Akış Sitometrisi ile Yan Popülasyon Hücrelerini Tespit Etmek için Fare Kemik İliği Hücrelerinin Hoechst ile Boyanması

Başlamak için, fareden kemik iliği hücreleri alın ve iki mililitre hücre süspansiyonuna mililitre Hoechst 33342 başına beş mikrogram ekleyin. Negatif kontrol tüpünü de hazırlayın. Her 30 dakikada bir hafif çalkalama ile 90 dakika boyunca 37 santigrat derecede bir su banyosunda inkübe edin İnkübasyondan sonra, hücreleri buz üzerinde beş dakika soğutun ve ardından dört santigrat derecede beş dakika boyunca 250G'de santrifüjleyin.

Hücreleri, %2 FBS içeren Hank'in Dengeli Tuz Çözeltisini içeren soğuk çalışan bir çözelti içinde yeniden süspanse edin. Beş dakika boyunca dört santigrat derecede tekrar santrifüjleyin. Daha sonra, elde edilen hücre peletini numune başına 500 mikrolitre çalışan çözelti içinde yeniden süspanse edin.

Akış sitometrisi analizinden önce, hücreleri mililitre propidyum iyodür başına iki mikrogram ile destekleyin ve yaklaşık beş dakika boyunca buzun üzerine koyun.