JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Eşzamanlı video-EEG-EKG-oksimetre-kapnografi kullanarak, tavşan modellerinin kışkırtılmış aritmiler ve nöbetler geliştirme duyarlılığını değerlendirmek için bir metodoloji geliştirdik. Bu yeni kayıt sistemi, terapötiklerin etkinliğini ve güvenliğini test etmek için bir platform oluşturur ve ani ölümle sonuçlanan çok sistemli olayların karmaşık basamaklarını yakalayabilir.

Özet

İyon kanalopatisi olan hastalarda nöbet ve ölümcül kardiyak aritmi gelişme riski yüksektir. Epilepsili kişilerde (yani epileptik kalp) kalp hastalığı ve aritmi prevalansı daha yüksektir. Ayrıca nöbetleri çevreleyen kardiyak ve otonomik rahatsızlıklar bildirilmiştir. 1:1.000 epilepsi hastası/yılı epilepside (SUDEP) ani beklenmedik bir ölümle ölür. SUDEP mekanizmaları eksik anlaşılmaktadır. Elektroensefalogramlar (EEG) ve elektrokardiyogramlar (EKG), klinik ortamda nöbetler ve aritmiler için substratları/tetikleyicileri tespit etmek ve incelemek için rutin olarak kullanılan iki tekniktir. Bu metodolojinin birçok çalışması ve tanımı kemirgenlerde olsa da, kardiyak elektriksel aktiviteleri insanlardan önemli ölçüde farklıdır. Bu makalede, bilinçli tavşanlarda eşzamanlı video-EEG-EKG-oksimetre-kapnografi kaydetmek için invaziv olmayan bir yöntemin açıklaması sağlanmalıdır. Kardiyak elektrik fonksiyonu tavşanlarda ve insanlarda benzer olduğundan, tavşanlar çevirisel tanı ve terapötik çalışmaların mükemmel bir modelini sağlar. Veri toplama metodolojisini özetlemenin yanı sıra, tavşanlarda nöro-kardiyak elektrik fonksiyonu ve patolojisini incelemek için analitik yaklaşımları tartışıyoruz. Bu, aritmi tespitini, EEG spektral analizini ve kısıtlanmış tavşanlar için geliştirilen bir nöbet ölçeğini içerir.

Giriş

Elektrokardiyografi (EKG), kardiyak elektrik iletiminin dinamiklerini ve elektriksel aktivasyon-geri kazanım sürecini değerlendirmek için klinik ortamda rutin olarak kullanılmaktadır. EKG, aritmi, iskemi ve enfarktüs riskini tespit etmek, lokalize etmek ve değerlendirmek için önemlidir. Tipik olarak, kalbin üç boyutlu bir görünümünü sağlamak için hastanın göğsüne, kollarına ve bacaklarına elektrotlar yapıştırır. Miyokard depolarizasyonunun yönü elektrota doğru olduğunda pozitif saptırma, miyokard depolarizasyonunun yönü elektrottan uzak olduğunda ise negatif sapma üretilir. Kardiyak döngünün elektrografik bileşenleri arasında atriyal depolarizasyon (P dalgası), atriyal-ventrikül iletimi (P-R aralığı), ventriküler ekssitasyon (QRS kompleksi) ve ventrikül repolarizasyonu (T dalgası) sayılır. İnsanlar, tavşanlar, köpekler, kobaylar, domuzlar, keçiler ve atlar dahil olmak üzere birçok memelide EKG ve eylem potansiyeli önlemlerinde büyük benzerlikler vardır1,2,3.

Tavşanlar kardiyak çeviri araştırmaları için ideal bir modeldir. Tavşan kalbi, iyon kanalı bileşimi ve eylem potansiyeli özellikleri açısından insan kalbine benzer2,4,5. Tavşanlar, kalp hastalığı 2 ,4,6,7,8'ingenetik, edinilmiş ve ilaca bağlı modellerinin üretimi için kullanılmıştır. kardiyak EKG ve insanlarda ve tavşanlarda ilaçlara etki potansiyeli tepkisinde büyük benzerlikler vardır7,10,11.

Kalp hızı ve kardiyak elektriksel aktivasyon-geri kazanım süreci kemirgenlerde tavşanlara, insanlara ve diğer büyük memelilere kıyasla çok farklıdır12,13,14. Kemirgen kalbi insanlardan 10 kat daha hızlı atar. Buna karşılık, insan ve tavşan EKG'lerinde izo-elektrik ST segmentine göre, kemirgenlerde14 , 15,16ST segmenti yoktur. Ayrıca, kemirgenler ters T dalgası14 , 15,16ile QRS-r' dalga formuna sahiptir. QT aralığının ölçümleri kemirgenlerde insanlara ve tavşanlara karşı çok farklıdır14,15,16. Ayrıca, normal EKG değerleri insanlarda kemirgenlere karşı çok farklıdır12,15,16. EKG dalga formlarındaki bu farklılıklar, eylem potansiyeli morfolojislerindeki farklılıklara ve kardiyak repolarizasyonu yönlendiren iyon kanallarındaki farklılıklara bağlanabilir9,14. Geçici dış potasyum akımı kemirgenlerde kısa (kubbe dışı) kardiyak etki potansiyeli morfolojisinde ana repolarizasyon akımı iken, insanlarda ve tavşanlarda eylem potansiyeli üzerinde büyük bir faz-2 kubbe vardır ve gecikmiş doğrultucu potasyum akımları (IKr ve IKs)insanlarda ve tavşanlarda büyük repolarizasyon akımlarıdır4,9,13,17. Daha da önemlisi, IKr ve IKs ekspresyasyonu kemirgenlerde yoktur / minimaldir ve IKr ve IKs'nin zamansal aktivasyon kinetiği nedeniyle kardiyak etki potansiyeli morfolojisinde bir rolü yoktur9,13. Bu nedenle, tavşanlar ilaca bağlı, edinilmiş ve kalıtsal EKG anormallikleri ve aritmileri 4,7,13mekanizmalarını değerlendirmek için daha çevirisel bir model sağlar. Daha sonra, çok sayıda çalışma primer kardiyak (Uzun QT Sendromu18 , 19,20) veya nöronal hastalıklarda (epilepsi21,22,23,24)hem nöronal hem de kardiyak elektriksel anormalliklerin varlığınıgösterdiğinden,insan fizyolojisini yakından üreten bir hayvan modelinde alttaki mekanizmaların incelenmesi önemlidir. Kemirgenler insan beynini modellemek için yeterli olsa da, kemirgenler insan kardiyak fizyolojisinin ideal bir modeli değildir7.

Elektroensefalografi (EEG), kortikal elektrik fonksiyonunu kaydetmek için genellikle kafa derisine veya intrakranially'ye yerleştirilen elektrotları kullanır. Bu elektrotlar, serebral korteks25'tekiyakındaki piramital nöron gruplarının atış hızındaki ve eşzamanlılığındaki değişiklikleri tespit edebilir. Bu bilgiler serebral fonksiyonu ve uyanık/uyku durumunu değerlendirmek için kullanılabilir. Ayrıca, EEG'ler epileptik aktiviteyi lokalize etmek ve epileptik nöbetleri epileptik olmayan olaylardan (örneğin psikojenik epileptiform olmayan aktivite ve kardiyojenik olaylar) ayırt etmek için yararlıdır. Epilepsi tipini, kışkırtıcı faktörleri ve nöbetin kökenini teşhis etmek için epilepsi hastaları nöbete neden olabilecek çeşitli manevralara maruz kalırlar. Çeşitli yöntemler arasında hiperventilasyon, fotik stimülasyon ve uyku yoksunluğu saydır. Bu protokol, tavşanlarda EEG sapmalarını ve nöbetlerini teşvik etmek için fotik stimülasyonun kullanımını göstermektedir26,27,28,29.

Eşzamanlı video-EEG-EKG kayıtları, insanlarda ve kemirgenlerde, ictal öncesi, ictal ve post-ictal durumlar sırasında davranışsal, nöronal ve kardiyak aktiviteyi değerlendirmek için yaygın olarak kullanılmıştır30. Çeşitli çalışmalar tavşanlarda ayrı ayrı EEG ve EKG kayıtları yürütmüş olsa da4,31,32,33, bilinçli kısıtlanmış tavşanda eşzamanlı video-EEG-EKG elde etmek ve analiz etmek için bir sistem iyi kurulmamıştır34. Bu makalede, nöro-kardiyak elektrik ve solunum fonksiyonlarını değerlendirmek için bilinçli tavşanlarda eşzamanlı video-EEG-EKG -capnography-oksimetre verilerini kaydedebilen bir protokolün tasarımı ve uygulanması açıklanmaktadır. Bu yöntemden elde edilen sonuçlar aritmiler, nöbetler, solunum bozuklukları ve fiziksel belirtiler arasındaki duyarlılığı, tetikleyicileri, dinamikleri ve uyumları gösterebilir. Deneysel sistemimizin bir avantajı, yatıştırıcıya ihtiyaç duymadan bilinçli kayıtlar elde etmemizdir. Tavşanlar, minimum hareketle ≥5 saat boyunca kısıtlayıcılarda kalır. Anestezik pertürb nöronal, kardiyak, solunum ve otonomik fonksiyon olarak, bilinçli durum sırasında kayıtlar en fizyolojik verileri sağlar.

Bu kayıt sistemi sonuçta epilepside (SUDEP) ani beklenmedik ölüm için nörolojik, kardiyak ve solunum mekanizmalarının anlaşılmasını ilerletmek için ayrıntılı içgörüler sağlayabilir. Yukarıdaki nörolojik ve kardiyak izlemeye ek olarak, son kanıtlar solunum yetmezliğinin nöbet sonrası ani ölüme potansiyel bir katkı olarak rolünü de desteklemektedir35,36. Tavşanların solunum durumunu izlemek için, nöbet öncesi, sırasında ve sonrasında solunum sisteminin durumunu değerlendirmek için oksimetre ve kapnografi uygulandı. Burada sunulan protokol farmakolojik ve fotik-uyaran kaynaklı tavşan nöbetleri için eşiği değerlendirmek amacıyla tasarlanmıştır. Bu protokol, fiziksel belirtilerle sonuçlanamayan ince EEG ve EKG anormalliklerini tespit edebilir. Ek olarak, bu yöntem yeni ilaçların ve cihazların kardiyak güvenliği ve anti-aritmik etkinlik testi için kullanılabilir.

Protokol

Tüm deneyler Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) yönergelerine ve Upstate Tıp Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi'ne (IACUC) uygun olarak gerçekleştirildi. Ayrıca, şekil 1 'de bu protokolün ana hatları verilmiştir.

1. Kayıt ekipmanının hazırlanması

  1. Bilgisayarı 64 pinli bir kafa kutusuyla bir amplifikatöre bağlayın.
    NOT: Her hayvanda başın 4 çeyreğinden EEG'ler için dört düz deri altı pim elektrodu (7 veya 13 mm), EKG (Einthoven'in üçgeni) için 3 bükülmüş subdermal göğüs pimi elektrodu (13 mm, 35° açı), sağ bacakta 1 bükülmüş subdermal pim zemin elektrodu ve başın ortasında 1 düz deri altı kafa derisi pim elektrodu referans olarak hizmet eder.
  2. Kafa kutusundaki her8.pim bir referans yapmak için, edinme yazılımı ayarlarını, edinme sekmesini güncelleyin, böylece Referans Elektrodu "Bağımsız" (yani araştırma modu).
    NOT: Bu, her biri bir amplifikatör, sayısallaştırıcı ve bilgisayar aracılığıyla her biri 7 elektrot artı özel bir referans elektrot ve bir yer elektrotu ile aynı anda 7 hayvandan kayıt sağlar. Tüm elektrotlar tek kutuplu kanallar olarak elde edilir ve referansla karşılaştırılır (başın merkezi.) Kayıt sırasında veya sonrasında ek bipolar ve artırılmış kurşun konfigürasyonları/montajları kurulabilir. Kurulum aynı anda birden fazla hayvandan kayıt yapma yeteneğine sahip olduğundan, her hayvandan bir yer elektrodu amplifikatördeki zemin girişine paralel olarak bağlanır (Şekil 2).
  3. Tavşanları kafeslerinden çıkarın ve her hayvan için uygun ilaç dozunu hesaplamak için tartın. Tavşanları bir nakliye taşıyıcısına yerleştirin ve deneysel olmayan hayvanlara stresi en aza indirmek için ayrı bir odaya getirin. Bu çalışmada, erkek ve dişi Yeni Zelanda Beyaz tavşanları ve sonraki yavruları kullanılmıştır. 1 aylık > tavşanlar üzerinde deneyler yapıldı. Deney sırasında, bu tavşanlar 0.47 - 5.00 kg ağırlığındadı.
    NOT: Tavşanların aynı odada ve kameranın görünümünde olması gerektiğinden, tavşanları tamamen izole etmeyin. Başka bir tavşanı vurgulayan bir tavşandan görsel ve işitsel tezahür potansiyeli vardır. Bu nedenle, fotik stimülasyon deneyleri için yapılan bir seferde odada bir tavşan olması idealdir. Diğer tüm deneyler için, tavşanlar mümkün olduğunca aralıklı hale getirilirken, hepsi video kameranın görünümünde tutulmaktadır. İdeal olarak, bariyerler kullanılır veya aynı anda sadece bir hayvan incelenir. Bu,tavşanların kalp atış hızları deneyler sırasında oldukça sabit kaldığı ve sık sık uyku iğlerinin varlığı olduğu için büyük bir kafa karıştırıcı değildi. Birden fazla hayvandan gelen kayıtlar aynı anda hem kontrol hem de test hayvanı verilerinin aynı çevresel koşullar altında elde edildiğini garanti eder.

