Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
* Bu yazarlar eşit katkıda bulunmuştur
Hidradenitis Suppurativa hastalarından eksize edilen dokulardaki kutanöz sinüs yollarından (tüneller) titiz ve anaerobik organizmaları başarılı bir şekilde izole etmek için bir yöntem sergiliyoruz.
Hidradenitis Suppurativa (HS), ağrılı nodüller ve apseler ile kendini gösteren, cildin dermal katmanları içindeki sinüs yollarına (tünellere) ilerleyen, yaşam kalitesini ciddi şekilde azaltan önemli rahatsızlığa, kötü kokulu akıntıya, şekil bozukluğuna, kontraktürlere ve yara izlerine neden olan zayıflatıcı bir durumdur. HS, cilt mikrobiyomundaki değişikliklerle ilişkilidir, bağışıklık düzenlemesini ve cildin zararlı bakterilere karşı savunmasını etkiler. Yaygınlığına rağmen, HS mikrobiyomunun hastalık patolojisine katkısı ve tedaviye sınırlı yanıtı büyük ölçüde bilinmemektedir. Bugüne kadar, HS dokusu üzerinde yapılan çoklu 16S rRNA dizileme çalışmaları, Gram-negatif anaeroblarda bir artış ve cilt kommensallerinde bir azalma tanımlayarak yalnızca cins düzeyinde granülerlik elde etmiştir. HS'li bireylerde mikrobiyal disbiyozun daha derin bir şekilde anlaşılması, tedavi stratejilerini optimize etmek için esastır. Bu, HS mikrobiyomunu değerlendirmek için, cilt bozukluklarına odaklanan translasyonel çalışmalarda genellikle yeterince kullanılmayan bakteri türlerinin izolasyonu da dahil olmak üzere iki yönlü bir yaklaşım gerektirir. HS dokusundan tek tek mikroorganizmaların izole edilmesi, bakterilerin HS patogenezindeki rolünü aydınlatmak için çok önemlidir. Burada, anaerobik patojenleri HS tünel dokusundan başarılı bir şekilde izole etmek için tekrarlanabilir yöntemleri vurguluyor ve HS'deki bakteri rolünü anlamada ilk ve en kritik adımı sağlıyoruz. Bu yöntem, HS'ye mikrobiyal katkılara yönelik hedefli araştırmaların ve bu kronik durumun karmaşık mikrobiyal yükünü ele alan daha etkili, kişiselleştirilmiş tedavi stratejilerinin geliştirilmesinin yolunu açmaktadır.
Hidradenitis Suppurativa (HS), cildin dermal ve deri altı katmanlarında oluşan sinüs yollarına (tüneller) ilerleyen, belirgin ağrıya neden olan, pürülan akıntı, şekil bozukluğu ve zayıflatıcı psikososyal sekellere neden olan nodüller ve apseler ile karakterize yaygın bir dermatolojik durumdur 1,2. HS, tipik olarak geç ergenlik veya erken yetişkinlik döneminde ortaya çıkan renkli tenli kadınları ve bireyleri orantısız bir şekilde etkiler2. Durumun şiddetli fiziksel semptomları, yaşam kalitesini ciddi şekilde azaltabilen depresyon, anksiyete ve sosyal izolasyon dahil olmak üzere derin psikososyal etkisi ile birleşir3. İlerlemiş hastalık evresinde oluşan HS tünelleri, hastaların şu anda onaylanmış biyolojik tedaviye yanıt verme olasılığını önemli ölçüde azaltmaktadır ve cerrahi eksizyon tek tedavi yaklaşımı olmaya devam etmektedir 4,5.
Çok sayıda çalışma, HS tünelleri ile ilişkili mikrobiyomu karakterize etmiş, anaerobik patojenlerin prevalansını ve kutanöz kommensallerin bolluğunun azaldığını göstermiştir 6,7,8, son çalışmalar Porphyromonas spp. (tip I) ve Prevotella spp. (IV) diğer cinslerin yanı sıratünellerde 9. Başka bir çalışma, doku örneklemesinin derinliğine göre HS mikrobiyomunda varyasyon buldu ve tünel dokusundaki mikrobiyal bileşimin benzersizliğini doğruladı10. Ek olarak, disbiyozun HS'deki bağışıklık tepkisini etkilediği gösterilmiştirve bu da hastalık patogenezinde mikropların rolünü daha da etkilemektedir 11,12,13,14. Klindamisin, rifampisin ve tetrasiklinlerle uzun süreli sistemik antibiyotik tedavisi kullanımda olmasına ve etkilenen hastalarda drenaj tünellerinin sayısında bir azalma göstermesinerağmen 15,16, HS'deki antibiyotiğe dirençli anaerobik patojenler hakkındaki veriler bilinmemektedir. Şimdiye kadar, HS tünellerinden bakteri suşlarının izole edilmesi rapor edilmemiştir, bu da yeni antimikrobiyal tedaviler üzerine yapılan çalışmaları ve patojenlerin HS hastalık patogenezine katkısının derinlemesine değerlendirilmesini sınırlamaktadır. Patojenlerin izolasyonu için yöntemlerin standardizasyonu, yalnızca HS'nin patogenezindeki bakteri rolüne ilişkin gerçek içgörüleri kolaylaştırmakla kalmayacak, aynı zamanda daha hedefli ve gelişmiş müdahalelere doğru çeviriye de izin verecektir.
