Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bu çalışma, dişi sıçanları içeren deneysel tasarımlarda göz önünde bulundurulması gereken önemli faktörleri detaylandırmaktadır. Daha geniş anlamda, bu veriler damgalamayı azaltmaya ve daha kapsayıcı teşhis ve müdahale araçlarının geliştirilmesine yardımcı olmaya hizmet eder.

Özet

Mevcut metodoloji, dişi Sprague Dawley (SD) ergen sıçanlarının östrus döngüsünü izlemek için tekrarlanabilir, standartlaştırılmış ve uygun maliyetli bir yaklaşım ortaya koymaktadır. Bu çalışma, hormonal siklusların karmaşıklığını ve güvenilir ve geçerli bir izleme tekniği oluşturmak için gereken geniş anlayış spektrumunu göstermektedir. Temel deneysel tasarım ve prosedürel unsurların derinlemesine incelenmesi yoluyla, döngünün bu tanımı ve temel ilkeleri, gelecekteki çoğaltma için yanlış anlamaları daha iyi anlamak ve yapıbozuma uğratmak için bir çerçeve sağlar.

Vajinal lavaj kullanan numune toplama sürecinin bir taslağı ile birlikte, prosedür, dört aşamalı proöstrus, östrus, metestrus ve diestrus modeline veri kategorizasyon mekanizmasını açıklar. Bu aşamalar, vajinal sıvı durumunun, mevcut hücre tiplerinin, hücre düzenlemesinin ve toplama sırasındaki hücre miktarının 4 kategorize edici belirleyicisini kullanan yeni bir önerilen yaklaşımla karakterize edilir. Her aşamanın varyasyonları, olumlu ve olumsuz örnekler, döngüsellik ve asiklik arasındaki ayrım ve toplanan kategorizasyon bileşenlerinin grafik tasvirleri, verilerin etkili yorumlayıcı ve örgütsel uygulamalarının yanında sunulmaktadır. Genel olarak, bu araçlar ölçülebilir veri aralıklarının ilk kez yayınlanmasına izin vererek çoğaltma üzerine kategorizasyon faktörlerinin standartlaştırılmasına yol açar.

Giriş

Yeni katkılar
Kemirgen östrus döngüsü, sağlığın temel bir göstergesi olarak tanımlanmıştır. Bununla birlikte, araştırmacıların bilinçsiz önyargıları ve kadın bedeni ile ilgili yanlış yorumlar, bilim camiasını engellemektedir. "Estrous" kelimesinin etimolojisi, aşağılık ve olumsuzluk duygusunu ima eder. Euripides bu terimi "çılgınlık" ya da deliliği, Homeros paniği ve Platon da irrasyonel bir dürtüyü tanımlamak için kullanmıştır. Bu çalışma, bu ilkel perspektiflerin mevcut bilimsel topluluğu nasıl etkilediğini vurgulamakta ve bu endişeleri, daha kapsamlı bir yaklaşım için kapsamı genişletilmiş, daha önce çalışılan yöntemlerin güncellenmiş bir kombinasyonu olan yeni bir mozaik paradigması aracılığıyla ele almaktadır.

Bu tekniğin incelenmesi ve kullanılması, öncelikle, standartlaştırılmış ve kapsamlı bir izleme tekniği olmadığı ve veri yorumlama uygulamalarının belirsiz olabileceği için gereklidir. İkincisi, östrus döngüsü özellikleri, çalışılan bireysel sıçanlara bağlı olmasına rağmen, genellikle evrenselleştirilmiştir. Üçüncüsü, hormonal döngüler rutin ve faydalı süreçler olsa da, 'İnsanlara Çeviri' bölümünde araştırılan tehlikeli damgalama ile çevrilidir. Bu çalışma, bu üç konuyu üç şekilde ele almayı amaçlamaktadır: (A) derinlemesine bir östrus döngüsü izleme tekniğini tanımlayarak ve sonuçların nasıl yorumlanabileceğini açıklığa kavuşturarak, (B) her döngünün bütünlüğünü ve bireyselliğini koruyan yöntemleri ana hatlarıyla belirterek ve (C) kanıtlanmamış uygulamaları sürdüren yanlış anlamalara dikkat çekerek.

Bu çalışma aynı zamanda, yetişkinlikte çeşitli davranışsal, anatomik ve fizyolojik belirtilere ışık tutan önemli gelişimsel değişikliklerle işaretlenmiş bir dönem olan ergen sıçanlara odaklanması bakımından da benzersizdir1. Ortak önyargıları yapıbozuma uğratırken, az araştırılmış bir popülasyonda hormonal döngüleri izlemek için standartlaştırılmış bir deneysel tasarım oluşturmak, güvenilir ve geçerli hormonal korelasyonların geliştirilmesine izin verecektir 2,3,4 ve duruma bağlı döngü bozulmalarının belirlenmesi 5,6,7,8,9,10 . Nihayetinde, bu yenilikler çeşitli sağlık endişelerinin tanı kriterlerini, tedavilerini ve müdahalelerini genişletmeye hizmet eder.

Temel tanımlar ve kullanımlar
Östrus döngüsü, üç salınımlı kadın cinsiyet steroid hormonuna yanıt olarak ortaya çıkan dinamik fizyolojik süreçlerin bir koleksiyonudur: östradiol, lötenize edici hormon (LH) ve progesteron (Şekil 1A, B). Endokrin ve merkezi sinir sistemi arasındaki etkileşimler, çoğunlukla 4-5 gün boyunca devam eden ve cinsel olgunlaşmanın başlangıcından üreme yaşlanmasına ve / veya kesilmesine kadar tekrarlayan döngüyü düzenler. Hormon seviyelerine göre ayrı kategorilere ayrılır - en yaygın olarak dairesel bir şekilde ilerleyen diestrus (DIE), proöstrus (PRO), östrus (EST) ve metestusun (MET) 4 aşamasına ayrılır. Bölüm sayısı, çalışmanın niteliğine bağlı olarak 3 aşama11 ila 13 aşama12 arasında değişebilir13. Daha düşük sayıda bölüm genellikle MET'i bir aşama olarak hariç tutar ve kısa süreli bir geçiş dönemi olarak sınıflandırır. Daha yüksek sayı tipik olarak, tümör gelişimi veya spontan psödogebelik, embriyonik implantasyon olmadan gebeliğin fizyolojik durumu12,14,15 gibi fenomenlerin daha yakından incelenmesine izin veren alt bölümleri içerir.

Bu çalışmada, evreler, mevcut 3 kategorize edici determinant-hücre tipi (ler), hücre düzenlemesi ve hücre miktarı olarak adlandırılan vajinal kanalın bileşenleri aracılığıyla tanımlanmıştır (Şekil 2A-D). Bu çalışmada vajinal sıvının durumu izlenmemiş olsa da, dördüncü kategorize edici bileşen olarak dahil edilmesi önerilmektedir. Vajinal sıvının incelenmesi hakkında daha fazla bilgi referans listesi16'da bulunabilir. Kategorize edici bileşenler, günümüzde östrus döngüsü izlemede önerilen birincil teknik olan vajinal lavaj yoluyla hücrelerin çıkarılmasıyla incelenebilir. Her evredeki derinlemesine fizyolojik süreçler bu çalışmanın kapsamı dışında kalırken, literatürde daha fazla bilgi bulunabilir17.

Bu östrus döngüsü izleme tekniğinin kullanımı ve sürekli gelişimi, seks steroid hormonları ile kardiyovasküler sistem 18, endokrin sistem 8 ve merkezi sinir sistemi19,20,21 gibi vücut sistemlerinin işlevi arasındaki bağlantılara dayanmaktadır. Aynı zamanda, dişi kemirgenler22,23,24,25 dahil olduğunda östrus döngüsü izleme her zaman gerekli olmayabilir. Daha ziyade, öncelikle belirli bir çalışma alanında cinsiyet farklılıklarının rapor edilip edilmediğini düşünmek önemlidir, bu da yayınlanmış incelemelerde daha fazla araştırılabilir22,23. Efroz döngü izleme, geniş bir araştırma araştırması yelpazesinde hayati öneme sahip olsa da, dişi kemirgenlerin deneylere dahil edilmesinin önünde bir engel olarak görülmemelidir. Bu teknik karmaşık ve zaman alıcı görünse de, araştırmacıya bağlı olarak prosedürün tamamlanması 15 dakikadan az sürebilir ve uygun maliyetlidir. Genel olarak, dişi kemirgenlerin bilimsel çalışmalara dahil edilmesi, vücut sistemlerinin, çeşitli koşulların ve patolojilerin ve genel sağlığın anlaşılması için avantajlıdır, çünkü bu gelişmeler esas olarak erkek vücudu şablonuna dayanmaktadır.

Kemirgenlerde evrensel parametreler ve doğal değişkenlikler
Standart döngü modellerini tanımlamak, karşılaştırmalı ve analitik amaçlar için parametreleri ayarlamak ve anormallikleri ve aykırı değerleri tespit etmek için "tipik" olarak görülen yönler için aralıklar oluşturmak gereklidir. Aynı zamanda, her sıçanın döngüsünün benzersiz olduğunu ve hayvan suşuna, fizyolojik süreçlere ve çevresel koşullara dayalı sapmaların beklendiğini bilmek de önemlidir. Aslında, östrus döngüsünün en "normal" yönlerinden biri değişkenliktir. Bu, 3-38 gün aralığında26,27 olan toplam döngü uzunluğunda görülür; 32-34 gün ile birden fazla hafta arasında değişebilen cinsel olgunlaşma yaşı28,29,30; döngüsel olmayan11 ve kategorize edici belirleyici kalıplar11,13 olarak kabul edilir. Genel olarak, östrus döngüsü için evrensel bir şablon yoktur ve bunu hem bilimsel topluluğa hem de genel halka çevirmek deneysel sürecin önemli bir parçasıdır.

Deneysel zaman noktaları ve gelişim yaşı
Bu değişkenlik ilkesini tanımak, güvenilir ve geçerli bir deneysel tasarım oluşturmaya yardımcı olur. Örneğin, östrus bisiklet izlemenin başlangıcı, sıçanların çevresel ve fizyolojik faktörlere bağlı olarak değişen anatomik ve fizyolojik gelişimine dayanır. İzleme, vajinal kanalın iç kısmına giden vulva ile çevrili dış vajinal delik olan vajinal açıklığın (VO) gelişmesine kadar başlayamaz (Şekil 3A-D). VO genellikle 32 ila 34 günlük yaşlar arasında tamamen gelişirken, her bir konu için bireyselleştirilmiş kalır ve süreç hakkında çok şey bilinmemektedir. Bu açıklık, östradiol 31'in artışı, hipotalamik-hipofiz-yumurtalık ekseninin olgunlaşması 32 ve sıçanlarda ilk yumurtlama 17,33,34,35 ile bağlantılı olan cinsel olgunlaşmanın başlangıcını tanımlamak için kullanılmıştır. Bununla birlikte, son yayınlar, olumsuz ortamlarda hormonal ve gelişimsel olaylardan ayrılabileceği için üreme gelişiminin yalnızca dolaylı bir belirteci olduğunu bulmuştur31 ve cinsel olgunlaşmadan ziyade östradiol seviyelerindeki değişiklikleri temsil edebilir33. Bu nedenle, gelişimsel yaşı belirlemek için sadece VO'ya güvenilmemesi ve östrus döngüsü izleme36 için bir niteleyici olarak değil, aynı zamanda cinsel olgunlaşmanın başlangıcını işaretlemek için ilk EST aşamasının görünümünü ve epitel hücrelerininkornifikasyonunu 30 olarak kullanmanız önerilir.

Vücut ağırlığı,kemirgenlerde 30,37 ergenlik döneminde gelişim yaşı ile özellikle ilişkilidir ve bu nedenle bu dönemde gelişim yaşının belirlenmesinde de yardımcı olabilir. Bu fenomenle ilgili önerilen mekanizmalar, büyüme hormonu gibi üreme gelişimi için gerekli hormonların uyarılmasını ve iştah düzenleyicisi leptin30 tarafından hipotalamik-hipofiz adrenal (HPA) ekseninin inhibisyonunu içerir. Bununla birlikte, türler arasında sıçanlar ve satıcı sağlayıcılar arasında görülen büyük varyans nedeniyle bu önlemin gelişim yaşının tek göstergesi olarak kullanılması önerilmez38. VO ve vücut ağırlığının gelişiminde görülen değişkenlik, kavramın genel deneysel süreçteki önemini örneklemektedir.

İnsanlara çeviri: kültürel ve bilimsel bağlamlar
Hayvan-insan üreme çalışmalarının translasyonel ilişkisi çift yönlüdür. Hayvan temelli çalışmalardan elde edilen sonuçlar, insan süreçlerinin nasıl değerlendirildiğini, yaklaşıldığını ve analiz edildiğini etkiler39. İnsan üreme sisteminin algılanması ve bununla ilgili süreçler, hayvanların nasıl çalışıldığını etkiler. Aslında, bu alanda daha fazla araştırma için en yüksek sesli göstergelerden biri, bilimsel süreci etkileyen hormonal döngülerle ilgili önyargılı sosyokültürel inançlardan kaynaklanmaktadır. Bu sözleşmelerin çoğu, menstrüasyonu tartışmaya yönelik genel bir kültürel isteksizlikten türetilmiştir ve bu da iyi kanıtlanmış bilgilerde bir veri boşluğuna yol açmıştır40,41. Bunun, raf yüksekliğinden ve akıllı telefon boyutundan polis vücut zırhı takılmasına ve kaçırılan kanser teşhislerine kadar küçükten ölümcüllüğe kadar uzanan bir dizi sonucu vardır42.

Menstrüasyonun sağlıksız, yıkıcı ve toksik olarak tanımlanması - saygın metinlerde, medyada, sözlüklerde ve tıbbi öğretilerde görülür - bilimsel yayınlar tarafından korunmaktadır. Bu, hormonal döngülerin yanlış ve önyargılı tanımları, üreme sisteminin nöroendokrin muadillerinden ve çevresel etkilerden izole edilmesi ve bir döngünün tamamlanmasının "gebe kalmama" olarak indirgemeci bakış açısıyla ortaya çıkar43,44. Bu, hormonal döngüleri etkileyen dış değişkenlerin ihmal edilmesi, yalnızca anatomik gelişmelere dayanarak başlangıç ve bitiş noktalarının belirlenmesi ve döngü ilerlemesinin dairesel değil doğrusal bir şekilde ölçülmesi gibi sağlam olmayan deneysel uygulamaların yaratılmasına yol açmaktadır. Sosyokültürel faktörler ve biyolojik sonuçlar arasındaki doğrudan korelasyona rağmen, bilimsel literatürde sıklıkla dikkate alınmamaktadır. Daha bütünsel yayınların incelenmesi yoluyla43,44,45, araştırmacılar bu damgaları yapıbozuma uğratabilir ve daha güvenilir ve geçerli deneysel tasarımlar oluşturabilirler.

Protokol

Bu protokolde özetlenen tüm kullanım ve prosedür yöntemleri, Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) hayvan bakımı ve kullanımı kılavuzlarıyla uyumludur ve Pepperdine Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) ve UCLA Şansölyesi Hayvan Araştırma Komitesi (ARC) tarafından onaylanmıştır.

1. Hayvan bakımı ve kullanımı

  1. Güç analizine göre sayılarla dişi sıçanlar ve Whitten etkisini veya daha tutarlı döngüyü teşvik etmek için erkek sıçanlar elde edin46. Bilinen veri tabanlarında çalışmanın amacına göre suşu belirleme47.
    NOT: Mevcut veriler, işbirlikçi bir çalışmanın parçası olarak hem Pepperdine Üniversitesi hem de UCLA laboratuvarlarında bulunan erkek SD sıçanlarının varlığında kadın ergen SD Uluslararası Genetik Standardizasyon Programı'nın (IGS) verilerini yansıtmaktadır. Bu sıçanlar 28 günlükken ayrı gruplar halinde geldiler ve 34 günlükken (7 günlük bir alışma periyodunu takiben) akut ve kronik seviyelerdeki farklılıkları göstermek için östrus döngüsü ilerlemesi 10 veya 20 gün boyunca izlendi.
  2. İşlemden önce, taşıma ve yeni ortama uyum sağladıktan sonra fizyolojik stabilizasyon için bir karantina ve / veya alışma süresi bekleyin.
    NOT: 3 günlük minimum süre belirtilmiş, 7 günlük süre 48,49,50,51,52 önerilmiştir. Genel olarak, bu ulaşım koşullarına, hayvan suşuna ve çalışma hedeflerine bağlıdır.
  3. Bir alışma periyodu kullanılarak stresin azaltılmasını sağlayın, çünkü stres uygun üreme sisteminin işleyişini bozabilir53. Bununla birlikte, onu ortadan kaldırmaya çalışarak aşırı telafi etmeyin, çünkü ılımlı miktarda stres hayvanların refahı için faydalıdır51.
  4. Sıcaklığa (68-79 °F, yani 20-26 °C) ve nem kontrollü (%30-70) bir ortamda konakçı sıçanlar, vivaryum veya laboratuvar yöneticilerine başvurarak bu özellikleri sağlarlar. Şirket web sitesinde listelenen besin bileşenleri ve haftada bir kez kafes temizliği ile su ve chow ad libitum dağıtın.
    NOT: Bu çalışmada, sıçanlar 19 "x 10" x 8" şeffaf yeniden kullanılabilir plastik kafeslerde cinsiyete göre ayrılmış 2'li gruplar halinde barındırıldı ve haftada bir kez değiştirilen mısır koçanı yataklarına erişebildi. Sıcaklık 70 ° F'de ve nem% 35-79'da, ortalama% 62 oranında tutuldu.
  5. Biyolojik tepkilerin değişmesine neden olabilecek düşük bağıl nem seviyelerinin ve aşırı sıcaklıkların kanıtı için kuyruk ve ayak parmaklarının ringtail veya iskemik nekrozunun gelişimini kontrol edin.
    NOT: Sıcaklık ve nem, üreme sistemi, cinsel olgunlaşma ve östrus döngüsellik54,55,56,57,58 için önemlidir.
  6. Laboratuvar alanı boyunca zaman kontrollü bir ışık: karanlık sistemi üzerinde hareket eden eşit miktarda ışık kaynağı biriktirerek konut alanı boyunca doğru ve dengeli aydınlatma sağlayın.
    NOT: Burada, 06:00-18:00 saatleri arasında ışıklar açık olan 12:12 saatlik bir ışık:karanlık döngüsü, 2.550 lümenlik Lineer LED ampuller tarafından kontrol edildi.
  7. Hayvanların pigmentasyonu, yaşı, suşu, cinsiyeti ve hormonal durumunun varyasyonlarına bağlı olaraksağlanan lüks gereksinimleri 52'ye uyun.
    NOT: Araştırmacılar toplanan hücre örneklerini kategorize ettiklerinde, tutarlı aydınlatma uygun görsel algılama ve güvenilir evreleme59'a izin verecektir. Işığın süresi ve yoğunluğu doğrudan üreme sistemi, cinsel olgunlaşma ve östrus döngüsü54,55,56,57,60,61 ile ilgilidir.

2. Ekipman ve deney hazırlığı

  1. Kategorize edici belirleyicileri gözden geçirin ( Şekil 2A'da görülür): östrus döngüsünün her aşamasının nasıl tanımlanacağı ve mikroskop ve kamera ekipmanının nasıl çalıştırılacağı.
  2. İzlenecek her deneğin cinsel olgunlaşmaya ulaştığından ve uygun gelişim göstergelerini (VO, vücut ağırlığı ve yaş) gösterdiğinden emin olun. Sıçanları tartın ve doğru karşılaştırmalar için her gün aynı saat arasında VO için inceleyin ve onaylanmış bir taşıma yöntemiyle aktarın. Bir hayvan önceki vücut ağırlığının% 20'sinden fazlasını kaybederse, üniversiteye bağlı veterinere danışın.
    NOT: VO, Şekil 3'te gösterildiği gibi, üretral açıklığa kaudal ve ikisi arasında bulunan anüse kraniyal kalır.
  3. Bu faktörler gerinime bağlı olduğundan, spesifikasyonlar için tedarikçiye danışın ve laboratuvara özgü çevresel faktörleri göz önünde bulundurun62.
    NOT: Genel olarak, bu 32-34 günlük yaş arasında ve SD sıçanlar için 75-150 gram63 arasında değişen ortalama vücut ağırlığı arasında gerçekleşir ve daha önce membranöz bir kılıfla kaplı dairesel şekilli bir açıklıkla gösterilir.
  4. Geçiş örneklerinin toplanmasını önlemek için izlenen sıçan grubuna uygun bir numune toplama süresi seçin. İlk olarak, çoğu döngü aşamasının bulunduğu zamanı belirlemek için gün boyunca 2 veya 3 farklı zaman noktasında birkaç hayvanı örnekleyin (örneğin; farklı hayvanlar için 12: 00 saat, 13: 00 saat ve 14: 00 saatinde örnekleme). Tutarlı ve güvenilir evreleme için vajinal lavajı her gün aynı saatte tamamlayın.
    NOT: Saat 12:00 ile 14:00 arasındaki saatlerin tüm aşamaları yakalamak için en iyisi olduğu bildirilmiştir. Bu çalışmada, östrus döngüsü izleme, sıkıştırma tarzı tutma ile ele alınan 12:00 ile 14:00 saatleri arasında gerçekleşmiştir (bkz. adım 3.4). Östrus döngüsü izleme zamanlamasının diğer deneysel müdahalelere (örneğin, davranışsal koşullandırma, ilaç) göre önemi, gelişmekte olan bir araştırma alanıdır ve daha fazla araştırılabilir11. Östrus döngüsü izlemenin süresinin belirlenmesi çalışmaya bağlıdır ve yayınlanmış çalışmalarda daha fazla araştırılabilir11,33.
  5. Koruyucu kapağı mikroskoptan çıkarın ve koruyucu kamera lensi kapağını çıkarıp objektifi mikroskobun göz merceğinin üzerine yerleştirerek kamerayı bilgisayara takın.
  6. Ardından, bilgisayarda önceden seçilmiş yazılımı açın. Bu çalışmada seçilen yazılımı kullanmak için, ekranın sol tarafında, Kamera Listesi etiketli sekmenin altında bulunan USB'ye bağlı kamerayı seçin. USB fotoğraf makinesinin bilgisayara düzgün bir şekilde bağlandığından emin olun, aksi takdirde Kamera Listesi etiketli sekmenin altında Aygıt Yok yazacaktır.
  7. USB kamera sekmenin altında seçildikten sonra, tabanda bulunan mikroskop ışık anahtarını açın.
  8. Bilgisayarda hücre örnek fotoğrafları için ayrılmış bir klasör oluşturun. Verilerin toplandığı her ayrı gün için, görüntüler çekilmeden önce önceden hazırlanmış bir dosya klasörü oluşturun.
  9. Hazırlanan ekipman ile deneğin kafesini tutma yerinden alın ve numune toplama istasyonuna getirin.

3. Vajinal hücrelerin toplanması

  1. Tek kullanımlık bir şırınga alın ve şırıngaların her birini 0,2 mL steril% 0,9 NaCl ile doldurun. Hava kabarcıkları varsa, tüm hava kabarcıkları şırınganın açık ucuna ulaşana kadar namlu şırıngasını hafifçe hareket ettirin ve havayı dışarı atın. Hala hava kabarcıkları varsa, çözeltiyi NaCl kabına geri atın ve hiçbiri kalmayana kadar doldurun.
    NOT: Aşırı hareket etmek, daha fazla hava kabarcığı oluşmasına neden olabilir.
  2. Steril bir alanı korumak için her bir şırıngayı plastik ambalaja geri koyun, şırınganın ucu ambalajın kapalı kısmının içindedir.
  3. Kafesi açın ve konuyu kuyruğun tabanından veya vücudun gövdesinden yavaşça kaldırın, başkalarının çıkmasını önlemek için kafesin kapağını kapatın. Kişisel tercihlere ve hayvan tepkisine bağlı olarak aşağıda listelenenlerden bir tutma yöntemi seçin.
  4. Ergen sıçanlar için sıkıştırma tarzı tutuşu, deneği üst göğüs bölgesine doğru yerleştirerek, deneğin burnu yere bakacak şekilde kullanın. Çubukla çalışmaya başlamadan önce, nesnenin hareketi önleyecek kadar sıkıştırıldığından, ancak tutuşta rahat ve güvenli olduğundan emin olun. Şırıngayı takmadan önce kuyruğu hafifçe bükerek konunun vajinal kanalını ortaya çıkarın.
  5. Hayvanın ön pençelerini kafesin üstüne veya yanına yerleştirerek yetişkin sıçanlar için Arka Bacak Kaldırıcısını kullanın, kuyruk ve arka bacaklar birinci ve ikinci parmaklar arasında yumuşak bir tutuşla tutulur ve baş parmağı şırınga64'ü çalıştırmak için serbest bırakır.
  6. Hayvanların taşıma ve izlemeye alışmasına izin verin. Aşırı stresi azaltmak ve araştırmacıyı ısırma gibi saldırganlıktan korumak için hayvanları nazikçe ama güvenli bir şekilde kullanın.
    NOT: İzlemenin ilk birkaç günü, hayvanlar koşullarına alıştıklarından istenen sonuçları vermeyebilir. Alışma döneminde vücut ağırlıklarını toplamak için hayvanları ele almak bu geçişe yardımcı olabilir33.
  7. Şırıngayı işaret parmağı ve orta parmakla sabit tutarken, şırınganın ucunu (en fazla 2 mm) vajinal kanala paralel bir açıyla yerleştirin. Pistonu içeri doğru iterek NaCl'yi yavaşça kanala atın. Şırıngayı kanala daha fazla sokmayın, çünkü bunu yapmak östrus döngüsünü bozabilir.
  8. Şırınganın pistonunu epitel astarından (yukarı doğru) çekerek NaCl'yi vajinal kanaldan çıkarın. Bu işlem sırasında nesneyi bekletmede tutmakta zorluk yaşanırsa, NaCl ekstraksiyonunu denemeden önce kısa bir dinlenme süresi için kafese geri yerleştirin.
  9. Hücre örneği toplandıktan sonra, konuyu tekrar kafese yerleştirin ve tüm örnekler mikroskop altında değerlendirilmeden önce bu prosedürü her hayvan için tekrarlayın.
    NOT: Alternatif olarak, her örnek bir sonraki hayvana geçmeden önce toplanabilir ve değerlendirilebilir. Bir hayvan, numune kategorize edilemezse ikinci bir lavaj gerektirebilir. İlk koleksiyondaki aynı şırınga, saline doğrudan kapta ve sadece aynı hayvan için temas etmezse tekrar kullanılabilir.

4. Numune değerlendirmesi

  1. Ekstrakte edilen vajinal sıvı örneğini inceleyerek kategorizasyona başlayın. Viskoziteyi viskoz veya viskoz olmayan olarak ve renklendirmeyi açıklama belgesine veya başka bir kayıt sistemine opak veya şeffaf olarak kaydedin.
    NOT: Protokolün bu bölümü, örnek toplama sırasında veya daha sonra gerçekleştirilebilir.
  2. Sıvının 2-3 damlasını mikroskop slaytına atın ve slaytın üzerine bir mikroskop kapağı camı yerleştirin. Hava kabarcıklarının oluşmasını önlemek için kapak camını mikroskop slaytının üstünden altına veya slaytın bir tarafından diğerine yerleştirin. Mümkünse, daha fazla inceleme gerekiyorsa ve slayta aşırı miktarda sıvı yerleştirilmesini önlemek için toplanan numunenin yaklaşık yarısını şırıngada bırakın.
  3. Mikroskop slaytını sahne alanı boyunca hareket ettirerek toplanan hücreleri bulun. Çok az hücre veya yüksek miktarda döküntü varsa, kalan sıvıyı yeni bir slayta atın ve yeniden inceleyin. Şırıngada bırakılan numune miktarı yetersizse veya ikinci damla benzer sorunlar gösteriyorsa, östrus döngüsü aşamasını tanımlamaya çalışmadan önce konudan başka bir örnek toplayın.
  4. Hücreler bulunduktan sonra ve bilgisayara veya bilgisayar klavyesine dokunmadan önce, klavyenin kirlenmesini önlemek için bir eldiveni çıkarın.
  5. Yazılım panelinin sol tarafındaki Snap etiketli işleve tıklayarak hücre örneklerinin görüntülerini alın.
  6. Ardından, sayfanın sol üst köşesindeki Dosya simgesinin altındaki Farklı Kaydet'e tıklayarak dosyayı kaydedin. Fotoğrafı bilgisayardaki önceden etiketlenmiş bir klasörün altına kaydedin.
    NOT: Örnek etiket şablonu: #subjectnumber_date collected_estrous stage_objective lens kullanılır.
  7. Her karede çok fazla hücre yoksa, her objektif lenste birden fazla fotoğraf çekin.
    NOT: Birden çok görüntü için örnek etiketler: #1_01/09/2021_EST_4x1 ve #1_01/09/2021_EST_4x2.
  8. Birden fazla objektif lens altında toplanan her numune için prosedürü tekrarlayın. 4x gibi en az bir küçük nesneleştirme ve 20x gibi en az bir büyük nesneleştirme ekleyin.
  9. Görüntüleri bir ortak sürücüye/klasöre veya harici bir sabit sürücüye yükleyin, böylece ilgili tüm araştırmacılar dosyalara erişebilir ve yedek kopyalar mevcuttur.

5. Sahne kategorisi

  1. Bilgisayar ekranını, çekilen fotoğrafları ve kayıt sayfasını aynı anda görüntüleyecek şekilde ayarlayın (Şekil 4A-C).
    NOT: Bu, toplanan örnek görüntülenirken belgelerin oluşturulmasına olanak tanır. Protokolün bu kısmı örnek toplama sırasında veya daha sonra tamamlanabilir.
  2. Örnekte hangi hücre tiplerinin bulunduğunu belirleyin. Ölçütleri kullanarak adım 5.2.1-5.2.4'te listelenen dört seçenek arasından seçim yapın ve bulguları kaydedin.
    1. Anüklee keratinize epitel (AKE)/kornifiye epitel hücreleri
      1. Şekil 2B ve Şekil 5C'de görüldüğü gibi, çekirdek eksikliğine rağmen, hücre içinde bir çekirdeğin bir zamanlar bulunduğu yeri temsil eden hafif yuvarlak alanlar (nükleer hayaletler) gösterebilen pürüzlü veya açısal kenarlı hücreleri arayın. Bu tür çekirdekli ve anüklee hücreler arasında ayrım yapmak için 20x ve üstü gibi daha yüksek büyütme kullanın.
      2. İstenirse, hücrenin keratinize veya kornifiye edilmiş kısmını (çekirdekleri olmayan ve keratinle doldurulmuş ince bir hücre tabakası) ayırt etmek için daha yüksek büyütme kullanın.
        NOT: Pürüzlü görünümlerine ek olarak, bunlar keratin çubukları olarak bilinen pürüzlü ve uzun yapılar oluşturarak nasıl katlanabilecekleri veya sökülebilecekleri ile de ayırt edilebilir.
    2. Büyük çekirdekli epitel (LNE) hücreleri
      1. Düzensiz, pürüzlü veya açısal kenarlıklarla kaplanmış bu tipik olarak yuvarlak ila çokgen şekilli hücreleri arayın.
      2. Çekirdeklerinin, Şekil 2B ve Şekil 5D1,2'de görüldüğü gibi, ölüm veya bozulma geçiren bir hücrenin çekirdeğindeki kromatinin geri dönüşümsüz yoğunlaşmasıyla ilgili olarak bozulmamıştan dejenere veya pykontik'e kadar çeşitli formlar alabileceğini gözlemleyin. Bu çekirdeklerin hücre içindeki sitoplazmadan daha az yer kapladığını, küçük epitel hücrelerinden daha düşük bir nükleer-sitoplazmik (N: C) oranına sahip olduğunu not edin. Daha yüksek büyütmelerde görülebilen sitoplazmik granüllere dikkat edin13.
    3. Lökositler (LEU'lar)/nötrofiller/polimorfonükleer hücreler
      1. Hücre olgunlaştıkça kaybolan çok loblu çekirdeklere (dolayısıyla polimorfonükleer hücreler olarak bilinir) sahip bu kompakt, küresel hücreleri arayın (Şekil 2B ve Şekil 5A). Çok loblu çekirdekleri gözlemlemek için daha yüksek büyütme (örneğin, 40x) kullanılabilir.
        NOT: Toplama ve hazırlama üzerine, bu hücreler yoğunlaşabilir, katlanabilir veya yırtılabilir.
    4. Küçük çekirdekli epitel (SNE) hücreleri
      1. Yukarıda açıklanan nötrofillerden daha büyük olan bu yuvarlak ila oval şekilli hücrelere dikkat edin.
      2. Bu keratinize olmayan epitel hücrelerinin yuvarlak çekirdeklerini gözlemleyin (Şekil 2B), hücre içindeki sitoplazmadan daha fazla yer kaplar ve büyük epitel hücrelerine göre daha yüksek bir N: C oranı oluşturur.
        NOT: Toplama ve hazırlama işleminden sonra, bu hücreler Şekil 5B1'de gösterildiği gibi bir dizeye veya çubuğa benzeyen bir şekil oluşturmak için katlanabilir veya üst üste binebilir.
  3. Örnekte bulunan hücrelerin her nesneleştirme için nasıl düzenlendiğini inceleyin. Genel hücre düzenlemesinin temsili bir görünümünü görüntülemek için 4x gibi daha düşük nesneleştirmeyi kullanın. Hücrelerin bir araya toplanıp kümelenmediğini (C), eşit olarak dağılmış (ED) veya rastgele dağılmış (RD) olup olmadığını kaydedin (bkz. Şekil 4C) ve her hücre tipinin spesifik organizasyonunu not edin (örneğin, küçük çekirdekli epitel hücreleri kümelenir ve nötrofiller eşit olarak dağıtılır).
  4. Ardından, toplam hücre miktarını (bir küçük, orta, sayıda) ve bireysel hücre miktarlarını (mevcut her hücre tipinin yüzdesi) görsel olarak tahmin edin ve kaydedin.
    NOT: Bir leke, örnek kategorizasyonunu belirlemek için kullanılabilecek en az sayıda hücreyi temsil eder, çok sayıda, slayttaki alanın tamamını olmasa da çoğunu oluşturan veya üst üste yığılmış sayısız hücrenin varlığını temsil eder ve ılımlı sayıda hücre, nispeten ortalama bir hücre sayısını temsil eder (örnekler Şekil 5A-D ve Şekil 6A-D'de görülür).
  5. Listelenen kriterlerden veya 'anormallikler' kategorisindeki belirli bir konu için tipik olan yönlerden herhangi bir sapma olup olmadığına dikkat edin ve gerekirse bir veterinere danışın.
  6. Kategorize edici bileşenleri ve aşağıdaki açıklamaları kullanarak numunede hangi östrus döngüsü aşamasının sunulduğunu belirleyin.
    1. Ölmek
      1. LEU'ları, DIE'nin başlangıcında kümelenmiş bir şekilde düzenlenmiş, ancak geç aşamalarda daha dağınık olan baskın veya tek hücre tipi olarak arayın.
        NOT: DIE'ye geçiş yaparken, Şekil 6D1'de görüldüğü gibi, epitel hücreleri parçalanmaya başladıkça hücre miktarı azalabilir. Aynı zamanda, LEU'ların sayısı artmaya başlar ve başlangıçta kümelenmiş bir şekilde düzenlenme eğilimindedirler ve zamanla dağılırlar.
      2. Toplam hücre miktarının, çoğunlukla DIE döneminin sonraki aşamalarında, ikinci veya üçüncü günde nispeten düşük olabileceğini unutmayın.
      3. Bu aşamada mevcut olabilecek ve LEU'ların konsantre iplikçikleri olarak ortaya çıkan yüksek miktarda mukusun gözlenmesi (Şekil 5A1). PRO'ya geçişin geç aşamalarında LEU'lara eşlik eden küçük SNE hücrelerinin kümelerine veya hücresel iplikçiklerine dikkat edin (Şekil 5A1,2).
      4. DIE'ye geçerken vajinal sıvının viskoz ve opak görünümünü gözlemleyin, DIE'ye tamamen geçiş yapın ve DIE'den çıkın.
        NOT: Bu aşamanın ortalama süresi 4 günlük bir döngü sırasında 48 saat ve 5 günlük bir döngü sırasında muhtemelen 72 saattir.
    2. Lehinde
      1. Baskın hücreler olarak SNE hücrelerini ve düşük sayılarda görülebilen LEU'lar, LNE ve / veya AKE hücrelerini arayın. Bu aşamada tipik olarak kümeler, tabakalar veya iplikçikler halinde düzenlenmiş SNE hücrelerinin granüler görünümünü gözlemlemek için yüksek nesnelleştirme kullanın (Şekil 5B1,2).
      2. DIE'den PRO'ya geçerken vajinal sıvının viskoz ve opak görünümünü ve PRO aşamasına tamamen geçildikten sonra nasıl viskoz olmayan ve şeffaf hale geldiğini gözlemleyin (sıçanlarda ortalama süre 14 saattir).
    3. Est
      1. AKE hücrelerinin baskınlığını, EST'deki SNE hücrelerinin azalmasını ve EST11,13 devam ettikçe hücrelerin sayısında ve boyutunda bir artış arayın.
      2. AKE hücrelerinin keratin çubukları şeklinde veya PRO'dan (Şekil 6B) ve MET'e (Şekil 6C) geçişte daha rastgele dağılabilen hayalet çekirdekler içeren sıklıkla kümelenmiş düzenlemesinin ayırt edici özelliğini not edin.
      3. Sıçanlar EST'ye geçerken beklenebilecek karakteristik viskoz olmayan ve şeffaf vajinal sıvıyı gözlemleyin, tamamen EST'ye geçiş yapar ve EST'den çıkar.
        NOT: EST'nin ilerlemesi çok fazla çeşitlilik içerir (Şekil 5C ve Şekil 6B, C). Aşama tipik olarak 4 günlük bir döngüde ortalama 24 saat veya 5 günlük bir döngüde muhtemelen 48 saat boyunca gerçekleşir.
    4. Tanış
      1. Sıçan MET'e geçerken daha fazla sayıda SNE ve LNE hücresi arayın, ya kanal içindeki hücre oranı açısından baskın ya da LEU'lar11,13'e eşit orantıya yakın. Ayrıca, EST'yi takip eden epitel hücre çürümesi ve DIE'ye taşınması nedeniyle MET'deki daha fazla miktarda enkaz ve geçişleri diğer aşamalardan daha fazla not edin.
      2. Tüm hücre tipleri ve çeşitli miktarlarda görüldüğü için tutarlı bir düzenleme eksikliğini gözlemleyin (Şekil 5D1-3). Bununla birlikte, başlangıç aşamalarında epitel hücrelerine yakın bir yerde paketlenmiş veya kümelenmiş LEU'ları arayın, bu da DIE'ye geçerken kümelenmiş düzenlemeye geri dönebilir.
      3. Bu aşamada vajinal sıvının viskoz olmayan ve şeffaf görünümünü ve DIE'ye geçerken daha viskoz ve opak bir görünüme geçişi gözlemleyin.
        NOT: Bu aşamanın ortalama süresi 6-8 saattir.
  7. Geçişlerdeki örnekleri, konunun hareket ettiği aşama ile etiketleyin, bunların ne zaman toplandığını izlemek için parantez içindeki geçiş. Bu 4 aşama ve geçişleri arasında nasıl ayrım yapılacağı hakkında daha fazla bilgi Temsili Sonuçlar'da bulunabilir.
    NOT: Toplanan örnekler statik ve döngü dinamik olduğundan, slaytlar aşamalar arasındaki geçişleri gösterebilir (Şekil 6A-D'de görülmektedir).
  8. İzleme aşaması tamamlanana kadar her hayvan için bu işlemi tamamlayın.
  9. Her iki günde de 11 (45 günlük) veya 21 (55 günlük), giyotin dekapitasyonundan önce sıçanları% 5 izofluran ve% 2 oksijen ile ötenazi yapın. Bu zaman noktaları, çalışmanın niteliğine bağlı olarak değişebilir.

Sonuçlar

Mevcut veriler, erkek SD sıçanlarının varlığında kadın ergen SD Uluslararası Genetik Standardizasyon Programı'nın (IGS) verilerini yansıtmaktadır. Bu hayvanlar, işbirlikçi bir çalışmanın parçası olarak hem Pepperdine Üniversitesi hem de UCLA laboratuvarlarında bulundu. Şekil 5, 4 döngü aşamasının çoklu varyasyonlarını sunmaktadır. Şekil 5A1, çeşitli hücre tiplerinin mevcut olduğu bir diestrus örneği olarak...

Tartışmalar

Önemli adımlar ve dikkat edilmesi gereken önemli noktalar
Sağlanan protokoldeki bazı kritik adımlar, özellikle vajinal hücrelerin toplanmasında vurgu gerektirir. Vajinal sıvı ekstraksiyonu sırasında, şırınga yerleştirmenin uygun açısını ve derinliğini sağlamak, tatmin edici sonuçlar vermenin ve sonuçta hayvana tahriş, yaralanma veya servikal stimülasyonu önlemenin anahtarıdır. Serviksin uyarılması, 12-14 günlük lökosit içeren vajinalsmear 11 ...

Açıklamalar

Yazarların açıklayacağı bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, Kaliforniya Üniversitesi Los Angeles Beyin Hasarı Araştırma Merkezi (BIRC) arasında NIH tarafından finanse edilen bir işbirliği ile gerçekleştirildi.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
AmScope 40X-1000X LED Student Microscope + 5MP USB CameraAmScopePart Number: M150C-E5 EAN: 0608729747796 Model Number: M150C-E5https://www.amazon.com/AmScope-40X-1000X-Student-Microscope-Camera/dp/B00O9GNOTA/ref=sr_1_15?crid=2W9CHTG8YSOTV&
keywords=usb+camera+for+microscope&
qid=1572477663&s=industrial
&sprefix=USB+camera+for+micr%2Cindustrial%2C177&sr=1-15
BD PrecisionGlide Needle Pack, 20G x 1, Short BevelFischer Scientific14-815-526https://www.fishersci.com/shop/products/bd-precisionglide-single-use-needles-short-bevel-regular-wall-4/14815526#?keyword=BD%20PrecisionGlide%20Needle%20Pack,%2020G%20x%201
Bed O Cob 1/8NEWCO93009https://andersonslabbedding.com/cob-products/bed-ocobs-8b/
Corning™ Plain Microscope Slides Plain water-white glassFischer Scientific12-553-7Ahttps://www.fishersci.com/shop/products/corning-plain-microscope-slides-microscope-slides-75-x-25mm/125537a
Corning™ Rectangular Cover GlassesFischer Scientific12-553-464https://www.fishersci.com/shop/products/corning-square-rectangular-cover-glasses-rectangle-no-1-thickness-0-13-0-17mm-size-24-x-50mm/12553464#?keyword=true
Kimberly-Clark Professional™ Kimtech Science™ Kimwipes™ Delicate Task Wipers, 1-PlyFischer Scientific06-666https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/p-211240?crossRef=kimwipes
Labdiet Rodent Lab Chow 50lb, 15001 NEWCO Specialty and LabDiet5012https://www.labdiet.com/products/standarddiets/rodents/index.html
Linear LED Bulb, UL Type A, T8, Medium Bi-Pin (G13), 4,000 K Color Temperature, Lumens 2550 lmGrainger36UX10https://www.grainger.com/product/36UX10?gclid=CjwKCAjw_
LL2BRAkEiwAv2Y3SW1WdNdkf7
zdIxoT9R6n2DGnrToJHjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRoCi4
cQAvD_BwE&s_kwcid=AL!2966!3!335676016696
!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&ef_id=
CjwKCAjw_LL2BRAkEiwAv2Y3SW
1WdNdkf7zdIxoT9R6n2DGnrToJ
Hjv-pwCTca4ahQyExrrtWvbgwRo
Ci4cQAvD_BwE:G:s&s_kwcid=AL!2966!3!335676016696!p!!g!!led18et8%2F4%2F840&cm_mmc=
PPC:+Google+PPC
Sodium Chloride Injection Bags, 0.9%Live Action SafetyABB079830939https://www.liveactionsafety.com/injection-iv-solution-9-sodium-chloride-1000ml-bags/
Syringe Sterile 1ml  with Luer Slip Tip - 100 Syringes by BH SuppliesBH SuppliesASIN: B07BQDRDC2 UPC: 638632928821https://www.amazon.com/1ml-Syringe-Sterile-Luer-Slip/dp/B07BQDRDC2/ref=sr_1_1_sspa?crid=13S8EGEUK90G7&
keywords=1ml+sterile+syringe&qid=
1572478649&s=industrial
&sprefix=1+ml+steri%2Cindustrial%2C187&sr=1-1-spons&psc=1&spLa=
ZW5jcnlwdGVkUXVhbGlmaWVy
PUEyRlo4NFdZWkJLWkxGJm
VuY3J5cHRlZElkPUEwMDEzODQ
yMjNWNzdWM0hTNzVBRCZlbmNy
eXB0ZWRBZElkPUEwNDI3NzAzM
0E5SzVKMkxaQVc2JndpZGdldE5h
bWU9c3BfYXRmJmFjdGlvbj1jbGlja
1JlZGlyZWN0JmRvTm90TG9nQ2
xpY2s9dHJ1ZQ==
Wire lids and floors Mouse Maternity Wire Bar LidUsed with Rat Cage (10" X 19" x 8"H )Overall dimenAllentownLV40326013https://www.labx.com/item/wire-lids-and-floors-mouse-maternity-wire-bar-lidused/LV40326013#description
Ultra Lightweight Tissue and Plastic 17' x 24' Disposable UnderpadMedlineEAN: 0480196288558
 Global Trade Identification Number: 40080196288558		https://www.amazon.com/Medline-Industries-MSC281224C-Lightweight-Disposable/dp/B00A2G67YU/ref=sr_1_4?keywords=medline+industries+surgical+pads&qid=1572475853&
sr=8-4

Referanslar

  1. Schneider, M. Adolescence as a vulnerable period to alter rodent behavior. Cell and Tissue Research. 354 (1), 99-106 (2013).
  2. Camacho-Arroyo, I., Montor, J. M. Beyond reproductive effects of sex steroids. MiniReviews in Medicinal Chemistry. 12 (11), 1037-1039 (2012).
  3. Shah, S. I. A. Systemic non-reproductive effects of sex steroids in adult males and females. Human Physiology. 44, 83-87 (2018).
  4. Wierman, M. E. Sex steroid effects at target tissues: mechanisms of action. Advances in Physiology Education. 31 (1), 26-33 (2007).
  5. An, G., et al. Pathophysiological changes in female rats with estrous cycle disorder induced by long-term heat stress. BioMed Research International. 2020, 4701563 (2020).
  6. Donato, J., et al. The ventral premammillary nucleus links fasting-induced changes in leptin levels and coordinated luteinizing hormone secretion. Journal of Neuroscience. 29 (16), 5240-5250 (2009).
  7. Fortress, A. M., Avcu, P., Wagner, A. K., Dixon, C. E., Pang, K. Experimental traumatic brain injury results in estrous cycle disruption, neurobehavioral deficits, and impaired GSK3β/β-catenin signaling in female rats. Experimental Neurology. 315, 42-51 (2019).
  8. Hatsuta, M., et al. Effects of hypothyroidism on the estrous cycle and reproductive hormones in mature female rats. European Journal of Pharmacology. 486 (3), 343-348 (2004).
  9. Jaini, R., Altuntas, C. Z., Loya, M. G., Tuohy, V. K. Disruption of estrous cycle homeostasis in mice with experimental autoimmune encephalomyelitis. Journal of Neuroimmunology. 279, 71-74 (2015).
  10. Tropp, J., Markus, E. J. Effects of mild food deprivation on the estrous cycle of rats. Physiology and Behavior. 73 (4), 553-559 (2001).
  11. Goldman, J. M., Murr, A. S., Cooper, R. L. The rodent estrous cycle: characterization of vaginal cytology and its utility in toxicological studies. Birth Defects Research. Part B, Developmental and Reproductive Toxicology. 80 (2), 84-97 (2007).
  12. Thung, P. J., Boot, L. M., Muhlbock, O. Senile changes in the oestrous cycle and in ovarian structure in some inbred strains of mice. Acta Endocrinologica. 23 (1), 8-32 (1956).
  13. Cora, M. C., Kooistra, L., Travlos, G. Vaginal cytology of the laboratory rat and mouse: Review and criteria for the staging of the estrous cycle using stained vaginal smears. Toxicologic Pathology. 43 (6), 776-793 (2015).
  14. . Biochemical and endocrinological studies of normal and neoplastic tissue: The metabolism of estrogen-producing ovarian tumors and other malignancies in the mouse Available from: https://www.translatetheweb.com/?from=nl&to=en&ref=SERP&dl=en&rr=UC&a=https%3a%2f%2frepository.tudelft.nl%2fislandora%2fobject%2fuuid%253A8776d58a-6695-4a38-99ca-0abf607480f0 (2021)
  15. Van Der Lee, S., Boot, L. M. Spontaneous pseudopregnancy in mice. Acta Physiologica Pharmacologica Neerlandica. 4 (3), 442-444 (1955).
  16. Paccola, C., Resende, C., Stumpp, T., Miraglia, S., Cipriano, I. The rat estrous cycle revisited: a quantitative and qualitative analysis. Animal Reproduction. 10 (4), 677-683 (2013).
  17. Ojeda, S. R., Urbanski, H. F., Knobil, E., Neill, J. D. Puberty in the rat. The Physiology of Reproduction. , 363-409 (1994).
  18. Schallmayer, S., Hughes, B. M. Impact of oral contraception and neuroticism on cardiovascular stress reactivity across the menstrual cycle. Psychology, Health & Medicine. 15 (1), 105-115 (2010).
  19. Barreto-Cordero, L. M., et al. Cyclic changes and actions of progesterone andallopregnanolone on cognition and hippocampal basal (stratum oriens) dendritic spinesof female rats. Behavioural Brain Research. 379, 112355 (2020).
  20. de Zambotti, M., Trinder, J., Colrain, I. M., Baker, F. C. Menstrual cycle-related variation in autonomic nervous system functioning in women in the early menopausal transition with and without insomnia disorder. Psychoneuroendocrinology. 75, 44-51 (2017).
  21. Maghool, F., Khaksari, M., Khachki, A. S. Differences in brain edema and intracranial pressure following traumatic brain injury across the estrous cycle: Involvement of female sex steroid hormones. Brain Research. 1497, 61-72 (2013).
  22. Bale, T. L., Epperson, C. N. Sex as a biological variable: Who, what, when, why, and how. Neuropsychopharmacology. 42 (2), 386-396 (2017).
  23. Becker, J. B., Prendergast, B. J., Liang, J. W. Female rats are not more variable than male rats: a meta-analysis of neuroscience studies. Biology of Sex Differences. 7, 34 (2016).
  24. Prendergast, B. J., Onishi, K. G., Zucker, I. Female mice liberated for inclusion in neuroscience and biomedical research. Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 40, 1-5 (2014).
  25. Joel, D., McCarthy, M. M. Incorporating sex as a biological variable in neuropsychiatric research: where are we now and where should we be. Neuropsychopharmacology. 42 (2), 379-385 (2017).
  26. Long, J. A., Evans, H. M. The oestrous cycle in the rat and its associated phenomena. Memoirs of the University of California. 6, 1 (1922).
  27. Westwood, F. R. The female rat reproductive cycle: A practical histological guide to staging. Toxicologic Pathology. 36 (3), 375-384 (2008).
  28. Lenschow, C., Sigl-Glöckner, J., Brecht, M. Development of rat female genital cortex and control of female puberty by sexual touch. PLoS Biology. 15 (9), 2001283 (2017).
  29. Lewis, E. M., Barnett, J. F., Freshwater, L., Hoberman, A. M., Christian, M. S. Sexual maturation data for Crl Sprague-Dawley rats: Criteria and confounding factors. Drug and Chemistry Toxicology. 25 (4), 437-458 (2002).
  30. Spear, L. P. The adolescent brain and age-related behavioral manifestations. Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 24 (4), 417-463 (2000).
  31. Gaytan, F., et al. Development and validation of a method for precise dating of female puberty in laboratory rodents: the puberty ovarian maturation score (pub-score). Scientific Reports. 7, 46381 (2017).
  32. da Silva Faria, T., da Fonte Ramos, C., Sampaio, F. J. Puberty onset in the female offspring of rats submitted to protein or energy restricted diet during lactation. Journal of Nutritional Biochemistry. 15 (2), 123-127 (2004).
  33. Caligioni, C. S. Assessing reproductive status/stages in mice. Current Protocols in Neuroscience. 48 (1), 1 (2009).
  34. Engelbregt, M. J., et al. Delayed first cycle in intrauterine growth-retarded and postnatally undernourished female rats: follicular growth and ovulation after stimulation with pregnant mare serum gonadotropin at first cycle. Journal of Endocrinology. 173 (2), 297-304 (2002).
  35. Pescovitz, O. H., Walvoord, E. C. . When puberty is precocious: Scientific and clinical aspects. , (2007).
  36. . Standard Evaluation Procedure Test Guidelines 890.1450: Pubertal development and thyroid function in intact juvenile/peripubertal female rats assay Available from: https://www.epa.gov/sites/production/files/2015-07/documents/final_890.1450_female_pubertal_assay_sep_8.24.11.pdf (2011)
  37. Kennedy, G. G., Mitra, J. Body weight and food intake as initiating factors for puberty in the rat. Journal of Physiology. 166 (2), 408-418 (1963).
  38. Sengupta, S., Arshad, M., Sharma, S., Dubey, M., Singh, M. M. Attainment of peak bone mass and bone turnover rate in relation to estrous cycle, pregnancy and lactation in colony-bred Sprague-Dawley rats: Suitability for studies on pathophysiology of bone and therapeutic measures for its management. Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology. 94 (5), 421-429 (2005).
  39. Iannaccone, P. M., Jacob, H. J. Rats. Disease models & Mechanisms. 2 (5-6), 206-210 (2009).
  40. Koff, E., Rierdan, J., Stubbs, M. L. Conceptions and misconceptions of the menstrual cycle. Women & Health. 16 (3-4), 119-136 (1990).
  41. Sahay, N. Myths and misconceptions about menstruation: A study of adolescent school girls of Delhi. Journal of Women's Health and Development. 3 (3), 154-169 (2020).
  42. . The deadly truth about a world built for men - from stab vests to car crashes Available from: https://www.theguardian.com/lifeandstyle/2019/feb/23/truth-world-built-for-men-car-crashes (2019)
  43. Chrisler, J. C., Denmark, F. L., Paludi, M. A. The menstrual cycle in a biopsychosocial context. Women's Psychology. Psychology of Women: A Handbook of Issues and Theories. , 193-232 (2008).
  44. . Re-cycling the menstrual cycle: A multidisciplinary reinterpretation of menstruation Available from: https://scholarworks.wmich.edu/masters_theses/3942 (1998)
  45. Sato, J., Nasu, M., Tsuchitani, M. Comparative histopathology of the estrous or menstrual cycle in laboratory animals. Journal of Toxicologic Pathology. 29 (3), 155-162 (2016).
  46. Whitten, W. K. Modification of the oestrous cycle of the mouse by external stimuli associated with the male. Journal of Endocrinology. 13 (4), 399-404 (1956).
  47. Smith, J. R., et al. The year of the rat: The Rat Genome Database at 20: a multi-species knowledgebase and analysis platform. Nucleic Acids Research. 48 (1), 731-742 (2020).
  48. Capdevila, S., Giral, M., Ruiz de la Torre, J. L., Russell, R. J., Kramer, K. Acclimatization of rats after ground transportation to a new animal facility. Laboratory Animals. 41 (2), 255-261 (2007).
  49. Conour, L., Murray, K., Brown, M. Preparation of animals for research-issues to consider for rodents and rabbits. ILAR journal. 47 (4), 283-293 (2006).
  50. National Academies Press (US) Committee on Guidelines for the Humane Transportation of Laboratory Animals. Guidelines for the Humane Transportation of Research Animals. National Academies Press. , (2006).
  51. Obernier, J., Baldwin, R. Establishing an appropriate period of acclimatization following transportation of laboratory animals. ILAR Journal. 47 (4), 364-369 (2006).
  52. National Research Council (US) Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. US) . Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. 8th ed. , (2011).
  53. Pantier, L. K., Li, J., Christian, C. A. Estrous cycle monitoring in mice with rapid data visualization and analysis. Bio-protocol. 9 (17), 1-17 (2019).
  54. Cohen, I., Mann, D. Seasonal changes associated with puberty in female rats: effect of photoperiod and ACTH administration. Biology of Reproduction. 20 (4), 757-776 (1979).
  55. Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J Mice: I. cycle frequency, length and vaginal cytology. Biology of Reproduction. 27 (2), 327-339 (1982).
  56. Pennycuik, P. R. Seasonal changes in reproductive productivity, growth rate, and food intake in mice exposed to different regimens of day length and environmental temperature. Australian Journal of Biological Sciences. 25 (3), 627-635 (1972).
  57. Piacsek, B. E., Hautzinger, G. M. Effects of duration, intensity and spectrum of light exposure on sexual maturation time of female rats. Biology of Reproduction. 10 (3), 380-387 (1974).
  58. Rubinow, M. J., Arseneau, L. M., Beverly, J. L., Juraska, J. M. Effect of the estrous cycle on water maze acquisition depends on the temperature of the water. Behavioral Neuroscience. 118 (4), 863-868 (2004).
  59. JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Fundamentals of Breeding and Weaning. JoVE. , (2020).
  60. Campbell, C., Schwartz, N. The impact of constant light on the estrous cycle of the rat. Endocrinology. 106 (4), 1230-1238 (1980).
  61. Nelson, J. F., Felicio, L. S., Osterburg, H. H., Finch, C. E. Altered profiles of estradiol and progesterone associated with prolonged estrous cycles and persistent vaginal cornification in aging C578L/6J mice. Biology of Reproduction. 24 (4), 784-794 (1981).
  62. Rivest, R. W. Sexual maturation in female rats: Hereditary, developmental and environmental aspects. Experientia. 47 (10), 1026-1038 (1991).
  63. CD® (Sprague Dawley) IGS Rat. Charles River Laboratories Available from: https://www.criver.com/products-services/find-model/cd-sd-igs-rat?region=3611 (2021)
  64. JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Rodent Handling and Restraint Techniques. JoVE. , (2020).
  65. Circulatory System. Biology Corner Available from: https://www.biologycorner.com/worksheets/rat_circulatory.html (2021)
  66. Urogenital System. n.d.). Biology Corner Available from: https://www.biologycorner.com/worksheets/rat_circulatory.html (2021)
  67. . Anatomical foundations of neuroscience: Mini-atlas of rat's brain. Anatomy and Cell Biology 9535b Available from: https://instruct.uwo.ca/anatomy/530/535downs.htm (2008)
  68. Byers, S. L., Wiles, M. V., Dunn, S. L., Taft, R. A. Mouse estrous cycle identification tool and images. PloS One. 7 (4), 1-5 (2012).
  69. Marcondes, F. K., Bianchi, F. J., Tanno, A. P. Determination of the estrous cycle phases of rats: some helpful considerations. Brazilian Journal of Biology. 62 (4), 609-614 (2002).
  70. Champlin, A. K., Dorr, D. L., Gates, A. H. Determining the stage of the estrous cycle in the mouse by the appearance of the vagina. Biology of Reproduction. 8 (4), 491-494 (1973).
  71. Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update. Fertility Research and Practice. 6 (5), (2020).
  72. Bartos, L. Vaginal impedance measurement used for mating in the rat. Laboratory Animals. 11 (1), 53-55 (1977).
  73. Belozertseva, I. V., Merkulov, D. D., Vilitis, O. E., Skryabin, B. V. Instrumental method for determining the stages of the estrous cycle in small laboratory rodents. Laboratory Animals for Scientific Research. (4), (2018).
  74. Ramos, S. D., Lee, J. M., Peuler, J. D. An inexpensive meter to measure differences in electrical resistance in the rat vagina during the ovarian cycle. Journal of Applied Physiology. 91 (2), 667-670 (2001).
  75. Singletary, S. J., et al. Lack of correlation of vaginal impedance measurements with hormone levels in the rat. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 44 (6), 37-42 (2005).
  76. Bretveld, R. W., Thomas, C. M., Scheepers, P. T., et al. Pesticide exposure: the hormonal function of the female reproductive system disrupted. Reproductive Biology Endocrinology. 4 (30), (2006).
  77. MacDonald, J. K., Pyle, W. G., Reitz, C. J., Howlett, S. E. Cardiac contraction, calcium transients, and myofilament calcium sensitivity fluctuate with the estrous cycle in young adult female mice. American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 306 (7), 938-953 (2014).
  78. Koebele, S. V., Bimonte-Nelson, H. A. Modeling menopause: The utility of rodents in translational behavioral endocrinology research. Maturitas. 87, 5-17 (2016).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

BiyolojiSay 174kad nergenSprague Dawleys anseks steroid hormonlarstrus d ng svajinal lavaj

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır