Angelman Sendromlu Bir Fare Modelinin Davranışsal Karakterizasyonu

Özet

Bu el yazması, bir Angelman sendromlu fare modelini doğrulamak için bir dizi yüksek oranda tekrarlanabilir davranış testi sunmaktadır.

Özet

Bu makale, yerleşik bir fare AS'de Angelman sendromu (AS) benzeri fenotipleri karakterize etmek için mevcut olan bir dizi davranışsal testi açıklamaktadır. Hayvan motor bozukluklarını tespit etmek ve karakterize etmek için rotarod öğrenme paradigmasını, ayrıntılı yürüyüş analizini ve yuva kurma testini kullanıyoruz. Açık alanda hayvan duygusallığını ve yükseltilmiş artı labirent testlerinde ve ayrıca kuyruk süspansiyon testinde etkiyi test ediyoruz. AS fareleri açık alan testinde test edildiğinde, motor işlev bozuklukları labirentteki fare davranışını etkilediğinden ve aktivite puanlarını değiştirdiğinden sonuçlar dikkatle yorumlanmalıdır.

Sunulan davranış testlerinin tekrarlanabilirliği ve etkinliği, farklı nakavt varyantlarına sahip birkaç bağımsız Uba3a fare hattında zaten doğrulanmıştır ve bu test setini AS araştırmasında mükemmel bir doğrulama aracı olarak oluşturmuştur. İlgili yapıya ve yüz geçerliliğine sahip modeller, hastalığın patofizyolojisini aydınlatmak ve nedensel tedavilerin geliştirilmesini sağlamak için daha fazla araştırmayı garanti edecektir.

Giriş

Angelman sendromu (AS) nadir görülen nörogelişimsel bir hastalıktır. AS'nin en yaygın genetik kökeni, hastaların yaklaşık% 74'ünde bulunan maternal kaynaklı kromozomun 15q11-q13 bölgesinin büyük bir silinmesidir¹. Bu bölgenin silinmesi, bir E3 ubikitin ligazını kodlayan AS'nin ana etken geni olan UBE3A'nın kaybına neden olur. Nöronlardaki UBE3A geninin baba aleli, damgalama olarak bilinen bir süreçte susturulur. Sonuç olarak, genin baba tarafından damgalanması, merkezi sinir sisteminde (CNS) yalnızca maternal ekspresyona izin ^verir2. Bu nedenle, maternal kaynaklı kromozomdan UBE3A gen delesyonu....

Protokol

Bu çalışmada kullanılan tüm hayvanlar ve deneyler etik incelemeden geçirilmiş ve 2010/63/EU sayılı Avrupa Direktifine uygun olarak yürütülmüştür. Çalışma, Çek Hayvan Refahı Merkez Komisyonu tarafından onaylandı. Fareler ayrı ayrı havalandırılan kafeslere yerleştirildi ve 12 saatlik bir aydınlık/karanlık döngüsü ile 22 ± 2 ° C'lik sabit bir sıcaklıkta tutuldu. Farelere fare yemi ve su ad libitum verildi. Fareler, kafes başına üç ila altı hayvandan oluşan gruplar halinde barındırıldı. Testten önce tartım dışında herhangi bir işlem gerçekleştirilmemiştir. Bu protokolde kullanılan tüm malzeme ve ekipmanlarla ilgili ayrıntılar için Malzeme Tablosuna

Tartışmalar

Farklı fare suşlarında oluşturulan AS modelleri, insan semptomlarıyla karşılaştırmayı kolaylaştırmak için genellikle hayvanların duygusal durumu, motor işlevleri ve bilişsel yetenekleri testleriyle doğrulanır^31,32. AS modellerinde motor eksikliği, laboratuvarlar arasında en tutarlı bulgudur, bunu mutantların değişmeyen duygusallık durumu ve yuva oluşturmada zorluklar^{izlemektedir 31,32,33}

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cages, individually ventilated	Techniplast
DigiGait	Mouse Specifics, Inc., 2 Central Street Level Unit 110 Framingham, MA 01701, USA	Equipment was tendered, no catalogue  number was provided, nor could be find on company's web site	Detailed analysis of mouse gait, hardware and software provided.
FDA Nestlet squares	Datesand Ltd., 7 Horsfield Way, Bredbury, Stockport SK6, UK	Material was bought from Velaz vendor via direct email request. Velaz do not provide any catalogue no.	Cotton nestlets for nest building test. Nestlet discription: 2-3 g each, with diameter around 5 x 5 x 0.5cm.
Mouse chow	Altramion
Rotarod	TSE Systems GmbH, Barbara-McClintock-Str.4 12489 Berlin, Germany	Equipment was tendered, no catalogue  number was provided, nor could be find on company's web site	Rotarod for 5 mice, hardware and software provided. Drum dimensions: Diameter: 30 mm, width per lane: 50 mm, falling distance 147 mm.
Tail Suspension Test	Bioseb, In Vivo Research Instruments, 13845 Vitrolles FRANCE	Reference: BIO-TST5	Fully automated equipment for immobility time evaluation of 3 mice hanged by tail, hardware and software provided
Transpore medical tape	Medical M, Ltd.	P-AIRO1291	The tape used to attach an animal to the hook by its tail.
Viewer - Video Tracking System	Biobserve GmbH, Wilhelmstr. 23 A 53111 Bonn, Germany	Equipment with software were tendered, no catalogue  number was provided, nor could be find on company's web site	Software with custom made hardware: maze, IR base, IR sensitive cameras. Custom-made OF dimensions: 42 x 42 cm area, 49 cm high wall, central zone area: 39 cm2. A custom-made EPM was elevated 50 cm above the floor, with an open arm 79 cm long,  9 cm wide, and closed arm 77 cm long, 7.6 cm wide.