Burada, mikroorganizmaları HS tünel dokusundan başarılı bir şekilde izole etmek için bir yöntemi vurguluyoruz. Tek tek bakteri türlerini izole etmek, HS patolojisindeki rollerini anlamada çok önemli bir ilk adımdır. Bu yöntem, HS'ye mikrobiyal katkılara yönelik hedefli araştırmaların ve bu kronik durumda bakteriyel patojenleri ele alan daha etkili, kişiselleştirilmiş tedavi stratejilerinin geliştirilmesinin yolunu açmaktadır.
Bu protokol, Miami Üniversitesi'ndeki Kurumsal İnceleme Kurulu (IRB) tarafından onaylanmıştır (protokol #20200187). Bilgilendirilmiş onam, HS tüneli teşhisi konan hastalardan (n = 18, ortalama yaş ± standart sapma = 30.9 ± 9.4, 12 kadın, 6 erkek) ve/veya yasal vasi(ler)inden işlem öncesinde herhangi bir endişe veya sorunun ele alınmasına izin vermek için alınır.
1. Hasta numunesi toplama
2. HS cilt işleme
Bu çalışmada, HS tünellerinden anaerobik bakterilerin izolasyonu ve karakterizasyonu için bir protokol tanımlanmıştır. Bu protokol, HS'nin patogenezine mikrobiyal katkıyı anlamamızı artırmak için in vitro, ex vivo ve in vivo cilt enfeksiyonu modellerini kullanarak bu bakterilerin işlevini ve virülansını test etme potansiyeli yaratması açısından yeni ve dikkate değerdir. İlk olarak, rezeke edilmiş deriden tüneller steril forseps ile in...
Bu çalışmada, HS tünellerinde bakteri kolonize eden bakterilerin izole edilmesi ve bakımı için yeni bir yöntem sunulmaktadır. Bu tekrarlanabilir yöntem, sadece bu patolojik yapılarda bulunan suşların derinlemesine karakterizasyonuna izin vermekle kalmayacak, aynı zamanda HS patogenezinde spesifik mikropların rolünü araştıran sonraki fonksiyonel çalışmaları da mümkün kılacaktır. Protokolün kritik adımları, HS tünellerinden canlı titiz mikroorganizmaların k...
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması bildirmemektedir.
Bu çalışma R01AR083385 (IP, MTC, HLT), P50MD017347 (TG, IP, HLT) ve HS Foundation Danby araştırma bursu (TG) tarafından desteklenmiştir. Bu çalışma ayrıca Miami Üniversitesi Miller Tıp Fakültesi Analitik Görüntüleme Çekirdek Tesisi'ndeki VS120 Slayt Tarayıcı evi için NIH hibesi 1S1OD023579-01 ile desteklenmiştir.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
6mm punch biospy | INTEGRA | 33-36 | Other suppliers can be used |
8mm punch biospy | INTEGRA | 33-37 | Other suppliers can be used |
Agarose | Sigma Aldrich | A9539 | Other suppliers can be used |
Anaerobic Chambers | BD | 260672 | |
Anaerobic Transport Media | Anaerobic Systems | AS-911 | |
Brain heart Infusion Agar | Anaerobic Systems | AS-6426 | |
CO2 gaspak | BD | 260678 | |
Difco Reinforced Clostridial Medium | BD | 218081 | |
Glycerol | SIGMA | G5516-1L | Other suppliers can be used |
Hard shell PCR plates | BIO-RAD | HSP9601 | Other suppliers can be used |
Incubator | VWR | Symphony | Any callibrated incubator can be used |
Inoculation loops | VWR | 76544-926 | Other suppliers can be used |
LKV agar | HARDY Diagnostics | A60 | |
Microbial DNA-Free Water | Qiagen | 338132 | |
Nunc CryoTube | Thermo scientific | 377267 | Other suppliers can be used |
PCR (CFX Connect Real Time System) | BIO-RAD | CFX Connect Optics Module | Regular Themocycler can be used |
PEA agar | HARDY Diagnostics | A93 | |
Q5 High Fidelity 2X Master Mix | BioLabs | M0492S | |
QIAquick PCR Purification Kit | QIAGEN | 28104 | |
Reinforced clostridia media | BD | 218081 | |
Thin Forceps | Millipore Sigma | F4017 | Other suppliers can be used |
Trypticase Soy Agar (TSA II) with 5% sheep blood | Thermo scientific | 221261 |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır