Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
* Bu yazarlar eşit katkıda bulunmuştur
Burada sunulan protokol, görüntü kılavuzluğunda optik koherens tomografi (OCT) için veri toplama ve veri analizi prosedürlerini detaylandırır ve oküler hastalıkların çoklu kemirgen modellerinde uygulanmasını gösterir.
Yaşa bağlı makula dejenerasyonu, glokom, retinitis pigmentosa ve üveit gibi oküler hastalıklara her zaman retinal yapısal değişiklikler eşlik eder. Fundusu etkileyen bu hastalıklar her zaman fotoreseptör hücreleri, retinal ganglion hücreleri, retina kan damarlarındaki hücreler ve koroidal vasküler hücrelerdeki hücreler dahil olmak üzere retinadaki belirli hücre tiplerinde tipik anormallikler gösterir. Noninvaziv, yüksek verimli ve uyarlanabilir görüntüleme teknikleri hem klinik uygulama hem de temel araştırmalar için gereklidir. Görüntü kılavuzluğunda optik koherens tomografi (OCT), fundus fotoğrafçılığı ve yüksek çözünürlüklü OKT'yi bir araya getirerek, küçük lezyonların yanı sıra retina mimarisindeki önemli değişikliklerin doğru teşhisini sağladığı için bu gereksinimleri karşılar. Bu çalışma, görüntü kılavuzluğunda OCT için veri toplama ve veri analizi prosedürlerini detaylandırır ve koroidal neovaskülarizasyon (CNV), optik sinir ezilmesi (ONC), ışığa bağlı retina dejenerasyonu ve deneysel otoimmün üveit (EAU) kemirgen modellerinde uygulamasını gösterir. Bu teknik, göz alanındaki araştırmacıların kemirgen retinal yapısal değişikliklerini rahat, güvenilir ve izlenebilir bir şekilde tanımlamasına yardımcı olur.
Fundusu etkileyen oküler hastalıklar her zaman retinadaki fotoreseptör hücreleri, retinal ganglion hücreleri, retina kan damarlarındaki hücreler ve koroidal kan damarlarındaki hücreler gibi belirli hücre tiplerinde tipik anormallikler sergiler ve bu da daha sonra hastaların görme keskinliğini etkileyebilir1. Geri dönüşü olmayan görme bozukluğunu önlemek için zamanında tanı ve uygun tedaviler gereklidir1. Optik koherens tomografi (OKT), diğerlerinin yanı sıra yaşa bağlı makula dejenerasyonu, retinitis pigmentosa, glokom, üveit ve retina dekolmanı dahil olmak üzere bir dizi oküler hastalığı değerlendirmek için klinikte yaygın olarak kullanılmaktadır 2,3,4. Bu tür noninvaziv, yüksek verimli ve uyarlanabilir görüntüleme tekniği, deney hayvanlarında hastalık koşullarının zamanında değerlendirilmesi için de gereklidir5,6,7,8,9,10.
Görüntü kılavuzluğunda optik koherens tomografi (OCT), 1.8 μm uzunlamasına çözünürlükte ve 2 μm eksenel çözünürlükte hayvan retinalarının kesitsel görüntülerini üretmek için interferometri kullanır. Retinal mimari değişikliklerin araştırılmasında en az üç avantajı vardır: 2,3,4,5,6,7,8,9,10. Birincisi, araştırmacıların aynı hayvan retinasındakiilgilenilen yeri dinamik olarak takip etmelerini sağlayan invaziv olmayan bir tekniktir 5,6,7,8,9,10. İkincisi, bu özellik her deney için örneklem boyutunu önemli ölçüde azaltır3. Bu arada, 2,3,4,5,6,7,8,9,10 araştırma projelerinde önemli ölçüde zaman ve emek tasarrufu sağlar. Üçüncüsü, görüntü kılavuzlu OCT, OCT görüntülerini yakalarken renkli fundus görüntüleri elde eder ve böylece kullanıcılar için doğru ve güvenilir sonuçlar sağlar.
Bu makale, görüntü kılavuzluğunda OCT için görüntü toplama ve veri analizi prosedürlerini açıklar ve koroidal neovaskülarizasyon (CNV)11,12, optik sinir ezilmesi (ONC)13,14,15,16, ışığa bağlı retina dejenerasyonu 17,18,19,20,21 fare ve sıçan modellerinde uygulamasını detaylandırır ve deneysel otoimmün üveit (EAU)22,23. Bu çok yönlü teknikle, araştırmacılar yüksek çözünürlüklü OCT görüntülerinin yanı sıra fundus görüntülerini de rahat ve verimli bir şekilde yakalayabilirler.
