Conservazione della fertilità attraverso la vitrificazione degli ovociti: prospettive cliniche e di laboratorio

Riepilogo

La crioconservazione degli ovociti è riconosciuta da diverse società scientifiche internazionali come il gold standard per la conservazione della fertilità nelle donne postpuberali. Adeguate strategie cliniche e di laboratorio garantiscono la massima efficacia, efficienza e sicurezza dei trattamenti di conservazione della fertilità.

Abstract

Preservare la fertilità femminile è fondamentale in un sistema sanitario multifunzionale che si prende cura della futura qualità della vita dei pazienti. La crioconservazione degli ovociti è riconosciuta da diverse società scientifiche internazionali come il gold standard per la conservazione della fertilità nelle donne postpuberali, sia per indicazioni mediche che non mediche. Le principali indicazioni mediche sono le malattie oncologiche, le malattie ginecologiche come l'endometriosi grave, le malattie sistemiche che compromettono la riserva ovarica e le condizioni genetiche che comportano la menopausa precoce. Questo documento descrive l'intero work-up clinico e di laboratorio di un trattamento di conservazione della fertilità delineando raccomandazioni per una consulenza obiettiva e basata sull'evidenza. Inoltre, si concentra sull'efficacia della procedura e descrive le strategie più appropriate per sfruttare appieno la riserva ovarica e massimizzare il numero di ovociti recuperati nel più breve tempo possibile. La valutazione della riserva ovarica, la definizione di un protocollo di stimolazione ideale, nonché le procedure di prelievo degli ovociti, denudazione e vitrificazione sono state dettagliate insieme agli approcci per massimizzarne l'efficacia, l'efficienza e la sicurezza.

Introduzione

Lo sviluppo e l'implementazione di un efficiente programma di crioconservazione per gli ovociti umani è stato un passo avanti significativo nella medicina riproduttiva. Secondo recenti evidenze, la vitrificazione è la strategia più efficace per crioconservare gli ovociti della metafase II (MII), in quanto si traduce in tassi di sopravvivenza statisticamente più elevati rispetto al congelamento lento, indipendentemente dalla popolazione di pazienti (pazienti infertili o programma di donazione di ovociti)^1,2,3. I notevoli risultati della vitrificazione degli ovociti hanno porta....

Protocollo

1. Work-up e consulenza clinica

NOTA: Nel caso di pazienti che richiedono la conservazione della fertilità per motivi oncologici, assicurarsi che non vi sia alcuna lista d'attesa per la pianificazione della consultazione e che l'appuntamento sia fornito il prima possibile.

1. Esaminare la storia medica e la documentazione precedente e valutare lo stato di salute generale del paziente.
2. Registrare tutte le informazioni (compresa l'approvazione dell'oncologo a sottoporsi a stimolazione ovarica in caso di pazienti oncologiche) in un database relazionale.
3. Fornire al paziente una consulenza specifica sulla fattibilità d....

Risultati

Panoramica del programma di conservazione della fertilità al centro

In un periodo di 12 anni (2008-2020), 285 donne sono state sottoposte ad almeno un prelievo di ovociti che ha comportato la vitrificazione dell'intera coorte di ovuli maturi raccolti. La maggior parte di queste donne (n = 250) ha subito un singolo recupero e 35 hanno subito più recuperi. Le ragioni per sottoporsi al prelievo di ovociti per la vitrificazione degli ovuli sono riassunte in 4 categorie: medico (.......

Discussione

Considerazioni cliniche

Sebbene siano state esplorate strategie emergenti, come la crioconservazione del tessuto ovarico e la maturazione in vitro, la vitrificazione degli ovociti dopo COS è la tecnica gold standard per la conservazione della fertilità. In questo scenario, il numero di ovociti recuperati e crioconservati dovrebbe essere massimizzato nel più breve tempo possibile poiché la maggior parte dei pazienti oncologici potrebbe beneficiare esclusivamente di un cicl.......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Collection
Equipment
Hot plate	IVF TECH
Lab Markers	Sigma Aldrich
Laminar Flow Hood	IVF TECH		Grade A air flow
Stereomicroscope	Leica	Leica M80
Thermometer
Test tube Warmer
Tri-gas incubator	Panasonic	MCO-5M-PE	02/CO2
Vacuum Pump	Cook	K-MAR-5200
Consumables
CSCM (Continuos single culture complete) medium	Fujifilm Irvine Scientific	90165	IVF culture medium supplemented with HSA
Mineral Oil for embryo culture	Fujifilm Irvine Scientific	9305
Ovum Aspiration Needle (Single lumen)	Cook	K-OSN-1730-B-60
Primaria Dish	Corning	353803	Corning Primaria Dish 100x20 mm style standard cell culture dish
Round- bottom tubes	Falcon	352001	Falcon 14ml Round Bottom Polystyrene Test tube with snap cap
Round- bottom tubes	Falcon	352003	Oocyte collection tubes/ Falcon 5ml 12x75 Round Bottom Polipropilene Test tube with snap cap
Rubber Bulb	Sigma Aldrich	Z111589-12EA
Sterile glass Pasteur pipettes	Hunter Scientific	PPB150-100PL	Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE
Denudation
Equipment
CO2 incubator	Eppendorf	Galaxy 14S
Flexipet adjustable handle set	Cook	G18674	Stripper  holder
Gilson Pipetman	Gilson	66003	p20
k-System Incubator	Coopersurgical	G210Invicell
Lab Markers	Sigma Aldrich
Laminar Flow Hood	IVF TECH		Grade A air flow
Stereomicroscope	Leica	Leica M80
Consumables
Biopur epTIPS Rack	Eppendorf	30075331	Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 µl
Human Serum Albumin	thermoFisher Scietific	9988
Hyaluronidase	Fujifilm Irvine Scientific	90101	80 IU/mL of hyaluronidase enzyme in HEPES-buffered HTF
IVF culture dish (60 x 15mm)	Corning	353802	Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish
IVF dish 4-well plate with sliding lid	ThermoFisher Scietific	176740	Multidishes 4 wells (Nunc)
IVF One well dish	Falcon	353653	Falcon 60 x 15 mm TC treated center-well IVF
Mineral Oil for embryo culture	Fujifilm Irvine Scientific	9305
Modified HTF Medium	Fujifilm Irvine Scientific	90126	HEPES-Buffered medium
Rubber Bulb	Sigma Aldrich	Z111589-12EA	1 mL for pasteur pipettes
Sterile glass Pasteur pipettes	Hunter Scientific	PPB150-100PL	Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE
stripping pipette  tips (140 µm)	Cook	K-FPIP-1140-10BS-6	PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING
stripping pipette tips (130 µm )	Cook	K-FPIP-1130-10BS-7	PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING
stripping pipette tips (170 µm)	Cook	K-FPIP-1170-10BS-5	PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING
Vitrification
Equipment
Electronic Timer
Flexipet adjustable handle set	Cook	G18674	Stripper  holder
Gilson Pipetman	Gilson	F123601	p200
Lab Markers	Sigma Aldrich
Laminar Flow Hood	IVF TECH		Grade A air flow
Stainless Container for Cooling Rack	Kitazato		Liquid nitrogen container for vitrification
Stereomicroscope	Leica	Leica M80
Consumables
Biopur epTIPS Rack	Eppendorf	30075331	Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 µL
Human Serum Albumin	Fujifilm Irvine Scientific	9988
IVF culture dish (60 x 15 mm)	Corning	353802	Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standard cell culture dish
IVF dish 6-well	Oosafe	OOPW-SW02	OOSAFE 6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER
Modified HTF Medium	Fujifilm Irvine Scientific	90126	HEPES-Buffered medium
stripping pipette tips (170 µm)	Cook	K-FPIP-1170-10BS-5	PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING
Vitrification Freeze kit	Fujifilm Irvine Scientific	90133-so	2 Vials of ES (Equilibration Solution, 2 x 1 mL) and 2 Vials of VS (Vitrification Solution, 2 x 1 mL)
Vitrifit	Coopersurgical Origio	42782001A	VitriFit  Box
Warming
Equipment
Electronic Timer
Flexipet adjustable handle set	Cook	G18674	Stripper  holder
Gilson Pipetman	Gilson	F123601	p200
k-System Incubator	Coopersurgical	G210Invicell
Lab Markers	Sigma Aldrich
Laminar Flow Hood	IVF TECH		Grade A air flow
Stainless Container for Cooling Rack	Kitazato		Liquid nitrogen container for vitrification
Stereomicroscope	Leica	Leica M80
Consumables
Biopur epTIPS Rack	Eppendorf	30075331	Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 µL
CSCM (Continuos single culture complete) medium	Fujifilm Irvine Scientific	90165	IVF culture medium supplemented with HSA
IVF culture dish (60 x 15 mm)	Corning	353802	Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish
IVF dish 4-well plate with sliding lid	ThermoFisher Scietific	176740	Multidishes 4 wells (Nunc)
IVF dish 6-well	Oosafe	OOPW-SW02	OOSAFE® 6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER
Mineral Oil for embryo culture	Fujifilm Irvine Scientific	9305
SAtripping pipette tips (300µm)	Cook	K-FPIP-1300-10BS-5	PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING
Vitrification Thaw kit	Fujifilm Irvine Scientific	90137-so	4 Vials of TS (Thawing Solution, 4 x 2 mL) + 1 Vial of DS (Dilution Solution, 1 x 2 mL) +1 Vial of WS (Washing Solution, 1 x 2 mL)