Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Oosit kriyoprezervasyonu, postpubertal kadınlarda doğurganlığın korunması için altın standart olarak çeşitli uluslararası bilim toplumları tarafından kabul edilmektedir. Uygun klinik ve laboratuvar stratejileri, doğurganlık koruma tedavilerinin maksimum etkinliğini, verimliliğini ve güvenliğini sağlar.
Kadın doğurganlığının korunması, hastaların gelecekteki yaşam kalitesiyle ilgilenen çok işlevli bir sağlık sisteminde çok önemlidir. Oosit kriyoprezervasyonu, birçok uluslararası bilim topluluğu tarafından postpubertal kadınlarda doğurganlığın korunması için altın standart olarak kabul edilir, hem tıbbi hem de tıbbi olmayan endikasyonlar için. Başlıca tıbbi endikasyonlar onkolojik hastalıklar, ağır endometriozis gibi jinekolojik hastalıklar, yumurtalık rezervini tehlikeye atarak sistemik hastalıklar ve erken menopoz içeren genetik durumlardır. Bu makalede, objektif ve kanıta dayalı danışmanlık önerileri sıralanarak doğurganlık koruma tedavisinin tüm klinik ve laboratuvar çalışmaları açıklanmaktadır. Ayrıca, prosedürün etkinliğine odaklanır ve yumurtalık rezervinden tam olarak yararlanmak ve mümkün olan en kısa sürede alınan oosit sayısını en üst düzeye çıkarmak için en uygun stratejileri açıklar. Yumurtalık rezervinin değerlendirilmesi, ideal bir stimülasyon protokolünün tanımı, ayrıca oosit alma, denudasyon ve vitrifikasyon prosedürleri, etkinliklerini, verimliliklerini ve güvenliklerini en üst düzeye çıkarmak için yaklaşımlarla birlikte ayrıntılı olarak verilmiştir.
İnsan oositleri için verimli bir kriyoprezervasyon programının geliştirilmesi ve uygulanması üreme tıbbında önemli bir atılım olmuştur. Son kanıtlara göre, vitrifikasyon, hasta popülasyonundan bağımsız olarak (infertil hastalar veya oosit bağış programı) 1 ,2,3' e kıyasla yavaş donmaya kıyasla istatistiksel olarakdaha yüksek sağkalım oranları ile sonuçladığı için, metafaz II (MII) oositlerini kriyoprezite etmek için en etkili stratejidir. Oosit vitrifikasyonunun dikkat çekici başarıları, Amerikan Üreme Tıbbı Derneği (ASRM) ve Yardımcı Üreme Teknolojisi Derneği (SART) Uygulama Komitelerinin bu tekniği postpubertal kadınlarda hem tıbbi hem de tıbbi olmayan endikasyonlar için elektif doğurganlığın korunmasında en etkili olacak şekilde telaffuz etmesine yol açmıştır4,5,6. Doğurganlığın korunması için tıbbi endikasyonlar şunlardır: (i) radyoterapi, sitotoksik kemoterapi ve endokrin tedavi gibi7 tedavi gerektiren kanser ve otoimmün hastalıklar (yumurtalık rezervi üzerindeki zararlı etkisi anne yaşı ve tedavinin türü ve dozu ile ilişkilidir); (ii) tekrarlanan veya radikal cerrahi gerektiren yumurtalık hastalıkları (endometriozis gibi)8; ve (iii) genetik durumlar (örneğin, X-kırılgan) veya erken yumurtalık yetmezliği. Ek olarak, doğurganlığın korunması, tıbbi olmayan nedenlerle (sosyal donma olarak da bilinir) ebeveyn hedefini gerçekleştiremeyen tüm kadınlar için değerli bir seçenek haline gelmiştir.
Doğurganlığın korunması için endikasyondan bağımsız olarak ve doğurganlığın korunmasına ilişkin başlıca uluslararası yönergelere göre, oositlerini vitrifiye etmek isteyen tüm hastalar, gerçekçi başarı şansları, maliyetleri, riskleri ve prosedürün sınırlamaları hakkında bilgi sahibi olmak için uygun danışmanlık almalıdır9, 10,11,12,13. En önemlisi, bir MII oosit kohortunun vitrifiye edilmesi hamileliği sağlamaz, ancak gerekirse gelecekteki in vitro fertilizasyon (IVF) tedavisi için daha yüksek bir başarı şansı sunduğu açık olmalıdır14. Bu bağlamda, kadının oosit vitrifikasyonu sırasındaki yaşı kesinlikle en önemli sınırlayıcı faktördür15 ileri anne yaşı (AMA; >35 yıl) kadın kısırlığının ana nedenidir16. Yumurtalık rezervinde ilerleyici bir azalmanın yanı sıra, AMA metabolizma, epigenetik düzenleme, hücre döngüsü kontrol noktaları ve meiotik ayrım gibi kusurlu fizyolojik yollar nedeniyle oosit yeterliliği bozukluğu ile ilişkilidir17. Bu nedenle, vitrifiye etmek için makul sayıda yumurta esas olarak anne yaşına bağlıdır. 36 yaşından küçük kadınlarda başarı şansını en üst düzeye çıkarmak için en az 8-10 MII oosit18 gereklidir. Genel olarak, vitrifiye oosit sayısı ne kadar yüksekse, başarı olasılığı da o kadar yüksektir. Bu nedenle, yumurtalık rezervinin anti-Müllerian hormon (AMH) seviyeleri veya antral folikül sayısı (AFC) gibi yumurtalık rezervi belirteçlerine göre uyarılması, yumurtalık rezervinin mümkün olan en kısa sürede tam olarak istismar etmesi için çok önemlidir.
Tüm prosedürün güvenliği, hastaları doğurganlık korumasına kaydederken diğer önemli konudur. Klinisyenler, riskleri en aza indirmek ve (i)yumurtalık hiperstimülasyon sendromunun (OHSS) gonadotropin salgılayan hormon (GnRH) antagonist protokolü ve ardından bir GnRH agonisttetikleyicisi 19 ve (ii) uzaktan kumanda gibi güvenli yaklaşımları kullanarak önlemek için en iyi stratejileri kullanmalıdır, ancak olası, periton kanaması riskleri, pelvik yapılarda yaralanma (üreter, bağırsak, apandisit, sinirler) veya oosit alımı sırasında pelvik enfeksiyon. Son olarak, (iii) stimülasyon için geleneksel rejimler suprafizyolojik serum estradiol ile ilişkilidir ve bu nedenle meme kanseri gibi östrojene duyarlı hastalıklarda önerilmez. Aromataz inhibitörlerini (letrozol veya tamoksifen gibi) içeren protokoller bu durumlarda daha uygundur20,21. Laboratuvar ortamında, oosit vitrifikasyonu için en yaygın protokol hala Kuwayama ve meslektaşları tarafından ilk açıklananprotokoldür 2,23 , kriyoprotekantların(CPAs)kademeli olarak eklenmesini içeren adım adım bir prosedürden oluşur. İlk fazda (denge/dehidratasyon) oositler %7,5 v/v etilen glikol ve %7,5 v/v dimetil sülfit (DMSO) içeren bir CPA çözeltisinde maruz kalırken, ikinci aşamada, oositler% 15 v / v etilen glikol ve% 15 v / v DMSO, artı 0.5 mol / L sakkaroz ile bir vitrifikasyon çözeltisine taşınır. Vitrifikasyon ortamında kısa bir inkübasyondan sonra, oositler özel olarak tasarlanmış, açık kriyodevices içine yerlenebilir ve son olarak kullanıma kadar saklanmak üzere -196 ° C'de sıvı nitrojene daldırılabilir.
Burada, bir doğurganlık koruma tedavisinin tüm klinik ve laboratuvar çalışmaları (i) objektif ve kanıta dayalı danışmanlık için önerilerin özetlenmesi, (ii) prosedürün maliyet etkinliğine odaklanılması ve (iii) yumurtalık rezervinden tam olarak yararlanmak ve mümkün olan en kısa sürede alınan oosit sayısını en üst düzeye çıkarmak için en uygun stratejileri tanımlamakla tanımlanmıştır. Yumurtalık rezervinin değerlendirilmesi, ideal bir stimülasyon protokolünün tanımı, ayrıca oosit alma, denudasyon ve vitrifikasyon prosedürleri, etkinliklerini, verimliliklerini ve güvenliklerini en üst düzeye çıkarmak için yaklaşımlarla birlikte ayrıntılı olarak açıklanacaktır. Literatürde bu protokolün diğer protokolleri veya uyarlamaları mevcut olduğu için, bu makalenin temsili sonuçları ve tartışma bölümleri sadece bu prosedür için geçerlidir.
1. İş ve klinik danışmanlık
NOT: Onkolojik nedenlerle doğurganlığın korunmasını gerektiren hastalarda, konsültasyon planlama için bekleme listesi olmadığından ve randevunun mümkün olan en kısa sürede sağlandığından emin olun.