Tüm hayvan prosedürleri, Görme ve Oftalmoloji Araştırmaları Derneği'nin Oftalmik ve Görme Araştırmalarında Hayvanların Kullanımına İlişkin Beyanı'na uygundur ve Wenzhou Tıp Üniversitesi (WMU) Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır. Sıçanlara ve farelere, 12 saatlik karanlık / aydınlık bir döngüde 18 lux çevresel ışık yoğunluğu ile su ve yiyeceğe ücretsiz erişim verildi.
1. Oküler hayvan modellerinin hazırlanması
2. OCT modülü kurulumu
3. OCT deneyleri için hayvan hazırlığı
4. Görüntü Kılavuzlu OCT Görüntüleme
NOT: Yazılım arayüzü üç bölüme ayrılmıştır: parlak alan görüntüsü, OCT kontrol sekmeleri ve OCT ekranı (Şekil 2).
5. Kalınlık ölçümü ve kantitatif analiz
NOT: Bu OCT yerleşik analiz yazılımına sahiptir. OCT görüntüleri bu yazılım kullanılarak bölümlere ayrılabilir ve analiz edilebilir (Şekil 3).
Görüntü kılavuzluğunda OCT, farelerde lazerle indüklenen koroidal neovaskülarizasyonda (CNV) lazer noktasının gelişimini izlemek için kullanılabilir. Şekil 1'de gösterildiği gibi, yenidoğan kan damarları Bruch zarından ve retina pigment epitel (RPE) tabakasından geçti ve lazer yaralanmasından sonra fibrotik bir skar oluşturdu11,12. Bu lezyon noktası tam boyutlu tarama (
Bu protokol, görüntü kılavuzlu OCT'nin görüntü toplama ve kalınlık ölçümü için talimatlar sağlar. Araştırmacılar, oküler hastalıkların en popüler dört kemirgen modelini göstererek, görüntü kılavuzluğunda OCT'nin ciddi retinal yapısal değişiklikleri incelemede mükemmel performans sağladığını buldular. Öyle ki, yüksek çözünürlüklü görüntülerle, OCT görüntülerinde de çok küçük lezyonlar kolaylıkla bulunabilir. Görüntü kılavuzluğu...
Yazarların hiçbirinin açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Yazarlar, Devlet Anahtar Oftalmoloji, Optometri ve Görme Bilimi Laboratuvarı üyelerine teknik destekleri ve el yazması ile ilgili faydalı yorumları için teşekkür eder. Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82101169, 81800857, 81870690), Çin'in Zhejiang İl Doğa Bilimleri Vakfı (LGD22H120001, LTGD23H120001, LTGC23H120001), Wenzhou Programı Çin Bilim ve Teknoloji Bürosu (Y20211159), Guizhou Bilim ve Teknoloji Destek Projesi (Qiankehezhicheng [2020] 4Y146) ve Devlet Anahtar Oftalmoloji Laboratuvarı Projesi, Optometri ve Görme Bilimi (No. K03-20220205).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
BALB/c mouse | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd | Animal model preparations | |
C57BL/6JNifdc mouse | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd | Animal model preparations | |
Carbomer Eye Gel | Fabrik GmbH Subsidiary of Bausch & Lomb | Moisten the cornea | |
Complete Freund’s adjuvant | Sigma | F5881 | EAU experiment |
Experimental platform | Phoenix Technology Group | Animal model preparations | |
hIRBP161-180 | Shanghai Sangon Biological Engineering Technology & Services Co., Ltd. | EAU experiment | |
Ketamine | Ceva Sante Animale | General anesthesia | |
Laser box | Haag-Streit Group | Merilas 532α | Animal model preparations |
Lewis rat | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd | Animal model preparations | |
Mycobacterium Tuberculosis H37RA | Sigma | 344289 | EAU experiment |
Phoneix Micron IV with image-guided OCT and image-guided laser | Phoenix Technology Group | Animal model preparations | |
Tissue forceps | Suzhou Mingren Medical Instrument Co., Ltd | MR-F101A-5 | Animal model preparations |
Tropicamide Phenylephrine Eye Drops | SANTEN OY, Japan | Eye dilatation | |
Vannas scissors | Suzhou Mingren Medical Instrument Co., Ltd | MR-S121A | Animal model preparations |
Xylazine | Ceva Sante Animale | General anesthesia |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır