Fare Floresan Anjiyografi Görüntülerinden Retina Damar Çapının Ölçülmesi

Özet

Fare retinal damar sistemi, vasküler patern oluşumunun mekanizmalarını anlamada özellikle ilgi çekicidir. Bu protokol, optik diskten sabit bir mesafede floresan anjiyografi fundus görüntülerinden fare retina damarlarının çapını otomatik olarak ölçer.

Özet

Anormal damar büyümesinin sonuçta görme kaybına yol açabileceği retinopatilerde retinal vaskülatür gelişimini incelemek önemlidir. Mikroftalmi ile ilişkili transkripsiyon faktörü (Mitf) genindeki mutasyonlar hipopigmentasyon, mikroftalmi, retina dejenerasyonu ve bazı durumlarda körlüğü gösterir. Fare retinasının noninvaziv yollarla in vivo görüntülenmesi göz araştırmaları için hayati önem taşır. Bununla birlikte, küçük boyutu göz önüne alındığında, fare fundus görüntülemesi zordur ve özel araçlar, bakım ve eğitim gerektirebilir. Bu çalışmada, MATLAB ile yazılmış otomatik bir program ile farelerde retina damar çapının analiz edilmesini sağlayan benzersiz bir yazılım geliştirdik. Fundus fotoğrafları, floresein tuzu solüsyonunun intraperitoneal enjeksiyonunu takiben ticari bir fundus kamera sistemi ile elde edildi. Kontrastı artırmak için görüntüler değiştirildi ve MATLAB programı, ortalama vasküler çapın optik diskten önceden tanımlanmış bir mesafede otomatik olarak çıkarılmasına izin verdi. Yabani tip farelerde ve Mitf geninde çeşitli mutasyonlara sahip farelerde retina damar çapı analiz edilerek vasküler değişiklikler incelendi. Burada geliştirilen özel olarak yazılmış MATLAB programı pratiktir, kullanımı kolaydır ve araştırmacıların ortalama çapı ve ortalama toplam çapı ve ayrıca fare retinal damar sisteminden gelen damar sayısını rahat ve güvenilir bir şekilde analiz etmelerini sağlar.

Giriş

Muhtemelen vücutta en çok araştırılan damar yatağı retina damar sistemidir. Giderek gelişen teknik gelişmişlik ile retina damar sistemi, yaşayan hastalarda kolayca fotoğraflanmakta ve birçok araştırma alanında kullanılmaktadır¹. Ek olarak, gelişim sırasında fare retinal damar sisteminin, vasküler büyümenin temel biyolojisine yönelik araştırmalar için çok etkili bir model sistem olduğu kanıtlanmıştır. Retina damar sisteminin birincil amacı, nöral dokuya nüfuz eden laminer bir kılcal ağ örgüsü yoluyla retinanın iç kısmına metabolik destek sağlamaktır². Bununla birlikte, retinanın durumu ve sonuç olarak herhangi bir işlev b....

Protokol

Tüm deneyler İzlanda Gıda ve Veterinerlik Kurumu (MAST lisansı No. 2108002) tarafından onaylandı. Tüm hayvan çalışmaları, Görme ve Oftalmoloji Araştırmaları Derneği'nin (ARVO) Oftalmik ve Görme Araştırmalarında Hayvanların Kullanımı Bildirimi'ne göre yürütülmüştür. Bu çalışmada erkek ve dişi C57BL/6J ve Mitf^mi-vga9/+ fareler kullanıldı. Kontrol olarak C57BL/6J fareleri (n = 7) kullanıldı. Yabani türler ticari olarak elde edildi (Malzeme Tablosuna bakınız), ancak tüm mutant fareler (n = 7) İzlanda Üniversitesi'ndeki Biyomedikal Merkezi'ndeki hayvan tesislerinde yetiştirildi ve yetiştirildi. Bu çalışmada 3 aylık hayvanlar; Bununla bi....

Sonuçlar

Şekil 1, test edilen tüm farelerden alınan fare FFA görüntülerine uygulanan retina damar sistemini analiz etmek için kullanılan işlemi göstermektedir. Optik diskin merkezinden dairesel, saat yönünde piksellerin yoğunluğunu ölçmek için optik diskin iki katı büyüklüğünde bir yarıçap kullanılır. Sırasıyla kullanıcı tarafından belirlenen bir eşiğin üstünde ve altında noktalarla karşılaştığında pikselleri bir başlangıç veya bitiş noktasıyla işaretl.......

Tartışmalar

Bu makale, fare FA görüntülerinden retina damar çapını ve retina vaskülatürünü analiz etmek için bir yöntem sunan ilk makaledir. Retina damar sisteminin görüntülerini yakalamak için sadece fundus görüntüleme kullanıldığından, yöntemin birkaç dezavantajı vardır, bunlardan biri, bu çalışmada incelenen farelerde retina damar sisteminin yalnızca yüzeysel katmanlarındaki değişikliklerin çıkarılabilmesidir; Daha derin katmanlardaki herhangi bir farklılık henüz bilinmemektedir.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
1% Tropicamide (Mydriacyl)	Alcon Inc Laboratories		Mydriatic agent
2% Methocel	OmniVision Eye Care		Hydroxypropryl methylcellulose gel
C57BL/6J	Jackson Laboratory	000664	Wild type mice
Chanazine 2% (xylazine)	Chanelle Animal Health UK	BN I21322/I	Anesthesia IP
Excel for Microsoft 365	Microsoft Inc		Software package
Fluorescein sodium salt	Sigma-Aldrich	28803-100G	Fluorescent angiography
Matlab 8.0	The MathWorks, Inc.		Software package
Micron IV rodent fundus camera	Phoenix-Micron	40-2200	Fundus photography
Phenylephrine 10% w/v	Bausch & Lomb		Mydriatic agent
Phosphate Buffered Saline - 100 tablets	Gibco	18912-014	Dilution
Sigmaplot 13	Jandel Scientific Software		Software package
S-Ketamine, 25 mg/mL	Pfizer Inc.	PAA104470	Anesthesia IP