2. EEG-EKG elektrotlarının yerleştirilmesi ve solunum monitörlerinin takılması

  1. Bir tavşanı nakliye taşıyıcısından çıkarın ve oturmuş bir araştırmacının kucağına yerleştirin.
  2. Tavşanı dikey olarak tutun vearaştırmacınınvücuduna yakın tutun.
  3. Tavşanı sırtüstü bir pozisyona bükün,tavşanınkafasıaraştırmacınındizlerinde vetavşanınbaşı vücudunun geri kalanından daha düşük.
    NOT: Bu manevra hayvanı rahatlatır ve elektrotları yerleştirirken hareket etmeye veya kaçmaya çalışma olasılığını en aza indirir.
  4. Tavşan artık bir supine pozisyonunda sabit olduğuna göre, ikinci bir araştırmacıdan deri tespit edilip alttaki dokudan izole edilene kadar kürkü yaymasını isteyin.
  5. Her aksillaya 35° bükülmüş elektrotlar yerleştirin (Şekil 3A).
    NOT: Elektrotlar cilde güvenli bir şekilde bağlanacak şekilde itilmelidir, ancak daha derin yapılara nüfuz etmezler. Elektrodun deriye girip çıkması (içinden ve içinden) tavşanı kısıtlayıcıya yerleştirirken veya deney sırasında hareket ederse, müşteri adaylarının yerinden çıkma olasılığını azaltır (Şekil 3B). Tüm elektrotlar yerleştirmeden önce % 70 etanol ile sterilize edilir.
  6. Göğüs arkasını sağ ve sol ön ayaklara ve karın ön önlerine sol arka ekstuzite yerleştirin. Karın üzerinde sağ arka uzuv için bir zemin pim elektrodu ön yerleştirin (Şekil 4A).
  7. Tüm EKG uçları düzgün bir şekilde yerleştirildikten sonra, tavşanı tavşan karnının bir tarafına doğru çalışan uçlarla eğilimli bir konuma getirin ve tavşanı uygun büyüklükte bir kısıtlayıcıya aktarın (örneğin, 6" x 18" x 6").  Tavşanı kısıtlayıcıya yerleştirirken, tavşanın bacaklarıyla elektrotları çekmesini en aza indirmek için gevşek teli yukarı doğru çekin. Telleri, deney sırasında tavşanın altına yakalanmamaları için kısıtlayıcının yanına bantleyin (Şekil 4B).
  8. Boynun etrafındaki kısıtlamayı indirerek ve yerine kilitleyerek tavşanı kısıtlayıcıya sabitleyin. Ayrıca, arka uzuvları hayvanın altına doğru hareket ettirin ve arka kenarı sabitleyin.
    NOT: Çok sıkı olmamasını sağlamak için boynun altındaki boşluğa 1-2 parmak sığdırabilmelidir. Özellikle motor hareketin olabileceği deneyler sırasında, hareketi, potansiyel omurga yaralanmalarını, uzuv çıkığı ve arka kısıtlamayı atma yeteneğini en aza indirmek için kısıtlamayı sıkılaştırmak önemlidir (Şekil 4B). Tavşanlar, artan hareket veya dehidrasyon belirtileri ile ilgili herhangi bir sorun olmadan ~ 5 saat boyunca kısıtlayıcıda tununa sahiptir.
    1. Küçük tavşanlar için (örneğin, 2 aydan az) tavşanı yükseltmek için hayvanın altına bir lastik güçlendirici ped yerleştirin, bu da tavşanın boynunu baş kısıtlamasının altına dayanmasını önler (Şekil 4C).
      NOT: Solunum ve kalp atış hızındaki ani bir düşüş boyun impingementine ikincil olabilir. Bu durumda, boyun sıkıştırıcısını gevşetin ve herhangi bir boyun sıkışmasını hafifletmek içintavşanınbaşını kaldırın.
    2. Arka dizgin tavşanın arkasını / omurgasını yakından izlemediğinde, omurga yaralanmalarına neden olabilecek herhangi bir hareketi önlemek için bir PVC aralayıcı yerleştirin.
      NOT: Örneğin, ~14 cm uzunluğunda x 4" iç çaplı PVC boru, alt % 25-33 çıkarılmış olarak, uygun kısıtlama sağlamak için tavşanın üzerine köpükle yer verilebilir (Şekil 4C).
  9. Tavşan güvenli bir şekilde kısıtlayıcıya yerleştirildiğinden, 7-13 mm'lik deri altı düz pin elektrotlarını kafa derisine yerleştirin (Şekil 3A). 45° açılı bir giriş yaklaşımı kullanarak, kabloları kulakların arasında çalıştırın ve kurşun yerleşimini korumak için telleri başın arkasındaki tutucuya gevşek bir şekilde bağlayın. 5 EEG müşteri adayını aşağıdaki konumlara yerleştirin: sağ ön, sol ön, sağ oksipital, sol oksipital ve diğer 4 müşteri adayı arasındaki noktaya merkezi bir referans (Cz) kurşunu (Şekil 4D).
    NOT: Elektrotlar kafatasına karşı deri altı dokuya yerleştirildiğinde düzgün bir şekilde yerleştirilir. Bu yerleşim burun, kulaklar ve diğer çevre kaslardan gelen yapıtı en aza indirir. Ritmik burun hareketinden elde edilen bazı eserler kaçınılmazdır. Ön EEG uçlarıtavşanıngözlerine medial olarak yerleştirilecek ve ön noktayı göstermelidir. Oksipital uçlar kulaklara ön yerleştirilmelidir ve medial yönde işaret edecektir. Cz, başın üst kısmının ortasına 4 elektrodun tümü arasında bir noktada yerleştirilir (Lambda ve Bregma arasında, dikiş hattı boyunca). Cz elektrodunun pimi ön noktayı işaret ediyor.
    1. Tavşanın telleri ısırmaya çalışmasından kaçınmak için EEG kablolarını kulakların arasına geçirin.
  10. Nabız oksimetre pletirmografını marjinal kulak damarının üzerine tavşanın kulağına takın.
    NOT: Sinyali iyileştirmek için kulaktan fazla saçları tıraş etmek veya sensörü yerinde tutmak için biraz gazlı bez kullanmak gerekebilir.
    1. Plevnedeki kalp atış hızının EKG'den gelen kalp hızıyla ilişkili olduğundan ve oksijen doygunluğunun görüntülendiğinden emin olun (Şekil 5C).
  11. Yüz maskesini tavşanın ağzı ve burnu üzerine kapnografi tüpü ile hafifçe yerleştirin (Şekil 4H). Yüz maskesini maskenin etrafına sarılmış dize ile sabitleyin ve dizenin her iki ucunun da kısıtlayıcıya tutturulmasını sağlayın. Kapnografi tüpünün diğer ucunu hayati işaretler monitörüne takın.
    NOT: Deney sırasında ipi tavşanın gözlerinin üzerine sermeyi önlemek önemlidir. Bunu yapmak için, ipi tavşanın kulakları arasındaki kısıtlayıcının ortasına bantleyin. Kapnografi sinyalini iyileştirmek için, oksijenin T parçasına girmesini sağlayacak bant ve ince bir nitril parçası kullanarak tek yönlü bir valf oluşturun ve solunan CO2'yi kapnografi tüpüne yönlendirecektir (Şekil 4I).

