In vivo Imágenes de todo el cerebro de larvas de pez cebra usando microscopía de fluorescencia tridimensional

Como animal modelo vertebrado, las larvas de pez cebra son ampliamente utilizadas en neurociencia y brindan una oportunidad única para monitorear la actividad de todo el cerebro a la resolución celular. Aquí, proporcionamos un protocolo optimizado para realizar imágenes de todo el cerebro de larvas de pez cebra utilizando microscopía de fluorescencia tridimensional, incluida la preparación e inmovilización de muestras, la incrustación de muestras, la adquisición de imágenes y la visualización después de la obtención de imágenes. El protocolo actual permite obtener imágenes in vivo de la estructura y la actividad neuronal de un cerebro larval de pez cebra a una resolución celular durante más de 1 h utilizando microscopía confocal y microscopía de fluorescencia diseñada a medida. También se discuten los pasos críticos en el protocolo, incluido el montaje y posicionamiento de la muestra, la prevención de la formación de burbujas y el polvo en el gel de agarosa, y evitar el movimiento en las imágenes causado por la solidificación incompleta del gel de agarosa y la paralización de los peces. El protocolo ha sido validado y confirmado en múltiples configuraciones. Este protocolo se puede adaptar fácilmente para obtener imágenes de otros órganos de una larva de pez cebra.