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Cancer Research

Analyse cytométrique en flux de biomarqueurs apoptotiques dans les cellules cancéreuses SiHa traitées à l’actinomycine D

Published: August 26th, 2021

DOI:

10.3791/62663

1Department of Chemical Pathology, Faculty of Health Sciences, University of Pretoria, 2Tshwane Academic Division, National Health Laboratory Service

Abstract

Les biomarqueurs de l’apoptose ont été étudiés dans des cellules cancéreuses SiHa traitées à l’actinomycine D à l’aide d’un cytomètre de flux de paillasse. Les biomarqueurs précoces (annexine V et potentiel de la membrane mitochondriale) et les biomarqueurs tardifs (caspases 3 et 7 et dommages à l’ADN) de l’apoptose ont été mesurés dans des cultures expérimentales et témoins. Les cultures ont été incubées pendant 24 heures dans un incubateur humidifié à 37 °C avec 5% de CO2. Les cellules ont ensuite été détachées à l’aide de trypsine et énumérées à l’aide d’un test de numération cellulaire cytométrique en flux. Les cellules ont ensuite été analysées pour l’apoptose à l’aide d’un test d’annexine V, d’un test de potentiel transmembranaire électrochimique mitochondrial, d’un test de caspase 3/7 et d’un test de dommages à l’ADN. Cet article fournit un aperçu de l’apoptose et de la cytométrie en flux traditionnelle, et élabore des protocoles de cytométrie en flux pour le traitement et l’analyse des cellules SiHa. Les résultats décrivent des données expérimentales positives, négatives et sous-optimales. L’interprétation et les mises en garde relatives à l’analyse cytométrique en flux de l’apoptose à l’aide de cette plateforme analytique sont également abordées. L’analyse cytométrique en flux fournit une mesure précise des biomarqueurs précoces et tardifs de l’apoptose.

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