3. Video-EEG-EKG kaydı

  1. Piyasada bulunan bir EEG yazılımı kullanarak video-EEG-ECG kaydı gerçekleştirin.
    NOT: Biyopotential müşteri adayları ve video, elektrik ve video sinyallerini daha sonra ilişkilendirmek için zaman kilitlenir (örneğin, eeg çivisi miyoklonik bir pislikle).
  2. Temel sürüklenme, 60 Hz elektrik gürültüsü ve yüksek sinyal-gürültü oranı olmadan optimum bağlantıyı onaylayın. Özellikle, kardiyak dalga biçiminin her aşamasının EKG üzerinde görselleştirilebildiğinden ve delta, teta ve alfa dalgalarının EEG'deki yüksek frekanslı gürültü tarafından görsel olarak gizlenmediğinden emin olun.
    1. Tüm elektrotlar aşırı miktarda gürültü üretiyorsa, merkezi referans kurşununun ayarını yapın. Sadece bir elektrot aşırı gürültülüyse, o elektrot cildin daha derinlerine itin veya metal maruz kalana kadar yeniden konumlandırın.
  3. Videoyu, tüm tavşanların aynı anda görülebilmesi için ayarlayın, bu da motor aktivitenin EEG bulgularıyla korelasyonuna izin verir (Şekil 5A).
    NOT: Sistem, 7 tavşana kadar eşzamanlı EEG/EKG/oksimetre/kapnografi kayıtlarını barındırır.
  4. Taban çizgisi kaydını her hayvandan en az 10-20 dakika boyunca veya kalp atış hızı sakin bir rahat duruma (200-250 bpm) sabitlenine ve tavşanlar en az 5 dakika boyunca büyük hareketler sergileyene kadar başlatın. Herhangi bir filtre olmadan tam bant genişliği elekrografik verileri elde edin. Verileri daha iyi görselleştirmek için düşük frekans filtresini (=yüksek geçiş filtresi) 1 Hz'e ve yüksek frekans filtresini (=düşük geçiş filtresi) 59 Hz'e ayarlayın.
    NOT: Tavşanın rahatladığının bir başka işareti de EEG uyku millerinin başlangıcıdır (daha sonra tartışılır).
  5. Müdahalelerin (örneğin, ilaç dağıtımı) ve nöro-kardiyak olayların (örneğin, EEG ani, motor nöbetler, ektopik atım ve aritmiler) ve motor/araştırmacı eserlerinin zamanlamasını belirtmek için deney sırasında gerçek zamanlı olarak zaman kilitli notlar ekleyin.
    NOT: Bir araştırmacının odaya girip çıkması ve kapıyı açması/kapatması stresini en aza indirmek için araştırmacının bir müdahale uygulaması gereken sıklık (örneğin, fotik-stimülasyon, ilaç teslimatı) nedeniyle, araştırmacı deney boyunca odanın karşı tarafında kalır. Araştırmacı hayvandan mümkün olduğunca uzak oturur ve hayvanları rahatsız etme olasılığını en aza indirmek için hareketsiz ve sessiz kalır.

4. Deneysel protokoller

NOT: Aşağıdaki deneylerin her biri, aynı hayvan üzerinde yapılırsa ayrı günlerde gerçekleştirilir. Oral testler bileşik ilaç çalışmaları ile akut terminal pro-konvülsant ilaç çalışması arasında 2 haftalık bir gecikme vardır. Gerektiğinde, fotik-stimülasyon deneyi yapılır, ardından 30 dakikalık bir bekleme ve ardından PTZ ilaç çalışması yapılır.

  1. Tavşanların kısıtlayıcılara alışmasını sağlamak ve araştırmacının kardiyorespiratuar oranların stabilizasyonunu objektif olarak onaylaması için, tüm tavşanları kardiyorespiratuar ve nöronal sensörlerle enstrüman ve hayvan başına > 1 saat, 1 - 3 kez sürekli video izleme gerçekleştirin.
  2. Fotik stimülasyon deneyi
    1. Yukarıda açıklanan yönteme ek olarak, tavşanın önüne göz hizasında 30 cm dairesel reflektörlü bir ışık kaynağı yerleştirin, flaş yoğunluğu maksimum (16 kandela)29'a ayarlanmıştır. Işık kaynağı Şekil 4E'debeyaz bir nokta ile gösterilir.
      NOT: Işığa duyarlı tepkiyi ortaya çıkarmak için loş ışıklı bir oda kullanılmalıdır37.
    2. Tavşanıngözleri başının önü yerine başın yanında olduğundan (insanlarda olduğu gibi), tavşanın her iki tarafına 2 ayna yerleştirin ve tavşanın arkasına 1 ayna yerleştirin, böylece ışıktavşanıngözlerine girer.
      NOT: 20 cm uzunluğunda, 120 cm uzunluğunda ≥ ≥ düz bir ayna, Şekil 4E'degörüldüğü gibi yanıp sönen ışığıntavşanıngözlerine girmesini sağlamak için tavşanın etrafında üçgen bir muhafaza oluşturur.
    3. Işık kaynağını ayarlanabilir bir hıza, yoğunluğa ve süreye sahip bir denetleyiciye bağlayın.
    4. Kırmızı ışık ve kızılötesi kayıt özelliklerine sahip bir kamera kullanarak video kaydedin.
    5. Tavşanları gözleri açık olarak 30 s boyunca her frekansa maruz bırak ve daha sonra her frekansta göz kapamaya neden olmak için yüzlerini kaplayan cerrahi bir maske ile 30 s daha maruz bırak.
      NOT: Önceki çalışmalar, göz kapatmanın nöbete ışığa duyarlılık sağlamak için en kışkırtıcı manevra olduğunu göstermiştir29. Ek olarak, ışığa duyarlı hastaların% 10'u gözleri kapalıyken sadece elektroensefalografik belirtiler sergiler29. Bir nöbet, baş ve tüm vücut miyoklonik jerks, klonus veya tonik bir durum varlığı gözlemlenerek klinik olarak tanımlanabilir. EEG kaydı, elektroensefalografik korelasyon (örneğin, sivri uçlar, poli-sivri ve ritmik akıntılar) için, nöbet aktivitesinin kesin tanısı için motor belirtilerle daha ayrıntılı olarak analiz edilir. EEG'nin kas kalıntıları veya belirsiz epileptojeniklik dalgaları tarafından gizlendiği hareketler, onay için bir epileptolog tarafından gözden geçirilmelidir.
    6. Photic stimülatör frekansını 2 Hz artışla 1 Hz'den 25 Hz'e çıkarın. Daha sonra aynı fotoğraf stimülasyon protokolünü gerçekleştirin, ancak bu sefer frekansı 5 Hz artışlarla 60 Hz'den 25 Hz'e düşürin.
      NOT: Bir tavşanda nöbet varsa, deney durdurulmalıdır. Tavşanı 30 dakika izlemeye devam edin. Daha sonra tavşanı barınma odasına geri verin ve tam iyileşme için her 1 saat 3 saat boyunca izleyin. Ancak, fotik stimülasyon bir fotoparoksismal yanıta neden olursa, artan frekansların geri kalanı atlanır ve başka bir fotoparoksismal yanıt oluşana kadar 60 Hz'den inerek seri yeniden başlatılır. Bu, üst ve alt fotik stimülasyon eşiklerinin belirlenmesine izin verecektir. Fotoparoksismal yanıt, fotik stimülasyon kesildikten sonra sona ereceğinden gecikmeye gerek yoktur. Fotoparoksismal bir yanıtın oluşup oluşmadığı belirsizse, frekans 10 s gecikmeden sonra tekrarlanır38.
    7. Deney tamamlandıktan sonra, EEG ve EKG uçlarını tavşandan çıkarın ve hayvancılık personeli tarafından rutin bakım için ev kafesine geri verin.
  3. İlaçların oral tedavisi
    1. Birçok ilaç ağızdan alındığından, gıda sınıfı elma sosu ile karıştırarak oral bileşikler hazırlayın. 3 mL elma sosunda 0,3 mg/kg E-4031 karıştırın ve iğnesiz 3 mL oral/sulama şırıngasına yükleyin.
      NOT: Test bileşikleri, QT süresini değiştirdiği bilinen ilaçlar (moxifloxacin veya E-4031) ve negatif bir kontrol veya araç dahil olmak üzere bu şekilde çeşitli ilaçlar uygulanabilir. Bazı ilaçlar intravenöz formülasyonda mevcut değildir. Ek olarak, birçok ilaç oral formülasyonda reçete edilir ve bu nedenle intravenöz bir uygulama daha az klinik ilgiye sahip olabilir.
    2. Üst dudakları kaldırın ve oral şırınnanın ucunutavşanındişleri tarafından engellenmemiştavşanınağzının kenarına kaydırın ve tüm ilaçları ve elma sosunutavşanınağzına enjekte edin.
    3. Video-EEG-ECG kaydına 2 saat devam edin ve ardından hayvanı rutin bakım için ev kafesine geri döndürün.
    4. Deneysel gün 2 ve 3'te, tavşanı video-EEG-EKG'ye bağlayın, 10-20 dakikalık taban çizgisi kaydedin, ardından aynı ilacı enjekte edin ve 2 saat boyunca kaydedin.
    5. 1 hafta yıkandıktan sonra, 10-20 dakika taban çizgisi gerçekleştirin ve ardından her tavşana art arda 3 gün boyunca tek bir doz plasebo verin ve 2 saat boyunca kaydedin.
      NOT: Oral ilaçların tedavisi, plasebonun 1. haftada, ilacın ise 2. haftada verildiği bir çapraz çalışma olarak tasarlanabilir.
  4. İntravenöz ilaç deneyi (Pentylenetetrazol, PTZ)
    1. Marjinal kulak damarını görselleştirmek içintavşanınkulağının arka yüzeyini tıraş edin. Bölgeyi dezenfekte etmek ve marjinal kulak damarını genişletmek için% 70 etanol mendil kullanın. Bu, Şekil 4F'dekisiyah kesikli oval ile gösterilir.
    2. Bu noktada, bir deneycinintavşanaprosedürün stresini azaltmak için tavşanın yüzünü elleriyle örtmesini sağla. İkinci bir deneyci, marjinal kulak damarını steril 25-G anjiyokateter ile dikkatlice cannulatlar.
    3. Kateter damara girdikten sonra, kateterin ucuna steril bir enjeksiyon fişi yerleştirin, böylece bir iğne intravenöz olarak ilaç verebilir. Enjeksiyon fişinin konumu Şekil 4G'demavi bir daire ile gösterilir.
    4. 4 x 4 inç gazlı bezi bantla sararak bir atel yapın, böylece bir tüp şekli oluşturur vetavşanınkulağının içine yerleştirin. Daha sonra atel kulağına bantla, böylece kateter yerine sabitlenmiş ve katetersiz kulağa benzer şekilde dik kalır.
    5. Heparinize salin başına 1 mL 10 USP birimi enjekte edin.
      NOT: Kateter ve damar gözle görülür şekilde havadan temizlenmeli ve patent olarak kalmalıdır. Kateter damarda değilse, şırın oluk kolay itmez ve deri altı dokusunda salin birikimi olacaktır.
    6. Tavşanlara her 10 dakikada bir 1 mg/kg'lık artışlarla 1 mg/kg'dan 10 mg/kg'a kadar intravenöz olarak ptz dozları verin. Hangi hayvana enjekte edildiğini ve ilacın konsantrasyonunu belirtmek için her dozun başında bir not yapın.
      NOT: Bu, PTZ yönetiminin akut ve katkı etkilerinin değerlendirilmesini sağlar. Alternatif olarak, düşük doz PTZ'nin kronik etkilerini daha fazla değerlendirmek için, tavşana her düşük doz konsantrasyonda tekrarlanan dozlar, 2 mg / kg'da 7 doz, 5 mg / kg'da 3 doz, daha sonra 10 mg / kg'da 3 doz verilir, her doz 10 dakika ile ayrılır.
    7. Her dozdan sonra, herhangi bir nöro-kardiyak elektriksel ve solunum anormalliği ve epileptiform aktivitenin görsel kanıtları için video-EEG-EKG-kapnografi-oksimetreyi dikkatlice izleyin. Bu değişiklikleri gerçek zamanlı olarak ve analiz sonrası olarak not edin.
      NOT: Nöbet aktivitesi genellikle PTZ uygulamasından 60 s içinde başlar.

5.Hayatta Kalmama Deneylerinin Sonucu.

  1. Tavşan PTZ deneyi sırasında ani ölüm yaşamadıysa, her 4,54 kg vücut ağırlığı (veya tüm tavşanlara 1,5 mL) için 1mL 390 mg / mL sodyum pentobarbital ve ardından normal salinin 1 mL floşunu uygulayın. Tavşanın kalp durması geçirdiğinden emin olmak için EKG'yi izleyin.
  2. Tavşan kalp durması yaşadıktan sonra, kalp, akciğerler, karaciğer, beyin, iskelet kası ve sonraki moleküler / biyokimyasal analizler için gerekli diğer dokular da dahil olmak üzere çeşitli organları taze izole etmek için hızlı bir şekilde nekropsi gerçekleştirin.
  3. Tavşanı kurumsal politikalara göre atın.

6. EKG Analizi

  1. EKG'yi görsel olarak incelemek ve taşikardi, bradikardi, ektopik atımlar ve diğer aritmi dönemlerini tanımlamak için ticari olarak mevcut EKG analiz yazılımını kullanın (Şekil 6). Gözden geçirilecek veri miktarını azaltmak için, taşikardi, bradikardi veya RR aralığının düzensizliklerinin tanımlanabileceği sürelerin kolaylığını artıracak bir takogram oluşturun.
    NOT: EKG anormallikleri (örneğin, QTc uzama) ve aritmiler, ecg'nin orandaki anormallikleri gözden geçirilerek manuel olarak tanımlanır (örneğin, brady-/tachy-aritmiler), ritim (örneğin, erken atriyal/ventrikül kompleksleri), iletim (örneğin, atriyo-ventrikül bloğu) ve dalga formu (örneğin, sinüs dışı atriyal/ventriküler taşikardi ve fibrilasyon.) Aritmiler, Tachogram'ın RR aralığındaki düzensizlikler açısından gözden geçirilmesiyle tespit edilebilir. Taşikardi, kalp atış hızının dakikada 300 atımın üzerinde olduğu takogram bölümleriyle tanımlanabilir. Kalp atış hızı takogramda dakikada 120 atımdan az olduğunda bradikardi tanımlanır.
  2. Ticari olarak kullanılabilen EKG analiz yazılımını kullanarak, temelde ve provokasyon üzerine standart EKG ölçümleri (kalp atış hızı, kardiyak döngü aralıkları) gerçekleştirin (örneğin, araştırmacı hayvanı manipüle ediyor, test ajanlarının yönetimi ve nöbet kaynaklı EKG değişiklikleri).

7. Video-EEG analizi

  1. Temel sinyali ( Şekil 7 ) ve uyku milleri (Şekil 8) ve tepe dalgaları (Şekil 9) gibi beklenen EEG deşarjlarının varlığını tanımlamak için ticari olarak mevcut yazılımı kullanarak video ve EEG izlemede görsel olarak ilerleyin.
    NOT: Tam bant genişliği elektrografik veriler herhangi bir filtre olmadan elde edilse de, veriler 1 Hz olarak ayarlanmış düşük frekans filtresi (yani yüksek geçiş filtresi) ile görüntülenmeli ve Nyquist'in teoremine dayanarak, herhangi bir sinyali kaçırmamak için yüksek frekans filtresi (yani düşük geçiş filtresi) 120 Hz olarak ayarlanmalıdır. Filtreler, daha düşük frekanslı (<25 Hz) EEG etkinliği gözden geçirilirken daha iyi görselleştirme ve gürültü azaltma (örneğin, 1-59 Hz) sağlayacak şekilde ayarlanabilir.
  2. Kapnografi dalga formlarına ek olarak, nefes alma yokluğuna karşı varlığı belirlemek için EEG'de burun hareketi yapıtını kullanın. Bu, video kaydında görülen burun hareketleriyle de ilişkilendirilebilir.
  3. Her PTZ dozunun ardından en az 1 dakika boyunca epileptik olmayan (örneğin, bilinçli) hareketleri ayırt etmek için ticari olarak mevcut yazılımı kullanarak video ve EEG izlemede görsel olarak ilerleyin (Şekil 10). Interictal epileptik akıntıları ve nöbet öncesi, sırasında ve sonrasında EEG değişikliklerini tarayın. Bir nöbet, baş ve tüm vücut miyoklonik jerks, klonus veya EEG korelasyonlu bir tonik durumunun varlığını gözlemleyerek klinik olarak tanımlanabilir. EEG değişiklikleri EEG ani artışlarını, poli-sivri uçları ve ritmik deşarjları içerebilir.
    NOT: EEG'nin kas kalıntıları veya belirsiz epileptojeniklik dalgaları tarafından gizlendiği hareketler onay için bir nörolog tarafından gözden geçirilmelidir. EEG ve EKG kayıtlarının yanı sıra davranışını görüntülemek için videoyu bir tavşana odaklamak avantajlı olabilir (Şekil 5B).
  4. Genellikle PTZ enjeksiyonundan sonra 1 dakika içinde ortaya çıkan motor belirtilerin türüne ve şiddetine göre nöbetler için video-EEG puan(Tablo 1).
  5. Bir fotik stimülasyon deneyinden sonra, ticari olarak kullanılabilen EEG analiz yazılımında spektral bir analiz planı oluşturarak oksipital sürüş ritminin varlığı ve yokluğu için EEG'nin oksipital ipuçlarını analiz edin. Oksipital sürüş ritmi spektral analizde fotik stimülatörün frekansine karşılık gelen bir zirve yaratacaktır (Şekil 11).
    NOT: Fotik stimülasyon, temel frekansın zirvesine ek olarak harmonik frekans zirveleri üretebilir.

7. Solunum fonksiyonlarının analizi

  1. Hayati işaretler monitöründen çıkışı gözden geçirin (Şekil 4I) ve daha fazla analiz için sinyali dışa aktarın.
  2. Nöbet sırasında ve nöbet sonrası solunum düzenindeki değişime, özellikle apnenin başladığı zaman dilimine dikkat edin.

Sonuçlar

Yukarıda açıklanan yöntem, beynin ve kalbin elektrik iletim sistemindeki anormallikleri ve solunum bozukluklarını tespit edebilir. EkG morfolojisini değerlendirmek ve anormal kalp atışlarını, iletim bozukluklarını veya EKG ritimlerini (atriyal/ventriküler ektopik atımlar ve brady-/tachy-aritmiler) tespit etmek için bir veri toplama yazılımı kullanılır (Şekil 6). EKG morfolojisini görselleştirmenin yanı sıra, izler RR aralığı, kalp...

Tartışmalar

Bu deneysel kurulum, tavşanlarda, özellikle kardiyak ve/veya nöronal hastalık modellerinde ayrıntılı eşzamanlı video-EEG-EKG-oksimetre-kapnografi kayıtlarını ve analizlerini kolaylaştırır. Bu makalenin sonuçları, bu yöntemin nöbetleri ve aritmileri tespit edebildiğini ve bunları elektrografik eserlerden ayırabildiğini göstermektedir. Tavşanlara prokonvülsan verirken beklenen sonuçlar elde edildi ve bu da nöbetlere neden oldu. Video-EEG kayıtlarından elde edilen veriler, gönüllü hareketler...

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

Yazarlar bu çalışmanın Amerikan Kalp Derneği, Amerikan Epilepsi Derneği ve SUNY Upstate Farmakoloji Bölümü'nün hibeleriyle desteklendiğini kabul ediyor.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
0.9% Sodium Chloride Irrigation, USP - Flexible ContainerPFIZER (HOSPIRA)7983-09Dilutant
10cc Luer Lock syringe with 20G x 1" NeedleSur-VetSS-10L2025Used as a flush after drug injection
4x4 gauze spongesFisher Scientific22-415-469Rolled in a tube to splint ear with angiocatheter
Apple SauceKirkland897971Vehicle for oral medications
ComputerDellOptiplex 5040Acquisition computer
E-4031Tocris1808Agent known to prolong the QT interval
ECG ElectrodeRhythmLinkRLSND116-2.513mm 35-degree bent (0.4 mm diameter) subdermal pin electrodes
EEG ElectrodeRhythmLinkRLSP5135-twist 13mm straight (0.4mm diameter) subdermal pin electrodes
EEGLAB (2020)Swartz Center for Computational NeuroscienceOpen AccessCan perform spectral analysis of EEG
Ethernet-to-ethernet adapterLinksysUSB3G16Adapter for connecting the camera to the computer
Euthanasia-III SolutionMed-PharmexANADA 200-280Contains pentobarbital sodium and phenytoin sodium, controlled substance
Foam paddingGenericN/AReduces pressure applied to the neck of small rabbits by the restrainer in order to prevent the adverse cardiorespiratory effects of neck compression
Heparin Lock FlushMedlineEMZ50051240To maintain patency of angiocatheter
IR LightBoschEX12LED-3BD-8WFacilitates recordings in the dark
LabChart Pro (2019, Version 8.1.16)ADInstrumentsN/AECG Analysis
JELCO PROTECTIV Safety I.V. Catheters, 25 gaugeSmiths Medical3060Used to catherize marginal ear vein
MATLAB (R2019b, Update 5)MathWorksN/ARequired to run EEGLAB
MicrophoneSony StereoECM-D570PRecording of audible manifestions of seizures
Micropore Medical Tape, Paper, White3M1530-1Used to secure wires and create ear splint
Natus NeuroWorksNatusLC101-8Acquisition and review software
Pentylenetetrazol (1 - 10 mg/kg always in 1mL volume)Sigma-Aldrich88580Dilutions prepared in saline
Photic StimulatorGrassPS22Stimulator to control frequency, delay, duration, intensity of the light pulses
Plastic wire organizer / bundler12Vwire.comLM-12-100-BLKBundle wires to cut down on noise
PS 22 Photic StimulatorGrass InstrumentsBZA641035Strobe light with adjustable flash frequency, delay, and intensity
PVC pipeGenericN/APrevents small rabbits from kicking their hind legs and causing spinal injury
Quantum AmplifierNatus13926Amplifier / digitizer
Quantum HeadBox AmplifierNatus2213464-pin breakout box
Rabbit RestrainerPlas-Labs501-TCVarious size rabbit restrainers are available. 6" x 18" x 6" in this study.
Rubber pad (booster)GenericN/ARaises small rabbits up in the restrainer to prevent neck compression
SpO2 ear clipNONIN61000PureSAT/SpO2
SpO2 sensor adapterNONIN13931XPOD PureSAT/SpO2
SRG-X120 1080p PTZ Camera with HDMI, IP & 3G-SDI OutputSonySRG-X120Impela Camera
Terumo Sur-Vet Tuberculin Syringe 1cc 25G X 5/8" Regular LuerSur-Vet13882Used to inject intravenous medications
Veterinary Injection Plug Luer LockSur-VetSRIP2VInjection plug for inserting the needle for intravenous medication
Webcol Alcohol Prep, Sterile, Large, 2-plyCovidien5110To prepare ear vein before catheterization

Referanslar

  1. Kaese, S., et al. The ECG in cardiovascular-relevant animal models of electrophysiology. Herzschrittmacherther Elektrophysiology. 24 (2), 84-91 (2013).
  2. Pogwizd, S. M., Bers, D. M. Rabbit models of heart disease. Drug Discovery Today: Disease Models. 5 (3), 185-193 (2008).
  3. O'Hara, T., Rudy, Y. Quantitative comparison of cardiac ventricular myocyte electrophysiology and response to drugs in human and nonhuman species. American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 302 (5), 1023-1030 (2012).
  4. Brunner, M., et al. Mechanisms of cardiac arrhythmias and sudden death in transgenic rabbits with long QT syndrome. Journal of Clinical Investigation. 118 (6), 2246-2259 (2008).
  5. Lengyel, C., et al. Pharmacological block of the slow component of the outward delayed rectifier current (I(Ks)) fails to lengthen rabbit ventricular muscle QT(c) and action potential duration. British Journal of Pharmacology. 132 (1), 101-110 (2001).
  6. Baczko, I., Hornyik, T., Brunner, M., Koren, G., Odening, K. E. Transgenic rabbit models in proarrhythmia research. Frontiers in Pharmacology. 11, 853 (2020).
  7. Rudy, Y., et al. Systems approach to understanding electromechanical activity in the human heart: a national heart, lung, and blood institute workshop summary. Circulation. 118 (11), 1202-1211 (2008).
  8. Zhu, Y., Ai, X., Oster, R. A., Bers, D. M., Pogwizd, S. M. Sex differences in repolarization and slow delayed rectifier potassium current and their regulation by sympathetic stimulation in rabbits. Archives. 465 (6), 805-818 (2013).
  9. Nerbonne, J. M., Nichols, C. G., Schwarz, T. L., Escande, D. Genetic manipulation of cardiac K(+) channel function in mice: what have we learned, and where do we go from here. Circulation Research. 89 (11), 944-956 (2001).
  10. Eckardt, L., et al. Drug-related torsades de pointes in the isolated rabbit heart: comparison of clofilium, d,l-sotalol, and erythromycin. Journal of Cardiovascular Pharmacology. 32 (3), 425-434 (1998).
  11. Baczko, I., Jost, N., Virag, L., Bosze, Z., Varro, A. Rabbit models as tools for preclinical cardiac electrophysiological safety testing: Importance of repolarization reserve. Progress on Biophysics and Molecular Biology. 121 (2), 157-168 (2016).
  12. Richig, J. W., Sleeper, M. M. . Electrocardiography of Laboratory Animals. , (2019).
  13. Edwards, A. G., Louch, W. E. Species-dependent mechanisms of cardiac arrhythmia: A cellular focus. Clinical Medicine Insights. Cardiology. 11, 1179546816686061 (2017).
  14. Salama, G., London, B. Mouse models of long QT syndrome. Journal of Physiology. 578, 43-53 (2007).
  15. Zhang, Y., Wu, J., King, J. H., Huang, C. L., Fraser, J. A. Measurement and interpretation of electrocardiographic QT intervals in murine hearts. American Journal of Physiology. Heart and Circulation Physiology. 306 (11), 1553-1557 (2014).
  16. Auerbach, D. S., et al. Altered cardiac electrophysiology and SUDEP in a model of dravet syndrome. PLoS One. 8 (10), 15 (2013).
  17. Aiba, T., Tomaselli, G. F. Electrical remodeling in the failing heart. Current Opinion in Cardiology. 25 (1), 29-36 (2010).
  18. Auerbach, D. S., et al. Genetic biomarkers for the risk of seizures in long QT syndrome. Neurology. 87 (16), 1660-1668 (2016).
  19. Anderson, L. L., et al. Antiepileptic activity of preferential inhibitors of persistent sodium current. Epilepsia. 55 (8), 1274-1283 (2014).
  20. Johnson, J. N., et al. Identification of a possible pathogenic link between congenital long QT syndrome and epilepsy. Neurology. 72 (3), 224-231 (2009).
  21. Devinsky, O., Hesdorffer, D. C., Thurman, D. J., Lhatoo, S., Richerson, G. Sudden unexpected death in epilepsy: epidemiology, mechanisms, and prevention. Lancet Neurology. 15 (10), 1075-1088 (2016).
  22. Bagnall, R. D., et al. Exome-based analysis of cardiac arrhythmia, respiratory control, and epilepsy genes in sudden unexpected death in epilepsy. Annals in Neurology. 79 (4), 522-534 (2016).
  23. Frasier, C. R., et al. Channelopathy as a SUDEP biomarker in dravet syndrome patient-derived cardiac myocytes. Stem Cell Reports. 11 (3), 626-634 (2018).
  24. Glasscock, E. Genomic biomarkers of SUDEP in brain and heart. Epilepsy and Behavior. 38, 172-179 (2014).
  25. Olejniczak, P. Neurophysiologic basis of EEG. Journal of Clinical Neurophysiology. 23 (3), 186-189 (2006).
  26. Gastaut, H., Hunter, J. An experimental study of the mechanism of photic activation in idiopathic epilepsy. Electroencephalography and Clinical Neurophysiology. 2 (3), 263-287 (1950).
  27. Fisher, R. S., et al. Photic- and pattern-induced seizures: A review for the Epilepsy Foundation of America Working Group. Epilepsia. 46 (9), 1426-1441 (2005).
  28. Specchio, N., et al. Diagnosing photosensitive epilepsy: fancy new versus old fashioned techniques in patients with different epileptic syndromes. Brain Development. 33 (4), 294-300 (2011).
  29. Kasteleijn-Nolst Trenite, D., et al. Methodology of photic stimulation revisited: updated European algorithm for visual stimulation in the EEG laboratory. Epilepsia. 53 (1), 16-24 (2012).
  30. Mishra, V., Gautier, N. M., Glasscock, E. Simultaneous video-EEG-ECG monitoring to identify neurocardiac dysfunction in mouse models of epilepsy. Journal of Visualized Experiments. (131), e57300 (2018).
  31. Green, J. D., Maxwell, D. S., Schindler, W. J., Stumpf, C. Rabbit EEG "theta" rhythm: Its anatomical source and relation to activity in single neurons. Journal of Neurophysiology. 23 (4), 403-420 (1960).
  32. Petersen, J., Diperri, R., Himwich, W. A. The comparative development of the EEG in rabbit, cat and dog. Electroencephalography and Clinical Neurophysiology. 17, 557-563 (1964).
  33. Strain, G. M., Van Meter, W. G., Brockman, W. H. Elevation of seizure thresholds: a comparison of cerebellar stimulation, phenobarbital, and diphenylhydantoin. Epilepsia. 19 (5), 493-504 (1978).
  34. Cheng, Y., et al. Effectiveness of retigabine against levobupivacaine-induced central nervous system toxicity: A prospective, randomized animal study. Journal of Anesthesia. 30 (1), 109-115 (2016).
  35. Nascimento, F. A., et al. Pulmonary and cardiac pathology in sudden unexpected death in epilepsy (SUDEP). Epilepsy and Behavior. 73, 119-125 (2017).
  36. Buchanan, G. F. Impaired CO2-Induced Arousal in SIDS and SUDEP. Trends in Neuroscience. 42 (4), 242-250 (2019).
  37. Van Egmond, P., Binnie, C. D., Veldhuizen, R. The effect of background illumination on sensitivity to intermittent photic stimulation. Electroencephalography and Clinical Neurophysiology. 48 (5), 599-601 (1980).
  38. Harding, G. F., Fylan, F. Two visual mechanisms of photosensitivity. Epilepsia. 40 (10), 1446-1451 (1999).
  39. Kuwada, S., Stanford, T. R., Batra, R. Interaural phase-sensitive units in the inferior colliculus of the unanesthetized rabbit: effects of changing frequency. Journal of Neurophysiology. 57 (5), 1338-1360 (1987).
  40. Kalume, F., et al. Sudden unexpected death in a mouse model of Dravet syndrome. Journal of Clinical Investigation. 123 (4), 1798-1808 (2013).
  41. Xiang, C., et al. Threshold for maximal electroshock seizures (MEST) at three developmental stages in young mice. Zoology Research. 40 (3), 231-235 (2019).
  42. Ross, K. C., Coleman, J. R. Developmental and genetic audiogenic seizure models: behavior and biological substrates. Neuroscience and Biobehavior Reviews. 24 (6), 639-653 (2000).
  43. Faingold, C. L., Randall, M., Tupal, S. DBA/1 mice exhibit chronic susceptibility to audiogenic seizures followed by sudden death associated with respiratory arrest. Epilepsy and Behavior. 17 (4), 436-440 (2010).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

T pSay 169elektroensefalogramn rolojikn betelektrokardiyogramkardiyakaritmioksimetrekapnografiapneani l mSUDEPtav an

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır