Sağ ventrikül hipertrofisi ve başarısızlık bir pulmoner gövde basınç yükünün modeli bantlama indüklenen

Özet

Biz sağ ventrikül hipertrofisi ve başarısızlık sıçanlarda ikna etmek için cerrahi bir yöntem mevcut.

Özet

Sürekli baskı aşırı tarafından indüklenen sağ ventrikül (RV) hatası morbidite ve mortalite birkaç kardiyopulmoner bozukluklarında için büyük bir katkıda bulunuyor. Güvenilir ve tekrarlanabilir hayvan modelleri RV başarısızlık bu nedenle hastalık mekanizmaları ve potansiyel tedavi stratejileri etkilerini araştırmak için garanti altındadır. Pulmoner bagajında bantlama izole RV hipertrofisi ikna etmek için ortak bir yöntemdir ama genel olarak, yukarıda açıklanan modelleri RV hipertrofisi ve başarısızlık istikrarlı bir model yaratmada başarılı olamadık.

Biz basınç indüklenen aşırı RV hipertrofisi fare modeli mevcut RV hipertrofisi ve RV hatası olmadan farklı fenotipleri sağlar (PTB) bantlama pulmoner gövde tarafından neden oldu. Önceden ayarlanmış bir iç çapı pulmoner gövde etrafında bir titanyum klibi sıkıştırmak için değiştirilmiş ligating klip uygulayıcı kullanın. Farklı küçük çapları farklı aşamalarında hastalık ilerleme hafif RV hipertrofisi üzerinden dekompanse RV başarısızlık için ikna etmek için kullanın.

RV hipertrofisi PTB yordama ve uygulamalı bantlama Clip çapı göre tabi sıçanlarda sürekli geliştirir, doğru bir şekilde telafi hipertrofisi şiddetli dekompanse RV için arasında değişen farklı hastalık severities yeniden oluşturabilirsiniz başarısızlık ile ekstra kardiyak belirtiler.

Sunulan PTB modeli geçerli ve sağlam manken basınç yükünün RV hipertrofisi ve yüksek tekrarlanabilirlik ve şiddetli ve dekompanse RV başarısızlık inducing olasılığı da dahil olmak üzere diğer bantlama modelleri için çeşitli avantajları vardır başarısızlık indüklenmektedir.

Giriş

Sağ ventrikül (RV) bir kalıcı basınç aşırı uyarlayabilirsiniz. Zaman içinde ancak, kardiyak output, RV genişletir sürdürebilmek adaptif mekanizmaların başarısız ve sonunda RV başarısız olur. Pulmoner arteriyel hipertansiyon (PAH), tromboembolik pulmoner hipertansiyon (CTEPH) ve konjenital kalp hastalığı bir basınç (veya birim) aşırı yükleme ile çeşitli formlar da dahil olmak üzere birkaç kardiyopulmoner bozuklukları ana prognostik faktör RV işlevi nedir karavana Yoğun tedaviye rağmen bu koşullarda baskın ölümsebebini RV hatasının kalır.

Benzersiz özellikleri^1,2 ve Embriyoda geliştirme³ / RV sonucu olarak, sol kalp yetmezliğinden elde edilen bilgi sadece sağ kalp yetmezliği için yaygınlaştırılması olamaz. Sağ kalp yetmezliği hayvan modelleri bu nedenle RV başarısızlık ve potansiyel farmakolojik tedavi stratejileri mekanizmaları araştırmak için gereklidir.

Orada deneysel SU5416 tarafından indüklenen pulmoner hipertansiyon modellerinin kombine hipoksi (SuHx)⁴ veya monocrotaline ile (MCT)⁵, RV başarısızlık sekonder pulmoner damarlara hastalığında hangi ikna etmek. Bu modeller ilaçlar tedavi edici etkileri hedefleyen pulmoner damarlara değerlendirmek için kullanılır. Hem SuHx hem de MCT modeli RV hata sabit olmayan afterload modellerdir. Sonuç olarak, RV işlevi bir iyileşme bir müdahale sonra afterload pulmoner vasküler etkileri azaltmak için ikincil veya karavan üzerinde doğrudan etkileri nedeniyle oluşur sonuçlandırmak mümkün değildir Buna ek olarak, MCT modeli birkaç ekstra kardiyak etkileri vardır.

Deneysel pulmoner gövde bantlama modellerinde, RV afterload pulmoner gövde mekanik bir daralma nedeniyle giderilmiştir. Bu bir müdahale doğrudan kardiyak etkileri üzerinde RV incelenmesi için herhangi bir pulmoner vasküler etkileri^6,7,8,9dan bağımsız sağlar. Genellikle, bantlama pulmoner gövde boyunca iğne yerleştirerek yapılır. O zaman bir bağ iğne ve pulmoner gövde çevresinde yerleştirilir ve bir düğüm ile bağlı ve iğne dikiş pulmoner gövde etrafında bırakarak kaldırılır. İğne göstergesi, bağlı olarak farklı derecelerde boğumların uygulanabilir ancak bu yaklaşım yaygın olarak kullanılan rağmen bunun bazı dezavantajları vardır. Bağ iğne ve pulmoner gövde bağlı olarak ilk, bantlama çapı tam olarak iğne dış çapı aynıdır. İkinci olarak, ne kadar sıkı düğüm bantlama belirli bir ölçüde yeniden zorlaştırır bağlıdır için önemli değişim olabilir. Bu daha büyük bir dağılım bir varyasyona bantlama çapı ve böylece yol açacaktır. Son olarak, düğüm zaman içinde gevşek gelebilir.

Bir çalışmada bir yarı-kapalı Tantal klibi pulmoner gövde¹⁰geçerlidir. Onlar küçük bir iç alan 1.10 mm² pulmoner gövde etrafında sıkıştırılmış ve bir 18 G iğne dikiş ile bantlama için tabi fareler karşılaştırıldığında. Genel olarak, klip ile bantlama az peri cerrahi komplikasyonlar ve veri farkı ile ilişkili idi.

Schou tarafından açıklanan ilkelere dayalı vd.¹¹, biz daha da geliştirilen ve RV hipertrofisi ve başarısızlık (PTB) modeli bantlama pulmoner gövde ile karakterizedir. Burada, önceki çalışmalar^12,13sonuçlara dayanarak bu modeli kullanan deneyimlerimiz mevcut. Bu model için hangi farklı RV başarısızlık fenotipleri ikna etmek için ayarlanabilir bir tam hazır ayar iç çapı, akciğer gövde etrafında bir titanyum klibi sıkıştırılır.

Protokol

Bütün fareler hayvan deneyleri ve hayvan deneyleri Bakanlık emrinde Danimarka kanunda açıklanan Danimarka Ulusal esaslarına göre tedavi edildi. Tüm deneyler kurumsal etik İnceleme Kurulu tarafından onaylanan ve hayvan araştırma (yetki numarası 2012-15-2934-00384, Adalet Bakanlığı Danimarka) Danimarkalı yasalara uygun olarak yapılmıştır.

1. Ligating klip uygulayıcı düzeltilmesi

Not: Pulmoner bagajında bantlama açılı bir çene ile değiştirilmiş açık ligating klip uygulayıcı ile gerçekleştirilir. Uygulayıcı çene birbirinden kesin bir mesafeye ulaşabilmeniz sıkıştırma işlemi durdurmak için bir ayarlanabilir stop mekanizması ile değiştirilir. Klip birleştirilmesi (ligasyon) küçük bir titanyum ile değiştirilmiş uygulayıcı sıkıştırıldığında, bir lümen stop mekanizması (Şekil 1) düzeltilmesi göre belirli bir çap ile klip bacaklarının arasına devam ederse.

1. İstenen bantlama çapı örneğin seçin, 0.6 mm.
2. Çene arasındaki uzaklığı 1,0 tam sıkıştırıldığında mm olana ligating klip uygulayıcı ayarlayın. 0.2 mm kalınlığında iki küçük bacakları vardır gibi bu bir lümen 0.6 mm bırakır.

Şekil 1: PTB yordam. Ligating klip uygulayıcı (mavi ok) dahil olmak üzere PTB yordam için kullanılan (A) cerrahi aletler. Birleştirilmesi (ligasyon), (B) ayarlanabilir stop mekanizması küçük uygulayıcı. Dişli (mavi ok) dönüm PIN (sarı ok), çene belli bir mesafe diğer her ulaştığında hangi uygulayıcı kapanış durmak konumunu ayarlar. Ne zaman belgili tanımlık kırpmak sıkıştırılır ve örneğin bilinen dış çapı ile bir iğne kullanılarak kalibre mesafe iki kez bacaklar Clip artı Clip iç çap kalınlığı karşılık gelir. (C) Uygulayıcı tam bir iç çapı uygulayıcı ayarlama tarafından önceden belirtilen bir titanyum klibine sıkıştırır. (D) iç çapı sıkıştırılmış Clip RV hipertrofisi ve başarısızlık farklı severities ikna etmek için ayarlanabilir. Sunulan veriler için bir iç çapı 1.0 mm hafif RV hipertrofisi ikna etmek için kullanılan, 0.6 mm bir iç çapı orta RV yetmezliği ikna etmek için kullanılan ve bir iç çapı 0.5 mm ağır RV başarısızlık ikna etmek için kullanıldı. (E) pulmoner gövde etrafında uygulamadan sonra klip. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

2. fare hazırlanması

Not: Analjezikler diğer rejimleri uygulanabilir.

1. Yaklaşık 100-120 g ağırlığındaki Wistar sıçan weanlings kullanın. Ameliyat sırasında vücut ısısını korumak için kapalı ısıtma yastığını kullanın.
2. Ameliyat için yaklaşık 1,75 mL tidal volume ve 75 dk başına solunum hızını ayarla mekanik solunum kullanın.
3. Sevoflurane (1, 5 L O₂%7 mix) bir indüksiyon odasında fareyle 5 dakikalığına uyuşturan. 17 G IV Kanül nerede distal 2 mm iğne kesilmiş oldu sipariş için belgili tanımlık uç kapsayacak şekilde yumuşak kateter kullanarak fare tüp takacağım. İğneyi çıkarın ve kanül vantilatöre bağlamak.
4. Fareyi ısıtma yastığını sırtını yerleştirin. Toraks ve hareketleri gözlemleyerek entübasyon doğru olduğundan emin olun. Bunlar yan farklılıklar olmadan ve inç olmalıdır hızı ile solunum.
   Not: Yanlış yerleştirilmiş bir tüp belirtileri toraks, karın kasılmaları ve enflasyon mide üst sol karın hareketleri yokluğu. Kanül kaldırmak, indüksiyon odasında fare koymak ve yeniden tüp takacağım.
5. Doğru entübasyon sonra sevoflurane bakım konsantrasyon için azaltmak (% 3,5 karışımda O_2, 1, 5 L/dak) ve belgili tanımlık paws için ısıtma yastığını fare düzeltmek.
6. Sonda anesthetization para çekme refleksleri belgili tanımlık paws farenin sıkmak için bir forseps kullanarak ekstremitelerde kontrol ederek onaylayın.
7. Fareler buprenorfin ile enjekte (0.1 mg/kg subkutan (SC)) ve carprofene (5 mg/kg SC) ameliyat sonrası ağrı gidermek için.
8. Göğüs tıraş ve klorheksidin ile dezenfekte.

3. yalıtım pulmoner gövde

1. Makas çifti ile göğüs kemiği orta kısmı boyunca Cilt 2 cm kesi yapmak. Büyük göğüs kas tanımlamak ve onun sternal eki kesti. 2^nd, 3^rdve 4^th Kosta aşağıdaki tanımlar.
2. İsteğe bağlı olarak, 2^nd costa (4-0, multifilament, absorbe) dikiş çevresinde 2^nd costa 1^st interkostal uzaydan 2^nd interkostal boşluk mediyal alt kısmında koymak bir fiksasyon forseps ile kapmak. Anterior torasik arter ligate için sağlam bir düğüm.
   Not: Bu anterior torasik arterin kanaması tekrarlayan bir konudur, bu yararlı olabilir.
3. 4^th, 3^rdve 2^nd Kosta sternum yakın makas çifti ile kesmek ve gerçekleştirilen tam sol torakotomi kadar interkostal kaslara dikkatle incelemek. Anterior torasik arterin bir kanama meydana gelirse, bir Stan ile sıkıştırmak ve arter ligate.
4. Retraktörü göğüs kemiği ve costae arasında yerleştirin ve iyi bir çalışma alanı almak için açın. Alanın üst kısmında kaplama aort ve pulmoner gövde timus alır. Dikkatle timus bir Stan kullanarak kaldırın ve aort ve pulmoner gövde aşağıda göstermek yukarıya doğru çevirin.
5. Sol atriyal apendiks bulunan enine perikardiyal sinüs ile 85 ° açı ile küçük bir cerrahi hooklet ucu Kılavuzu. Yarıya kadar sinüse çekin ve artan aort ve pulmoner gövde arasında görünene kadar Kulak Kancalı ucu yukarı doğru yol.
   1. Herhangi bir bağ dokusu artan aorta pulmoner gövde ayırmak için bir Iris makas ucuyla kapsayan kaldırın.
   2. Daha büyük kanca (isteğe bağlı) ile adımı yineleyin.
6. Bir açılı kas forseps ile hook(s) yapılan Gecitten pulmoner gövde etrafında kılavuz. Ucundan tut bir yaklaşık 10 cm bağ (4-0, multifilament) ve çekme bağ yarısı geçitten geri. Şimdi pulmoner gövde artan aort ayrılır ve çevresindeki bağ tarafından kontrol.

4. uygulama Clip

1. Ayarlanan ligating klip uygulayıcı bir klip ile yükleyin. Dikkatle bir çene ve klibin bir bacak yine de geçit pulmoner gövde etrafında kılavuz. Bağ yavaşça pulmoner gövde yukarı ve çatal Clip içine çekmek için kullanın.
2. Pulmoner gövde klibi çatal ve küçük ayakları ve iki ipuçları herhangi bir bağ dokusu özgür olduğunda klibi formatlama uygulamak için uygulayıcı ile sıkıştırın.
3. Nasıl RV hemen bantlama karşılık genişletir gözlemlemek ve bağ kaldırın.

5. toraks ve kapanış

1. Stan timus kaldır ve timus doğal konumuna yeniden konumlandırmak. Retraktörü kaldırın.
2. Toraks üç katmanlarında kapatın: interkostal katmanı, büyük göğüs kas ve deri dikiş (4-0, multifilament, absorbe) ile. Ameliyat sırasında kayıp sıvı yerine tuzlu SC 2 mL enjekte.
3. Sevoflurane devre dışı bırakmak ve ve vantilatör (O2 1, 5 L) o kadar sıçan başlar kendiliğinden nefes tutun. O zaman, fareyi tübü.
4. Aşağıdaki üç gün¹⁴ içme suyundaki buprenorfin farelerle tedavi veya benzer bir analjezik Protokolü uygulayın. Üç gün sonra fareler iyileşti ve rahatsızlık vardır.
5. Aşağıdaki haftalarda iyi olmak fareler ve olası yan etkileri günlük olarak değerlendirilmelidir. Torakotomi yaradan şifa özel ilgi ilk haftasında enfeksiyon belirtisi veya yetersizlik Yildiz algılamak için almanız gerekir. Fareler kıllı kürk, Engelli hareketlilik, solunum problemleri ve kilo kaybı da dahil olmak üzere gelişmek için hata belirtileri gösteriyorsa, onlar yakından izlenmeli ve kendi vücut ağırlığı % 20'den fazla kaybeder veya fulminan geliştirmek euthanized solunum yetmezliği.

6. sham cerrahi

1. Tüm Clip (adım 4) uygulama dışında yukarıdaki adımları takip ederek bir sahte ameliyatı.

Sonuçlar

Bizim grup^12,13önceki çalışmalarda nitelendirdi PTB işlemi uygulayarak, Biz RV hipertrofisi (PTB hafif) 1.0 mm klibi, ılımlı bir derecesi 0.6 mm klibi ise bir bantlama tarafından RV başarısızlık (PTB orta) ve şiddetli bir derecesi ile yapıştırma tarafından indüklenen 0,5 mm klibi ise bir bantlama tarafından RV başarısızlık (PTB şiddetli). Fareler ve şiddetli bantlama gelişmiş ekstra kalp belirtileri kar...

Tartışmalar

Bir titanyum klibi pulmoner gövde etrafında sıkıştırmak için değiştirilmiş ligating klip uygulayıcı kullanarak pulmoner gövde bantlama bir erişilebilir ve son derece tekrarlanabilir yöntemi açıklamak. Uygulayıcı farklı iç çapları klibine sıkıştırmak için ayarlayarak, RV hipertrofisi ve başarısızlık ayrı fenotipleri şiddetli RV başarısızlık ile ekstra kardiyak dekompansasyon tezahürü de dahil olmak üzere indüklenen.

Her ne kadar basit, protokol birkaç ...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
17 G IV Venflon Cannula	Becton Dickinson, US	393228	Distal 2 mm of the needle have been cut off
1 mL syringe + 26 G needle	Becton Dickinson, US	303172 & 303800
4-0 absorbable multifilament suture	Covidien, US	GL-46-MG	Polysorb, violet, 5x18"
4-0 multifilament ligature	Covidien, US	LL-221	Polysorb, violet, 98"
Buprenorphine	Indivior UK Limited		Local procurement, Temgesic 0.3 mg/mL
Carprofene	ScanVet, DK	27693	Norodyl 50 mg/mL
Chlorhexidine	Faaborg Pharma, DK		Local procurement
Contractor	Aesculap, Germany	BV010R	Blunt, self retaining, 70 mm
Ear Hooklet	Lawton, Germany	66-0261	Small, 14 cm, tip modified to an angle of 85°
Eye gel	Decra, UK		Lubrithal, Local procurement
Forceps, Delicate Tissue	Lawton, Germany	09-0020
Forceps, Dissecting	Lawton, Germany	09-0013	1 regular, 1 with tip modified to an angle of 100°
Gas Anesthesia System	Penlon Limited, UK	SD0217SL	Sigma Delta Vaporizer
Hair trimmer	Oster	76998-320-051
Horizon Open Ligating Clip Applier	Teleflex, US	137085	Modified with adjustable stop mechanism
Horizon Titanium Clips	Teleflex, US	001200	Small
Induction chamber	N/A
Iris Scissor	Lawton, Germany	05-1450
Iris Scissor	Aesculap, Germany	BC060R
Mechanical ventilator	Ugo Basile, Italy	7025
Microscissor	Lawton, Germany	63-1406
Microscope	Carl Zeiss, Germany	303294-9903
Needle Holder	Lawton, Germany	08-0011	TITEGRIP
Pean	Lawton, Germany	06-0100	Halsted-Mosquito, straight
Pro-Optha	Lohmann & Rauscher, Germany	16515	Tampon
Saline 9 mg/mL	Fresenius Kabi, DK	209319
Sevoflurane	AbbVie, US		Sevorane, Local procurement
Surgical hook	Lawton, Germany	51-0665	Cushing, 19 cm, tip modified to an angle of 90°
Surgical Tape	3M, US	1530-0	Micropore
Temperature Controller	CMA Microdialysis; Sweden	8003760	CMA 450
Weighing machine	VWR, US
Wistar rat weanlings	Janvier Labs, France		RjHan:WI, 100-120 g