AGW1030	Electrode material
Rotilabo - PVC tube	Carl Roth	97241	Harness
Vicryl rapide 4-0 (P-3, 13 mm, 3/8c)	Ethicon	V4940H	Suture
Quick Connect Single Harness	SAI Infusion Technologies	QCH-23CW	Harness
Shrinking tubes	ChiliTec	17894	Electrode soldering
Soldering wire Pb60 Sn40	Stannol	LD0029	Electrode soldering
Fluxing agent 157	Castolin Eutectin	157 0150	Electrode soldering
Conn Unshrouded Header HDR 3 POS, 2.54mm Solder ST Thru-Hole Box	Preci-dip	801-87-050-10-001101	Electrode soldering
Conn Socket Strip SKT 50 POS 2.54mm, Solder ST Thru-Hole Box	Preci-dip	890-18-003-10-001101	Electrode soldering
Rat Cystometry Package (contains pump, scale, pressure transducer, hardware for cystometric analysis)	Catamount Research and Development Inc.	CAT-CYT-R
Differential amplifier with active headstage	AD instruments	DP-311	EMG amplifier
Restrainer Medium size for rats 200-300 g	emka Technologies	HLD-RM
Uro Dyn Software	Zürich of University		MTA-based
Female rats (Strain Lewis) 12 weeks of age	Charles River, Sulzfeld, Germany		animals