2. Doğurganlığın korunması için kontrollü yumurtalık stimülasyon protokolleri
NOT: Kanser tedavisine başlamadan önce mevcut süre sınırlı olduğunda, doğurganlığın korunmasına aday onkolojik hastalarda yumurtalık stimülasyonu için rastgele başlangıç protokolü (yani adet döngüsü sırasında herhangi bir zamanda yumurtalık stimülasyonuna başlama) önerilir. Acil olmayan tıbbi nedenlerle veya sosyal nedenlerle doğurganlık koruma programında, erken foliküler fazda başlayan konvansiyonel stimülasyon tercih edilir ve adet döngüsüne göre yumurtalık stimülasyonuna başlanır. Kontrollü yumurtalık stimülasyonu (COS) yaklaşımları son Avrupa İnsan Üreme ve Embriyoloji Derneği (ESHRE) yönergelerine göre yapılmalıdır24.
3. Oosit alımı
4. Tüp bebek laboratuvarı
5. Oosit denudasyonu
6. Oosit vitrifikasyonu
NOT: Tercihen 38 saat içinde ve denudasyondan hemen sonra oosit vitrifikasyonu gerçekleştirin. Burada açıklanan vitrifikasyon prosedürü, manipülasyon sırasında oositlere zarar vermemek için oda sıcaklığında (RT) ve iç çapı 170 μm olan bir striptizci pipet kullanılarak yapılmalıdır.
7. Oosit ısınması
Merkezdeki doğurganlık koruma programına genel bakış
12 yıllık bir süre boyunca (2008-2020), 285 kadın, toplanan olgun yumurtaların tüm kohortunun vitrifikasyonu gerektiren en az bir oosit alımı geçirdi. Bu kadınların çoğu (n=250) tek bir geri alma işleminden, 35'inden ise birden fazla geri alma işlemi yapıldı. Yumurta vitrifikasyonu için oosit alımının nedenleri 4 kategoride özetlenmiştir: tıbbi (kanser hariç), kanser, tıbbi olmayan ve diğerler...
Klinik hususlar
Yumurtalık dokusu kriyoprezervasyonu ve in vitro olgunlaşma gibi gelişmekte olan stratejiler araştırılmış olsa da, COS sonrası oosit vitrifikasyonu doğurganlığın korunması için altın standart tekniktir. Bu senaryoda, çoğu kanser hastası kanser tedavilerine başlamadan önce sadece bir yumurtalık döngüsünden yararlanabileceğinden, alınan ve kriyoprezerserve edilen oosit sayısı mümkün olan en kısa sürede en üst düzeye çıkarılm...
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Hiç kimse
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Collection | |||
Equipment | |||
Hot plate | IVF TECH | ||
Lab Markers | Sigma Aldrich | ||
Laminar Flow Hood | IVF TECH | Grade A air flow | |
Stereomicroscope | Leica | Leica M80 | |
Thermometer | |||
Test tube Warmer | |||
Tri-gas incubator | Panasonic | MCO-5M-PE | 02/CO2 |
Vacuum Pump | Cook | K-MAR-5200 | |
Consumables | |||
CSCM (Continuos single culture complete) medium | Fujifilm Irvine Scientific | 90165 | IVF culture medium supplemented with HSA |
Mineral Oil for embryo culture | Fujifilm Irvine Scientific | 9305 | |
Ovum Aspiration Needle (Single lumen) | Cook | K-OSN-1730-B-60 | |
Primaria Dish | Corning | 353803 | Corning Primaria Dish 100x20 mm style standard cell culture dish |
Round- bottom tubes | Falcon | 352001 | Falcon 14ml Round Bottom Polystyrene Test tube with snap cap |
Round- bottom tubes | Falcon | 352003 | Oocyte collection tubes/ Falcon 5ml 12x75 Round Bottom Polipropilene Test tube with snap cap |
Rubber Bulb | Sigma Aldrich | Z111589-12EA | |
Sterile glass Pasteur pipettes | Hunter Scientific | PPB150-100PL | Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE |
Denudation | |||
Equipment | |||
CO2 incubator | Eppendorf | Galaxy 14S | |
Flexipet adjustable handle set | Cook | G18674 | Stripper holder |
Gilson Pipetman | Gilson | 66003 | p20 |
k-System Incubator | Coopersurgical | G210Invicell | |
Lab Markers | Sigma Aldrich | ||
Laminar Flow Hood | IVF TECH | Grade A air flow | |
Stereomicroscope | Leica | Leica M80 | |
Consumables | |||
Biopur epTIPS Rack | Eppendorf | 30075331 | Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 µl |
Human Serum Albumin | thermoFisher Scietific | 9988 | |
Hyaluronidase | Fujifilm Irvine Scientific | 90101 | 80 IU/mL of hyaluronidase enzyme in HEPES-buffered HTF |
IVF culture dish (60 x 15mm) | Corning | 353802 | Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish |
IVF dish 4-well plate with sliding lid | ThermoFisher Scietific | 176740 | Multidishes 4 wells (Nunc) |
IVF One well dish | Falcon | 353653 | Falcon 60 x 15 mm TC treated center-well IVF |
Mineral Oil for embryo culture | Fujifilm Irvine Scientific | 9305 | |
Modified HTF Medium | Fujifilm Irvine Scientific | 90126 | HEPES-Buffered medium |
Rubber Bulb | Sigma Aldrich | Z111589-12EA | 1 mL for pasteur pipettes |
Sterile glass Pasteur pipettes | Hunter Scientific | PPB150-100PL | Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE |
stripping pipette tips (140 µm) | Cook | K-FPIP-1140-10BS-6 | PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING |
stripping pipette tips (130 µm ) | Cook | K-FPIP-1130-10BS-7 | PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING |
stripping pipette tips (170 µm) | Cook | K-FPIP-1170-10BS-5 | PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING |
Vitrification | |||
Equipment | |||
Electronic Timer | |||
Flexipet adjustable handle set | Cook | G18674 | Stripper holder |
Gilson Pipetman | Gilson | F123601 | p200 |
Lab Markers | Sigma Aldrich | ||
Laminar Flow Hood | IVF TECH | Grade A air flow | |
Stainless Container for Cooling Rack | Kitazato | Liquid nitrogen container for vitrification | |
Stereomicroscope | Leica | Leica M80 | |
Consumables | |||
Biopur epTIPS Rack | Eppendorf | 30075331 | Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 µL |
Human Serum Albumin | Fujifilm Irvine Scientific | 9988 | |
IVF culture dish (60 x 15 mm) | Corning | 353802 | Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standard cell culture dish |
IVF dish 6-well | Oosafe | OOPW-SW02 | OOSAFE 6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER |
Modified HTF Medium | Fujifilm Irvine Scientific | 90126 | HEPES-Buffered medium |
stripping pipette tips (170 µm) | Cook | K-FPIP-1170-10BS-5 | PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING |
Vitrification Freeze kit | Fujifilm Irvine Scientific | 90133-so | 2 Vials of ES (Equilibration Solution, 2 x 1 mL) and 2 Vials of VS (Vitrification Solution, 2 x 1 mL) |
Vitrifit | Coopersurgical Origio | 42782001A | VitriFit Box |
Warming | |||
Equipment | |||
Electronic Timer | |||
Flexipet adjustable handle set | Cook | G18674 | Stripper holder |
Gilson Pipetman | Gilson | F123601 | p200 |
k-System Incubator | Coopersurgical | G210Invicell | |
Lab Markers | Sigma Aldrich | ||
Laminar Flow Hood | IVF TECH | Grade A air flow | |
Stainless Container for Cooling Rack | Kitazato | Liquid nitrogen container for vitrification | |
Stereomicroscope | Leica | Leica M80 | |
Consumables | |||
Biopur epTIPS Rack | Eppendorf | 30075331 | Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 µL |
CSCM (Continuos single culture complete) medium | Fujifilm Irvine Scientific | 90165 | IVF culture medium supplemented with HSA |
IVF culture dish (60 x 15 mm) | Corning | 353802 | Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish |
IVF dish 4-well plate with sliding lid | ThermoFisher Scietific | 176740 | Multidishes 4 wells (Nunc) |
IVF dish 6-well | Oosafe | OOPW-SW02 | OOSAFE® 6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER |
Mineral Oil for embryo culture | Fujifilm Irvine Scientific | 9305 | |
SAtripping pipette tips (300µm) | Cook | K-FPIP-1300-10BS-5 | PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING |
Vitrification Thaw kit | Fujifilm Irvine Scientific | 90137-so | 4 Vials of TS (Thawing Solution, 4 x 2 mL) + 1 Vial of DS (Dilution Solution, 1 x 2 mL) +1 Vial of WS (Washing Solution, 1 x 2 mL) |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır