Başlamak için, fare kuyruğunu tutucu tüpün üst açıklığına sokun. Fareyi yavaşça tüpün içine çekin ve kaçmasını önlemek için fişi farenin önüne yerleştirin. Daha küçük bir fare için bir sınırlama kılıfı yapmak için, farenin burnunun tıkanmadığından ve nefes almak için yeterli alana sahip olduğundan emin olmak için koninin burun ucunu kesin.
Ardından koninin arkasını farenin uzunluğuna benzer şekilde kesin. Fareyi daha önce açıklandığı gibi tüp tutucuya yerleştirin. Farenin kuyruğunu tutarken, farenin koninin içine girmesine izin verin.
Tutucu koniyi tüpün içine kaydırın. Farenin kuyruğunun tüpün arkasından tamamen dışarı çıktığından ve farenin koninin içinde nefes almak için yeri olduğundan emin olun. Tüp tapasını koninin burun açıklığının hemen önüne sabitleyin.
15 mililitrelik konik tüpü ılık suyla doldurun. Tüp tutucuyu, fare içindeyken yükseltilmiş platforma yerleştirin. Kısıtlanmış farenin kuyruğunu, yan damarlar net bir şekilde genişleyene ve görünür hale gelene kadar en az bir dakika ılık suya batırın.
1.7 mililitre mikro santrifüj tüpü içeren kapaksız adeno ilişkili virüsü veya AAV'yi tüp rafına yerleştirin. Baskın el ile iğneyi tüpe dikey olarak yerleştirin. İğne tüpün içine girdikten sonra, tüpü baskın olmayan elinizle tutun.
Ardından, iğnenin tüp duvarına temas etmediğinden emin olarak tüpü ve şırıngayı aynı anda göz hizasına kaldırın. Her iki kolunuzu da masanın üzerine koyun ve dozu yavaşça şırınganın içine çekin. Şırıngadaki hava kabarcıklarını tek kullanımlık bir emici ped üzerinden dışarı atın.
Enjekte ediciyi ısıtmak için 40 saniye basılı tutun. Kuyruk damarlarının net bir şekilde görülebildiğinden emin olduktan sonra, tüp tutucuyu yükseltilmiş platformdan çıkarın ve doğrudan masanın üzerine yerleştirin. Kuyruğun kolay tutulması için fareyi ayakları aşağı bakacak şekilde kısıtlayıcıya yerleştirin.
Kurutmak için kuyruğu hızlı bir şekilde gazlı bezle silin. Sonra kuyruğu alkollü bir bezle silin ve tekrar kuru gazlı bezle kurulayın. Kuyruğu, iki yan damardan biri yukarı bakacak şekilde yaklaşık 90 derece sola veya sağa döndürün.
Kuyruğun orta üçte birlik kısmında uygun bir enjeksiyon bölgesi bulun. Kuyruğu baskın olmayan elinizle baş parmağınızı ve işaret parmağınızı enjeksiyon bölgesinin hemen distalinde tutarak tutun. Kuyruğu işaret parmağının üzerine katlayın, böylece enjeksiyon bölgesi işaret parmağı üzerinde düz durur.
Ardından germek için kuyruğu geri çekin ve enjeksiyon bölgesi tamamen yatay olur. Şırıngayı, şırınganın namlu flanşının her iki yanındaki baskın elin işaret ve orta parmaklarını kullanarak şırıngayı tutun ve başparmağınızı pistonda hazır tutun. Her iki elinizi de masanın üzerine koyun ve iğneyi, eğim yukarı bakacak şekilde doğrudan kuyruğa ve damara paralel ve paralel olarak yerleştirin.
Şimdi iğneye aşağı doğru baskı uygulayın ve AAV solüsyonunu damar içine enjekte etmek için damar içine doğru kaydırın. Dozu uyguladıktan sonra, iğneyi yavaşça geri çekin ve kanama durana kadar enjeksiyon bölgesinde en az 10 saniye boyunca gazlı bezle hemen baskı uygulayın. Enjeksiyon sonrası floresan raportör proteinin histolojik görüntülemesi, tdTomato'nun karaciğer ve kuadriseps boyunca yaygın olarak eksprese edildiğini gösterdi, bu da AAV9'un her iki dokunun farklı bölgelerine geniş ölçüde ulaştığını ve transdüksiyon yaptığını gösterdi.
