Bir Orman Ağaç Kurdundan Entomopatojenik Mantarların İzolasyonu, Davranışsal Tanımlama ve Patojenite Değerlendirmesi

Özet

Burada, bir orman odun kurdundan entomopatojenik mantarlar elde etmek için bir protokol ve bir Coleopteran model böcek kullanarak entomopatojenik aktivitelerini değerlendirmek için ikame edici bir yol sunuyoruz. Bu yöntem, doğal ormanlardaki odun delici böcek zararlılarından entomopatojenik mantar kaynaklarını keşfetmek için etkili ve kullanışlıdır.

Özet

Orman odun delicileri (FWB) dünya çapında ciddi ağaç hasarına ve ekonomik kayıplara neden olur. FWB ortaya çıkma döneminde entomopatojenik mantarların (EPF) salınması, kimyasal kontrole kabul edilebilir bir alternatif olarak kabul edilir. Bununla birlikte, EPF kaynakları, tarımsal böcek zararlılarının aksine, FWB'ler için önemli ölçüde daha az araştırılmıştır. Bu makale, örnek olarak yabani Monochamus alternatus popülasyonlarını kullanarak FWB'lerden EPF kaynaklarını keşfetmek için bir protokol sunmaktadır. Bu protokolde M ile yemlenen tuzakların atanması. Farklı popülasyonlara alternatif cezbediciler, böceğin ortaya çıkma dönemlerinde doğal enfeksiyon semptomları olan yeterli örneklerin toplanmasını garanti etti. Bütünleşmelerin ince bir şekilde incelenmesi ve seçici bir ortama yerleştirilmesinin ardından, mantar türleri böcek gövdelerinin her bir parçasından izole edildi ve hem moleküler hem de morfolojik özelliklere dayalı olarak tanımlandı.

Birkaç mantar türü, sağlıklı M. alternatus'un spor süspansiyonları ile yeniden enfeksiyonu yoluyla parazitik EPF'ler olarak onaylanmıştır. M. alternatus üzerindeki davranışsal fenotipleri, taramalı elektron mikroskobu kullanılarak gözlemlendi ve ayrıca Coleopteran model böcek Tribolium castaneum üzerindekilerle karşılaştırıldı. Her iki böcek türü üzerinde tutarlı parazitizm fenotipleri sunan EPF'ler için, T üzerindeki aktivitelerinin değerlendirilmesi. castaneum , M. alternatus ile ilgili gelecekteki çalışmalar için ölümcüllük hakkında değerli bilgiler sağlamıştır. Bu protokol, Çin'deki M. alternatus popülasyonları hakkında yeni bildirilen EPF'nin keşfine yardımcı oldu ve bu, diğer FWB'lerden daha fazla EPF kaynağını keşfetmek için etkili bir yaklaşım olarak uygulanabilir.

Giriş

Böcek zararlılarının neden olduğu tahribat, hem orman hem de tarım ekosistemlerinde büyük ekolojik ve ekonomik kayıplara yol açmıştır. Çoğu tarım zararlısı, konukçu bitkilere zarar verirken kendilerini doğal düşmanlara veya yapay kontrol ajanlarına maruz bırakır. Bunun yerine, orman odun delicileri (FWB), konakçı ağaç gövdeleri 1 içinde neredeyse tüm gelişim döngülerini tamamlar^ve bu da vahşi alanda FWB'den verimli biyokontrol organizmalarını keşfetmek için büyük zorluklar doğurur. Daha da kötüsü, FWB'lerin çok sayıda fitopatojen² taşıması veya potansiyel vektörleri

Protokol

1. Mantarların M. alternatus'tan izolasyonu (Şekil 1)

1. Böcek örneğini toplayın
   1. Çam testere böcekleri M'yi toplayın. doğal olarak enfekte olmuş çam ormanlarında böcek popülasyonlarının tahmin edilen ortaya çıkma dönemlerinden önce cezbedici maddelerle yemlenmiş ticari tuzaklar kullanan alternatus (Malzeme Tablosuna bakınız).
      NOT: Bu çalışmada, böcekler güney Çin'in beş coğrafi bölgesinden (Huzhou / Zhejiang, Liangshan / Sichuan, Xiamen / Fujian, Shaoguan / Guangdong, Yulin / Guangxi) toplanmıştır. Tuzak ayarı ....

Tartışmalar

FWB'nin farklı coğrafi popülasyonları, EPF türlerinin yerel iklim faktörlerine uzun vadeli çevresel adaptasyonu ve konakçı böceğin spesifik genotipik popülasyonu nedeniyle doğal entomopatojenik mantarlarla çeşitli etkileşimler geliştirebilir^44,45. Örnekleme alanlarının birden fazla böcek oluşum bölgesine genişletilmesi, tarımsal böcek zararlıları⁴⁶ ile ilgili önceki çalışmal.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.5 mL, 2 mL centrifuge tubes	Biosharp	BS-15-M
10 µL pipet tips	Sangon Biotech	F601216
10 µL, 20 µL, 100 µL, 200 µL, 1,000 µL pipettes	Rainin
1,000 µL pipet tips	Sangon Biotech	F630102
2 mL cryogenic vials	Corning	430659
20x PBS buffer	Sangon Biotech	B548117-0500
200 µL pipet tips	Sangon Biotech	F601227
2,000 bp maker	TaKaRar	SD0531
50 mL tubes	Nest	602052
50% glutaraldehyde solution	Sangon Biotech	G916054
50x TAE buffer	Sangon Biotech	B548101
6x loading buffer	TaKaRar	SD0503
Agarose	Sangon Biotech	A610013
Anhydrous ethanol	Jkchemical	LB10V37
Biochemistry Cultivation Cabinet	Shanghaiyiheng	LRH-250F
Chloroform	Juhua	61553
Commercial beetle traps	FEIMENGDI	BF-8	www.yinyouji.com
Gel imager	Bio-Rad	GelDoc XR+
Glycerol	Sangon Biotech	A600232
High speed refrigerated centrifuge	Sigma	D-37520
High-Pressure Steam Sterilization Pot	Mettler Toledo	JA5003
Isopropyl alcohol	General-reagent	G75885B
Nucleic acid dye	Sangon Biotech	A616696
Optical Microscope, OM	Leica	DM2000
Parafilm	Parafilm	PM996
PCR meter	Heal Force	Trident960
Penicillin G	Marklin	GB15743
Potato dextrose agar, PDA	Oxoid	CM0139
Potato dextrose broth, PDB	Solarbio	P9240
Primers	Sangon Biotech	/
Primers Taq	TaKaRar	RR902A
Rapid Fungi Genomic DNA Isolation Kit	Sangon Biotech	B518229
Scanning Electron Microscope, SEM	Hitachi	S-3400N
Streptomycin	Marklin	S6153
Tetracycline	Marklin	T829835
Tween-80	Marklin	T6336
Vacuum freeze dryer	Yamato	DC801
Vortex Shaker	HLD	WH-861
β-Mercaptoethanol	Marklin	M6230