Ölçüm Hypopharyngeal bezi Acinus boyutunda bal arı (Apis mellifera) işçi

Özet

Hypopharyngeal bezi acinus boyutu hemşire bal arı beslenme sağlam bir ölçüsüdür. Burada, biz anatomi, boyama, görüntüleme ve hemşire arı hypopharyngeal bezi acini ölçme için detaylı bir protokol sağlar.

Özet

Hemşire hypopharyngeal bezleri işçi ve larva ve kraliçeler geliştirmek için beslenen arı sütü protein fraksiyonu üretmek. Arı kafanın içinde yer alan bu eşleştirilmiş bezleri miktar için son derece hassas ve hemşire arı tüketir kalitesi polen ve polen ile değiştirir. Ne zaman hemşire eksik diyetler beslenir ve ne zaman onlar tam diyetler fed büyük bezleri daha küçük olsun. Hemşire hypopharyngeal bezi boyutu hemşire beslenme sağlam bir göstergesidir çünkü bal arı beslenme eğitim görenler bu bezleri ölçmek nasıl bilmek önemlidir. Burada, anatomi, boyama, görüntüleme ve hemşire arı hypopharyngeal bezleri ölçme için detaylı yöntemleri sağlamak. Biz günahı ve lekeli doku ve polen bezi boyutuna etkisi çalışma için kullanılan veri karşılaştırmalar mevcut. Bu yöntem nasıl diyet hypopharyngeal bezi boyutu etkiler ama bu bezleri kovan sağlıkta rolünün anlaşılması için daha fazla kullanımı vardır sınamak için kullanılır.

Giriş

İnsanlar ve hayvanlar tarafından tüketilen bitkileri çeşitli tozlaşmak çünkü bal arıları Tarım için gereklidir. Çok dikkat bal arı nüfus düşüş için her yıl Amerika Birleşik Devletleri¹ ve 10-%15 Europe^2,3' te koloni kayıp vurgulu yaklaşık 30-%40 ödendi. Multipl faktörler, yüksek kaliteli sınırlı erişim dahil olmak üzere hayvan yemi için büyük olasılıkla hareket birlikte bal arı sağlığı olumsuz. Monokültür, kuraklık, sürdürülemez Arıcılık uygulamaları ve diğer faktörler çeşitlilik ve doğal sporlari kolonileri^4,5için kullanılabilir miktarını azaltın. Bal arıları neredeyse tüm diyet proteinler ve yağlar polen türetmek için polen azaltılmış erişim ciddi koloni ve bireysel sağlık sınırlayabilirsiniz.

Hypopharyngeal bezleri arının kafa göz ve beyin⁶arasında bulunan salgı yapılardır. Normal şartlar altında bu yer alan arı ayna bezleri gelişimsel ve fonksiyonel yörünge. Yaş yaklaşık 5 – 10 gün, arı kovanında hemşirelik davranışları gerçekleştirir. Bu aynı zamanda onların en yüksek boyutu ve damızlık yiyecek veya jöle larva ve Kraliçe gibi diğer yetişkin geliştirmek için beslenen büyük protein fraksiyonu üreten salgı kapasite hypopharyngeal bezleri ulaşmak. Bu en yüksek boyutu bezleri her üzüm ayrı lob yapı acinus bilinen nerede üzüm demet benzer (çoğul: acini). İşçi arı yaşları ve kovan içinde farklı görevler alır gibi hypopharyngeal bezleri küçültmek ve şekerler nektar^7,8aşağı kırma gibi farklı fonksiyonları almak. Hypopharyngeal bezleri bu nedenle arı ve onların yaş ilişkili görev yaş ile ilişkili.

Hemşire hypopharyngeal bezi miktar ve kalite protein kendi diyet^9,10,11' deki duyarlı boyutudur. Hemşire arılar iyi beslenen, onların bezleri büyük vardır. Ne zaman bezleri küçük ise, arı polen, özellikle yetişkin geliştirme ilk haftasında mahrum. Bir hemşire arı beslenme durumunu belirlemek için araştırmacılar genellikle hypopharyngeal bezleri, ya doğrudan bezi acinus boyut^11,12,13,14 ölçme ölçmek veya protein^15,16 içerik veya protein ölçerek¹¹ içerik veya taze¹⁷ bulundukları tüm baş ağırlık. Her yöntemin kendi artıları ve eksileri vardır. Bu yöntem iki önemli şekilde zor olabilir ama bezi acini ölçme elde edilen çözünürlük tercih ediyoruz. Düzgün tanımlamak ve bezi incelemek için ilk bir mücadeledir. İkinci her acinus doğru bir ölçü almaktır. Parçalanmış bir ışık mikroskop altında bezleri açık ya da Sütlü beyaz görünür ve acini sınırları tanımlamak zor olabilir. Araçlar daha iyi acini kenarını tanımlamak ve doğru bezi ölçümler elde etme olasılığını artırmak için sahip bal arı beslenme okuyan herkese faydalıdır.

İşte, teşrih, leke, resim ve böylece acinus boyutta doğru ölçümler elde hypopharyngeal bezleri ölçmek nasıl baktılar araştırmacılar göstermektedir. Biz tarif Yöntem araştırmacılar deneyci yeterince pratik bir kez zaman görece kısa bir süre içinde birden çok bezi ölçümler elde etmek için kolay, doğru ve yinelenebilir bir yöntem sunar. Bir güvenle sadece bir saatten fazla neredeyse 10 bireylerde bezlerinin ölçmek. Yöntemi ve bu ölçümler almak için gerekli malzemeler hakkında ayrıntılı bilgi veriyoruz. Aşağıda açıklanan yöntemleri en önemli yönleri uygun diseksiyon ve bezleri boyama vardır. Her ne kadar biz büyütülmüş görüntüleri yakalayabilir ve ticari yazılım ile acini ölçmek, biz mevcut yöntemleri kolayca diğer platformlar-¹⁸adapte edilebilir.

Protokol

1. anatomi ve hemşire işçiler üzerinden Hypopharyngeal bezleri boyama

1. Bir balmumu diseksiyon tabak serin ayarı balmumu bir küçük (60 mm x 15 mm) veya büyük (100 mm x 15 mm) cam Petri kabına erime hazırla. Balmumu tamamen plaka gruptakiler için kullanmadan önce soğuması.
2. Her arı işlenecek bir 1:20 Giemsa çözüm çalışma 20 µL hazırlamak (1:20 v/v ile hazırlanan fosfat tamponlu tuz Giemsa leke (PBS: 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na₂HPO₄, 1.8 mM KH₂PO₄)).
   Dikkat: Giemsa leke metanol içerir ve yanıcı. Yutulduğunda inhale, veya cilt ile temas gelirse zehirlidir. Bu, yerel kurumun gereksinimlerine göre atılmalıdır.
   Not: bir kez o seyreltilmiş Giemsa leke hızla düşer çünkü her zaman taze çalışan bir çözüm örnekleri geçerli toplu iş için olun. Bir çökelti geliştirirse seyreltilmiş leke atın.
3. Damlalıklı 20 µL Giemsa leke mikroskop slaytlar ve 50-100 µL serum kuyuya bitişik slayda kuyu içine.
4. 10 mm mikro-bahar makas kullanarak bir arı başından ayırmak ve baş ön yüzü forseps ve balmumu oyma kalem kullanarak balmumu diseksiyon plaka embed. Kafa içine balmumu plaka ek denge gözler ve ağız içinde iğne koyarak pin.
5. Keskin kırılabilir PIN mengene sabit jilet kullanarak yaptığınız küçük bir (~ 2-3 mm) kesi gözleri ve sapa yüz levha her tarafında arasında. Yavaşça yüz levha altında mikro makas koşmak ve anten ve beyin arasında çalışan antennal sinir kesti.
6. İyi forseps kullanarak, yüz levha ağız yoluyla tut, yukarı çevirin ve para cezası nokta forseps ve bir iğne ile balmumu plakasına pin. Gerekirse, yüz levha tamamen kaldırın.
7. Damlalıklı 20 µL PBS kesme üzerine kafa bölümünü açın.
   Not: Bezleri kadar bu noktada savrulabilir ya da biri onları aramak gerekir. Bezleri bir dizi inci gibi bakmak ve olduğu gibi Eğer beyin üstünde tepe-in bulunur.
8. Süper ince noktası forseps yavaşça (bezi, segmentlerinde silinmesine gerektiren bozabilir) hypopharyngeal bezleri birini kaldırmak için kullanın ve hemen bezinin mikroskobu slaytta Giemsa leke aktarın.
9. Bezi Giemsa solüsyona 5 min için kuluçkaya için izin ve forseps bezinin serum havuzu için aynı slaytta aktarmak için kullanın. Gerekirse, bezi mikro makasla daha küçük parçalar halinde kesin.
   Not: Bu böylece bezi acini net görüntüler elde etmek daha kolay hale düz bir düzlemde yalan bezleri hale getirmeye yardımcı olur.

2. hypopharyngeal bezi Acini ölçme

1. Mikroskobunun açmak ve ölçüm programı açın. Eğer üzerinde zaten değil mikroskop için ışık kaynağı açın. Mikroskop büyütme 10 X değerine ayarlayın.
2. Bezleri bulmak ve bilgisayar olmadan mercek büyütülmüş görüntü odak. 60-80 x büyütmeyi ve mercek görüntü odak.
3. 'Al' sekmesi altında ayarlamak ve bilgisayarınızdaki canlı görüntüsünü bezleri odaklanmak.
4. Görüntü adı/örnek açıklama 'Görüntü adı' kutusuna yazın ve 'Elde daha fazla ölçümler için bezlerinin fotoðraf için resime' tıklatın.
5. 'Analiz' sekmesini '( Tamamlayıcı şekil 1A' vurgulanmış) Select alan Aracı' ve ' aynı zamanda 'birimi' unselectEtiketlerini görüntüle' altında 'değer' seçimini kaldırır. Diğer tüm ayarlar için varsayılan (Tamamlayıcı şekil 1A) ayarlayın.
   Not: böylece daha düşük bir büyütme elde edilen alan bir daha yüksek büyütme elde aynı yazılım otomatik olarak alan ölçümleri büyütme düzeyine uygun ayarlar.
6. Her acinus sürekli tıklatarak veya sürekli olarak mümkün olduğunca dikkatli bir şekilde acinus çevre izleme sırasında sol fare düğmesini basılı tutarak ölçmek. Arı başına en az 10 acini ölçmek.
   Not: Daha fazla deney bağlı olarak gerekli olabilir ( tartışmabakın). Birden çok görüntü/bölüm ölçüm için yeterince net, düzgün odaklı acini bulmaya bezinin gerektirebilir.
7. Tüm tek bir görüntüden acini ölçülen var sonra 'Rapor oluştur' seçeneğini belirleyin. Seçenekleri ek Şekil 1B adımında gösterildiği gibi seçilir ve 'ver' tıklatın emin olun.
8. Raporu kaydetmek istediğiniz gibi. El örnekleri için oluşturulmuş bir dosya ve ek ölçümler eklenir, böylece yeni verileri varolan bir dosyaya eklenir rapor dosyası açık olmadığından emin olun.
9. Ne zaman tamamlanmak, mikroskop kamera ve ışık kaynağı kapatın. Sıvı ve bezleri mikroskobu slayt kapalı silin ve güvenli bir şekilde kullanılan herhangi bir malzemeden atmayın. Slaytlar distile su ile durulama ve temiz etanol (% 70 su v/v) yeniden kullanılmak üzere silin.

Sonuçlar

Hypopharyngeal bezleri hemşire işçilerden disseke ve ve 60-80 X büyütme (Şekil 1), leke olmadan görüntülenir. Günahı dokusunda tam olarak odaklanmak ve acini kenarlarını tanımlamak için uygun kontrast bulmak zordur. Lekeli dokusunda acini kenarlarını lekeli doku ve beyaz arka plan arasında geliştirilmiş kontrast nedeniyle keskin vardır.

Tartışmalar

Hypopharyngeal bezi boyutu protein ve diyet polen miktarı duyarlıdır ve beslenme Genç Yetişkin arılar içinde kritik bir belirtecidir. Burada, biz incelemek ve bu doku ölçmek için bir ucuz ve tekrarlanabilir yol göstermek. Bu doku incelemek zor olabilir ama uygulama ile bir nispeten sağlam dokusuyla giderek temiz diseksiyonlarının elde edebilirsiniz. Burada sunulan yöntem büyük avantajı doku, açıkça her bezi acinus sınırları görselleştirmek araştırmacı sağlayan lekeli olduğunu olduğunu. Bir...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cool setting wax	Grobet USA	21.450
Glass petri dish, small	VWR	89000-310
Glass petri dish, large	VWR	89000-314
Super Max Wax Pen	Eurotool	PEN-520.00
Breakable razor blades	Electron Microscopy Sciences	72004
pin vise	BioQuip	4845
2A-SA flat/rounded tip forceps	Rubis/BioQuip	4522
Fine point forceps	Rubis/BioQuip	4523
5A-SA super fine point forceps	Rubis/BioQuip	4525
10 mm micro spring scissors	BioQuip	4715
3 mm micro spring Vannas scissors	Roboz	RS-5610
Glass Depression Slides, Single Cavity	GSC International	4-13057-DZ-12
PBS tablets	VWR	97062-730
Giemsa stain, modified solution	Sigma Aldrich	32884
Insect pins	ENTO SPHINX S.R.O.	02.02
Leica Applications Suite measurement software	Leica Microsystems		any measurement software, including free software, can be used