Genom Düzenleme ve İlaç Dağıtımı için Yenidoğan Farenin İntratekal Enjeksiyonu

Özet

Mevcut protokol, gen düzenleme ve ilaç dağıtımı için yenidoğan farelerde intratekal enjeksiyonların gerçekleştirilmesi için adım adım talimatları özetlemektedir.

Özet

İntratekal enjeksiyon, hem pediatrik hem de yetişkin kliniklerinde yaygın olarak kullanılan bir prosedürdür ve ilaç ve tedavileri uygulamak için etkili bir araç olarak hizmet eder. Bu yöntem, ilaçları ve tedavileri doğrudan merkezi sinir sisteminin beyin omurilik sıvısına vererek, intravenöz, deri altı veya kas içi enjeksiyonlar gibi diğer yollara kıyasla sistemik yan etkileri azaltırken daha yüksek lokalize ilaç konsantrasyonları sağlar. İntratekal enjeksiyon, kemirgenlerde ve insan olmayan primatlar da dahil olmak üzere diğer büyük hayvanlarda nörogenetik bozuklukların tedavisine odaklanan klinik öncesi çalışmalarda hayati bir rol oynadığından, önemi klinik ortamların ötesine uzanır. Bununla birlikte, yaygın olarak uygulanmasına rağmen, genç, özellikle yenidoğan yavrularda intratekal enjeksiyon, küçük boyutları ve kırılgan yapıları nedeniyle önemli teknik zorluklar doğurmaktadır. Yenidoğan farelerde intratekal enjeksiyonların başarılı ve güvenilir bir şekilde uygulanması, ayrıntılara titizlikle dikkat edilmesini ve çeşitli faktörlerin dikkatli bir şekilde değerlendirilmesini gerektirir. Bu nedenle, yalnızca talimatlar sağlamakla kalmayıp aynı zamanda prosedürel tutarlılığın yanı sıra hayvanların güvenliği ve refahını sağlamak için temel teknik hususları ve iyi laboratuvar uygulamalarını vurgulayan standart bir protokole çok önemli bir ihtiyaç vardır.

Bu karşılanmamış ihtiyacı karşılamak için, özellikle doğum sonrası 1. günde (P1) yenidoğan yavrularda intratekal enjeksiyonların gerçekleştirilmesi için ayrıntılı ve kapsamlı bir protokol sunuyoruz. Araştırmacılar, adım adım talimatları izleyerek, yenidoğan yavrularında intratekal enjeksiyonları güvenle gerçekleştirebilir ve gen replasmanı veya genom düzenlemeye dayalı tedaviler için ilaçların, antisens oligoların ve virüslerin doğru bir şekilde verilmesini sağlayabilir. Ayrıca, hayvanların refahını korumak ve güvenilir deney sonuçları sağlamak için iyi laboratuvar uygulamalarına bağlı kalmanın önemi vurgulanmaktadır. Bu protokol, yenidoğan farelerde intratekal enjeksiyonlarla ilgili teknik zorlukları ele almayı ve sonuçta potansiyel terapötik müdahaleler geliştirmeyi amaçlayan nörogenetik araştırma alanındaki ilerlemeleri kolaylaştırmayı amaçlamaktadır.

Giriş

İntratekal (IT) enjeksiyon, kliniklerde hem pediatrik hem de yetişkin hastalarda ilaç uygulamak, beyin omurilik sıvısı toplamak ve kafa içi basıncı korumak için kullanılan yaygın bir klinik prosedürdür ^1,2. İlaçların intratekal enjeksiyon yoluyla uygulanması, sistemik maruziyeti en aza indirirken merkezi sinir sistemindeki (MSS) ilaç konsantrasyonlarını artırmak için etkili bir yaklaşımdır. Sonuç olarak, bu yöntem terapötik etkinliği arttırır ve özellikle sıcaklığa duyarlı ve kısa yarı ömürlü ilaçlar için yan etkileri azaltır³.

Kemirgen modelleri kul....

Protokol

Açıklanan prosedürler ve protokoller, Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Ulusal Sağlık Enstitüleri Kılavuzu'nda belirtilen yönergelere uygundur. Ek olarak, prosedürler Yale Üniversitesi Tıp Fakültesi'ndeki Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi'nden onay aldı. Sunulan çalışma için yenidoğan vahşi tip (WT) C57BL / 6J erkek ve dişi fareler kullanıldı. Hayvanlar ticari bir kaynaktan elde edilmiştir (bkz.

1. Çalışma alanının hazırlanması

1. Önce aşağıdaki öğeleri hazırlayın: kriyo-anestezi için ıslak buz, yavruları barajdan ayırmak için boş bir kafes, bir diseksiyon mikroskobu, bir ışık kaynağ....

Tartışmalar

Yenidoğan farelerde (P1) intratekal enjeksiyon için adım adım bir prosedür tarif edilmiştir ve beyinlerinde yaygın ilaç dağılımı ile sonuçlanır. Serebral korteks^11'in delinmesini içeren yenidoğan farelere ilaç vermek için yaygın intraserebroventriküler enjeksiyon yöntemiyle karşılaştırıldığında, intratekal enjeksiyon, iğne penetrasyonu nedeniyle yenidoğan fare beyninin doğrudan yaralanmasını önler. Minimal invazivlik nedeniyle, intratekal enjeksiyon gerektiğinde.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Balance	Ohaus Corporation	30253017
C57BL/6J mice	The Jackson Laboratory	000664
Digital Microscope	RWD	DOM-1001
DPBS	ThermoFisher	14190144
Fast Green	Sigma	F7252-5G
Heating pad	RWD	69020
Needles	Hamilton	6PK (34/0.375”/4/12DEG)S
Syringe	Hamilton	1702RN
Syringe Filters	Sigma	SLGVM33RS