Bu çalışma, Fen Bilimleri ve Kanada&#39;nın Mühendislik Araştırma Konseyi (NSERC) ve Crohn ve Kanada Kolit Vakfı (CCFC) den KJ için faaliyet hibe tarafından desteklenmiştir. VM SÜMAE Bursu ve GB Sağlık Araştırmaları Kanada Enstitüleri (CIHR) mezunu öğrencilik tarafından desteklenmektedir. BAV Bağırsak ve Karaciğer Hastalıkları Pediatrik Gastroenteroloji ve KJ Pediatrik İBH Araştırma ve Kanada Araştırma Başkanı Vakfı (ÇOCUK) Başkanı ÇOCUK ve Çocuk ve Aile Araştırma Enstitüsü (SÜMAE) Klinisyen Bilim Ödülü Programı tarafından desteklenen bir Kıdemli Klinisyen Bilimci olan bir çocuk olduğunu , British Columbia Üniversitesi.

Hayvan denekleri prosedürleri British Columbia Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından açıklanan hayvan bakım yönergeleri izleyin. Temsilci sonuçlar Sprague-Dawley sıçanlarından sunulacak ise bu protokolde belirtilen prosedürler, sıçanlar ve fareler hem de tarif edilecektir. 1.. DNBS ve intrarektal İdaresi hazırlanması <ol><li> Sıçanlarda DNBS rektal damlatılması için, taze% 50 etanol DNBS/250 ul 15-30 mg hazırlar. Fareler için,% 50 etanol DNBS/100 ul 2-6 mg hazırlar. Not: Her bir tesiste uygulanacak kesin DNBS konsantrasyonunu optimize. Erkek Sprague-Dawley sıçanları ve C57BL / 6 fareleri, ancak diğer fare ve sıçan suşları kullanılabilir DNBS kolit indüksiyonu için tercih edilir. Kontrol grupları, ancak bir Omi olabilir etanolün etkilerini verilen hafif ya da mevcut olmadığı gibi sadece% 50 etanol ile muamele edilmiş fareler ve sıçanlar kullanılabilirbir çalışma 12 için bu grubun dahil t. </li><li> Sonuna bağlanmış (farenin - - sıçan ya da PE-50 PE-90), bir polietilen kateter sahip olan bir 19 G iğne ile bir 1 ml şırınga takın. </li><li> Hafif bir ısıtma yastığı sıçan veya fare istirahat uyutmak (burun konisi üzerinden% 1.5 izofluran verilerek, örneğin hayvanlar yine göz kırpma ve yutma refleksleri var ve düzenli solunum göstermelidir). Kurumasını önlemek için gözlerini onun gözlerine gözyaşı jeli uygulayın. </li><li> Yavaşça uzak kolonda mevcut olabilecek herhangi bir dışkı çıkarmak için hayvanın arka ucuna parmak uçları ile basınç uygulanır. </li><li> Yavaşça fareler için sıçan, veya 3-4 cm için anüs için yaklaşık 8 cm proksimal ulaşan kateter ile, intrarektal kateter yerleştirin. Kolay sokulmasına izin veren, yağlamak için kateteri sokulurken çözeltinin küçük bir miktar enjekte edilir. Not: kateterin yerleştirilmesi sırasında herhangi bir direnç hissedilir ise, bu delinmesi yol açabilir olarak eklemek devam etmeyinbağırsak duvarı. Kateteri çıkarın ve tekrar işlem olarak kolon yağlama, yavaşça yeniden takın girişimi. </li><li> Yavaş yavaş 250 (sıçan) ya da 100 (fare) DNBS ul ya da kontroller için eşit hacimde% 50 etanol ya da enjekte edilir. DNBS enjekte ettikten sonra, DNBS kaybını önlemek için 90 saniye boyunca hayvan baş aşağı yerleştirin. </li><li> DNBS verilmesinden sonra, ilk hafta boyunca su kaybını önlemek için% 0.2 tuzlu su içinde% 8 sükroz hayvanların suya doyurmaya. </li><li> Dikkatle kilo kaybı ve deney süresince dehidratasyon veya rahatsızlığı işaretleri için günlük izleme ile, hayvanlar dikkat edin. Not: Kilo kaybı hızla maksimum izin verilen ağırlık kaybı CCAC öneriler yaklaşım olabilir. Bu çoğunlukla dehidratasyon türetilmiş için, kilo kaybı dehidratasyon sınırlamak laktatlanmış Ringer çözeltisi uygulanması için bir gösterge olarak kullanılır. Uygun olarak sağlık sorunları üzerinde tesis veteriner danışın emin olun. </li></ol> 2. CoDokular llecting ve DNBS Engelliler Fareler histolojik hasarı değerlendirilmesi <ol><li> DNBS ile denemeden sonra arzu edilen bir zaman noktasında, yeterli oksijen ile takviye edilmiş bir anestezi bölmesi içerisinde izofluran ile doz aşımı ile hayvanlar ötenazi. Hiçbir yükselen veya göğüs düşen görüldüğü kadar hayvan gözlemlemek ve palpe kalp atışı var. Onay hayvan doğru servikal dislokasyon ayak tutam veya korneanın dokunma için bir yanıt, yokluğu ile kurban edilmiştir. </li><li> Karın boşluğu açın ve tüm kalın bağırsak kaldırın. Uzunlamasına bağırsak açın, makroskopik mukozal ülser farelerde kolon (farelerde 2-3 cm) en uzak ucundan itibaren yaklaşık olarak 5-6 cm proksimal dikkat edilmelidir. Not: İsterseniz kalın bağırsak çıkardıktan sonra, makroskopik hasar puanları değerlendirmek. Kontrol hayvanların anatomik konuma karşılık gelen kolon segmentleri toplayın. Not: makroskopik hasar puanları için doku puanlama bireyler olmalıdırTedavi gruplarının kimliğine kör. Şiddeti ve ülserasyon ölçüde (0-10), ya da yokluğunda ishal varlığında (0 ya da 1), adezyonlar (0, 1, ya da 2) ve maksimal kolonik duvar kalınlığı için puan ile özetlenebilir: Aşağıdaki veya benzer kriterler kullanılarak doku bölümleri Skor 11 milimetre. </li><li> 0.5 cm bölümler maksimal makroskopik hasar sitesine proksimaline toplayın. Daha sonra ek bileşen miyeloperoksidaz (MPO) aktivitesi (nötrofil infiltrasyonu bir ölçüsü) değerlendirmek ve histolojik analiz için% 10 nötr tamponlu formalin içinde diğer bölümü yerleştirmek için sıvı azot içinde bir 0.5 cm bölüm dondurma. Not: miyeloperoksidaz deney kadar 1 ay boyunca -80 ° C &#39;de muhafaza edilebilir için donmuş dokular çekin. </li><li> Adım 2.3 histolojik analiz için toplanan dokular gecede formalin düzeltmek ve daha sonra% 70 etanol ile yıkayın izin verin. Parafin dokuları embed ve istenilen kalınlıkta (3-5 mikron), histolojik puanlama için hemotoksilinle ve eozin (HE) ile leke kesilir. </li&gt; <li> Iki gözlemci, her bir grup için histolojik hasarı puanları belirlemek için, bir ışık mikroskobu altında, her bir hayvandan en az üç doku bölümleri puan yazıldı. Not: histolojik hasar skorları için doku puanlama bireylerin tedavi gruplarının kimliğine kör olmalıdır. Enflamatuar hücre infiltratın ölçüde (0 = yok, 3 = Transmural), mukozal mimari kaybı (0 = yok, 3 = şiddetli), varlığı ya da crypt apseler yokluğu (0-1): Aşağıdaki veya benzer kriterler kullanılarak doku bölümleri Puan ve goblet hücre tükenmesi (0-3). Bu puan 11 toplamı olarak histolojik hasar puanı belirler. </li></ol> 3. DNBS üzerine Miyeloperoksidaz (MPO) Tahlili Sahne Engelliler Bağırsak Dokusu <ol><li> Adım 2.3 &#39;de elde edilen 0.5 cm kolon segmentlerinde Deneyi MPO aktivitesi. MPO homojen hale getirme tamponunda dokular 50 mg kolon segme vermek üzere (50 mM potasyum fosfat tamponu içinde% 0.5 heksadesiltrimetil-amonyum bromür (pH 6.0)) homojenizehomojenizasyon tamponu süspansiyonu nt / ml. </li><li> 10,000 x g, 2 dakika boyunca 4 ° C &#39;de 1 ml kısımlar ve santrifüj içine homojenize çözeltisi kısım. </li><li> O-dianisidinedihydrochloride 0.167 mg / ml ve bir küvet içinde,% 0.0005, hidrojen peroksit içeren 2.9 ml 50 mM fosfat tampon maddesi (pH 6.0) ile her bir kısım 100 ul karıştırın. </li><li> 460 nm&#39;de bir spektrofotometre kullanılarak emme oranını ölçmek. Not: MPO aktivitesi, oda sıcaklığında, 2 H, H 2 O O 2 1 umol / dak bozundurucu enzim miktarı olarak tanımlanır ve doku mg başına birim olarak ifade edilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Per&#353;e, M., Cerar, A., Biotechnol, J. .. . B. i. o. m. e. d. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks. , (2012).</li><li>Ghia, J. E., Blennerhassett, P., Deng, Y., Verdu, E., Khan, W., Collins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+inflammatory+bowel+disease+in+a+mouse+model+of+depression.">Reactivation of inflammatory bowel disease in a mouse model of depression.</a> Gastroenterology. 136 (7), 2280-2288 (2009).</li><li>Reber, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+animal+models+of+inflammatory+bowel+disease-an+update+on+the+role+of+the+hypothalamo-pituitary-adrenal+axis.">Stress and animal models of inflammatory bowel disease-an update on the role of the hypothalamo-pituitary-adrenal axis.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (1), 1-19 (2012).</li><li>Qiu, B., Vallance, B., Blennerhassett, P., Collins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+CD4++lymphocytes+in+the+susceptibility+of+mice+to+stress-induced+reactivation+of+experimental+colitis.">The role of CD4+ lymphocytes in the susceptibility of mice to stress-induced reactivation of experimental colitis.</a> Nat. Med. 5 (10), 1178-1182 (1999).</li><li>Boyer, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myenteric+plexus+injury+and+apoptosis+in+experimental+colitis.">Myenteric plexus injury and apoptosis in experimental colitis.</a> Auto. Neurosci. Basic Clin. 117 (1), 41-53 (2005).</li><li>Saunders, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noradrenergic+and+cholinergic+neural+pathways+mediate+stress-induced+reactivation+of+colitis+in+the+rat.">Noradrenergic and cholinergic neural pathways mediate stress-induced reactivation of colitis in the rat.</a> Auto. Neurosci. Basic Clin. 124 (1-2), 56-68 (2006).</li><li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calpain+inhibitor+I+reduces+colon+injury+caused+by+dinitrobenzene+sulphonic+acid+in+the+rat.">Calpain inhibitor I reduces colon injury caused by dinitrobenzene sulphonic acid in the rat.</a> Gut. 48 (4), 478-488 (2001).</li><li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melatonin+reduces+dinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+colitis.">Melatonin reduces dinitrobenzene sulfonic acid-induced colitis.</a> J. Pineal Res. 30 (1), 1-12 (2001).</li><li>Innis, S., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+lipids+in+early+development+and+intestinal+inflammatory+disease.">Dietary lipids in early development and intestinal inflammatory disease.</a> Nutr. Rev. 65, S188-S193 (2007).</li><li>Innis, S. M., de La Presa Owens, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fatty+acid+composition+in+pregnancy+alters+neurite+membrane+fatty+acids+and+dopamine+in+newborn+rat+brain.">Dietary fatty acid composition in pregnancy alters neurite membrane fatty acids and dopamine in newborn rat brain.</a> J. Nutr. 131 (1), 118-122 (2001).</li><li>Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mundra+H.,Innis+S.M.+Intestinal+responsiveness+to+experimental+colitis+in+young+rats+is+altered+by+maternal+diet.">Mundra H.,Innis S.M. Intestinal responsiveness to experimental colitis in young rats is altered by maternal diet.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 289, 13-20 (2005).</li><li>Sanovic, S., Lamb, D. P., Blennerhassett, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Damage+to+the+enteric+nervous+system+in+experimentalcolitis.">Damage to the enteric nervous system in experimentalcolitis.</a> Am. J. Pathol. 155 (4), 1051-107 (1999).</li><li>Vilaseca, J., Salas, A., Guarner, F., Rodriguez, R., Martinez, M., Malagelada, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fish+oil+reduces+progression+of+chronic+inflammatory+lesions+in+a+rat+model+of+granulomatous+colitis.">Dietary fish oil reduces progression of chronic inflammatory lesions in a rat model of granulomatous colitis.</a> Gut. 31, 539-544 (1990).</li><li>Andoh, A., Tsujikawa, T., Ishizuka, I., Araki, Y., Sasaki, M., Koyama, S., Fujiyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-3+fatty+acid-rich+diet+prevents+early+response+of+interleukin-6+elevation+in+trinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+enteritis.">N-3 fatty acid-rich diet prevents early response of interleukin-6 elevation in trinitrobenzene sulfonic acid-induced enteritis.</a> Int. J. Mol. Med. 12, 721-725 (2003).</li><li>Barros, K. V., Xavier, R. A., Abreu, G. G., Martinez, C. A., Ribeiro, M. L., Gambero, A., Carvalho, P. O., Nascimento, C. M., Silveira, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soybean+and+fish+oil+mixture+increases+IL-10,+protects+against+DNA+damage+and+decreases+colonic+inflammation+in+rats+with+dextran+sulfate+sodium+(DSS)+colitis.">Soybean and fish oil mixture increases IL-10, protects against DNA damage and decreases colonic inflammation in rats with dextran sulfate sodium (DSS) colitis.</a> Lipids Health Dis. 9, 68 (2010).</li><li>Hekmatdoost, A., Wu, X., Morampudi, V., Innis, S. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+oils+modify+the+host+immune+response+and+colonic+tissue+damage+following+Citrobacter+rodentium+infection+in+mice.">Dietary oils modify the host immune response and colonic tissue damage following Citrobacter rodentium infection in mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 304 (10), 917-928 (2013).</li><li>Innis, S. M., Dai, C., Wu, X., Buchan, A. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perinatal+lipid+nutrition+alters+early+intestinal+development+and+programs+the+response+to+experimental+colitis+in+young+adult+rats.">Perinatal lipid nutrition alters early intestinal development and programs the response to experimental colitis in young adult rats.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 299 (6), 1376-1385 (1152).</li></ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Bu protokol açıklanan DNBS IBD modeli çeşitli yönlerini incelemek için kullanılabilir değerli, ucuz ve tekrarlanabilir kolit modelidir. Sıçan veya intrarektal farelere verildiği zaman, DNBS polimorfonükleer hücrelerin infiltrasyonu transmural ve baskın NF-KB-bağımlı Th1 aktivasyonu dahil, çeşitli histolojik özellikleri açısından insan Crohn hastalığı benzeyen, kolon enflamasyonun ve doku hasarının önemli bir derecede neden olur. Bu model, stres, depresyon, ve diy...

İnflamatuar barsak hastalığı (IBD), ishal, kilo kaybı, ve karın ağrısı semptomları ile sonuçlanan, gastro-intestinal (GI) sistemi içinde, kronik tekrarlayan bir inflamasyon ile karakterize edilir. Ülseratif kolit (UC) ve Crohn Hastalığı (CD) IBD iki biçimleridir ve GI sistemi içinde inflamasyon konumu ile ayırt edilebilir. UC hastalarda, tipik olarak, rektum iltihabı içerir ve sadece yüzeysel mukozayı etkileyen değişken bir oranda için kolon kadar bitişik olarak uzanır. Bu ağırlıklı olarak ileum ve çekum etkiler, ancak aksine, CD, GI sisteminin herhangi bir kısmını etkileyebilir. Transmural inflamasyon sıklıkla granülomlar ile ilişkili ve (fistülizan) hastalığı striktüre (fibrostenotik) ve / veya delici lider olarak CD sık tezahür eder. IBD etiyolojisi zor olmakla birlikte, iyi İBH bilgisayarlar arasında bağışıklık sistemi, genetik yatkınlık ve yanıtlayanların etkileşimler içeren multifaktöriyel olduğu kabul edilmektedirçevre ve mikrobiyal faktörlerle için ses. Bugüne kadar, IBD farklı model UC ve CD karakteristik çeşitli klinik ve histolojik bağışıklık tepkilerini gösterdikleri önerilmiştir. En yaygın olarak kullanılan model, genetik olarak tadil edilmiş farelerin (IL-2, IL-10, SAMP / Yit), enfeksiyon kaynaklı modelleri (Citrobacter rodentium, Salmonella typhimurium), adoptif transfer modeller (CD45 + RB yüksek, SCID farelere CD62L + hücre transferi) içerir ve kimyasal olarak indüklenen kolit modeli (Dekstran Sülfat Sodyum (DSS), trinitrobenzen sülfonik asit (TNBS) ve dinitrobenzen sülfonik asit (DNBS)). Düşük maliyet ve hastalıkların hızlı başlaması nedeniyle, kimyasal modeller IBD çeşitli yönlerini çalışma için çok değerli olarak kabul edilir. Listelenen kimyasal kolit modellerin her İBH onların, klinik immünolojik ve histopatolojik alaka bazı yönlerden avantajları yanı sıra sınırlamaları vardır. DSS coli ikna etmek için kullanılan en yaygın kimyasal yöntemlerden biridirkemirgenlerde 1 tis. % 3-10 DSS (MW: 42 kDa) uygulanması farelerin içme suyu içinde 7-10 gün boyunca semptom ve kilo kaybı, kan ishal, kolon kısalması, mukozal ülserasyon ve nötrofil infiltrasyon dahil kolit belirtileri neden olabilir. Bu model, ilaç tarama çalışmaları, hem de epitelyal rejenerasyon, mukozal homeostazı ile ilgili bağışıklık sisteminde etki ve bağırsak displazi ve adenokarsinoma gelişimi teşvik inflamasyonun rolünü mekanizmalarını için özellikle yararlıdır. Bazı derecesi ölçüde değişim ile sonuçlanan, farklı hayvan tesislerinde kolit başlatmak için gerekli DSS konsantrasyonu yanı sıra, fareler tarafından tutarsız su emme varyasyon ve DSS böylece tutarsız maruz kalma gibi DSS modeline dezavantajları, ve söz konusudur kolonda mukozal hasar ve ülserasyon dağıtımı. Tüm bu özellikler sonuçların heterojen yol ve çalışmalar fr çapında sonuçlarını karşılaştırmak yeteneğini sınırlayabilirom farklı araştırma grupları. DSS modele alternatif kolit hapten kaynaklı DNBS veya TNBS modelleri. Bu model, mukozal maddeleri DNBS ya da etanol içinde değişen konsantrasyonlarda seyreltildi TNBS, duyarlı rektal instilasyon kullanmaktadır. Etanol idaresi lamina propria içine DNBS veya TNBS&#39;nin nüfuz sağlamak için kolon mukoza engelini kırmak için bir ön koşuldur. DNBS / TNBS ardından böylece doğuştan gelen ev sahibi ve adaptif bağışıklık tepkileri tetikleyen İmmünojenik haline lokalize kolon ve bağırsak mikrobiyal proteinlerin haptenize olacaktır. Genel olarak, bu model şiddetli ve bazen kanlı ishal, kilo kaybı ve bağırsak duvarı kalınlaştırmanın ancak belirtileri kullanılan kemirgen türü, hem de zamanlaması, doz ve DNBS maruz kalma veya kullanılan TNBS derecesine bağlı olarak değişiklik ile ilişkili çalışma. Sıçanlar ve fareler arasında önemli ayrımlar daha düşük satın alma ve yönetim kurulu için maliyet yanı sıra Lowe faydaları ile dikkat edilmelidirin vivo tedavinin başına hayvan maliyetlerin düşürülmesi için r beden kitle. Bu daha kırılgan ve duyarlı hayvanlar hızlı bir şekilde insani bir son nokta ulaşabilir farelerde kolit daha hızlı ve şiddetli tabii ki, karşı koymak gerekir. Bağırsak iltihabı, ilk artan epitel geçirgenliği, mukoza içine nüfuz mikrobiyal konak proteinlerin haptenization, hasarlı mukoza içine nötrofil, makrofaj ve Th1 T lemfositlerinin infiltrasyonu ile sonuçlanan tüm bu yol açan, bağırsak epitelial hücrelerine etanol neden olduğu hasarların sonuçları. DNBS ile karşılaştırıldığında, TNBS örneğin sodyum ve potasyum hidroksit gibi bazlar ile temas üzerine, bir patlama riski teşkil edebilir, son derece oksidatif özellikleri nedeniyle tehlikeli bir kimyasal olarak kabul edilmektedir. Bu nedenle DNBS anda kolit başlatmak için TNBS&#39;nin üzerinde kimyasal bir tercih edilen seçenek olarak kabul edilir. Kemirgenlerde, DNBS kolit Follo çalışma için en uygun yöntemlerden biri olarak kabul edilirkanat İBH hastalığı nitelemeler ilişkili: <ol><li> Depresyon ve kolit reaktivasyonu: Bu İBH hastalarında stres, anksiyete ve depresyon sıklıkla hastalığın nüks ile ilişkili olduğu gösterilmiştir. DNBS kolit farelerde kolit yeniden aktive edilmesi üzerine, depresyon ve sonuçları rolünü incelemek için uygun bir modeldir. Bu yöntem, genellikle 6-8 hafta içinde fareler bırakarak kolit çözünürlüğü ardından DNBS kolitin ilk uyarılmasını içerir. Daha sonra fareler DNBS 2 bir subcolitic doz ile yükleme yoluyla kolit yeniden aktivasyonu için bunların test edilmesi, ardından depresyon oluşturmak için bu tip rezerpin gibi depresyon neden olan ajanlar ile ya da koku bulbectomy ile tatbik edilmektedir. </li><li> Stres ve kolit reaktivasyonu: Stres İBH patogenezinde bağlantılı olan diğer bir önemli çevresel faktör olduğunu. Kronik stres ve kemirgen Yeryüzündeki semptomların başlangıcı arasında güçlü bir ilişki olduğunu kanıtlar giderek artan bir vücut varinsan ve insan olmayan primatlarda 3 yanı sıra var. DNBS kolit fareler ve sıçanlarda kolit stres ilişkili reaktivasyonunu çalışmak için iyi bir modeldir. Yöntem, genellikle depresyon yerine dışında depresyon için yukarıda belirtildiği gibi benzer bir şekilde kullanılır, hayvanlar ve bu gibi sonik sınırlandırılmış stres 4 gibi stres maruz kalmaktadır. </li><li> Nörojenik iltihap: Bazı çalışmalar hayvan modellerinde ve IBD olan hastalardan alınan doku örneklerinde görüldüğü gibi enterik sinir sistemi (ENS) yapısı ve fonksiyonu, geçici veya kalıcı değişiklikler ya tanımlamışlardır. DNBS ENS 5 üzerinde iltihaplanma etkilerini araştırmak ve noradrenerjik ve kolinerjik sinir yolları 6 hem de çalışmak için iyi bir modeldir. </li><li> Yaralanma tamir mekanizmaları: IBD patogenezi sırasında, bu reaktif oksijen türleri (ROS), nitrik oksit (NO), hücreler arası yapışma molekülü 3 (ICAM-3) ve P-selektin gibi ev sahibi türevli yaralanma aracılar tüm p gösterilmiştirbağırsak epitel bozulması bir rol yatıyordu. DNBS bu aracıların up-regülasyonu yanı sıra seçici uyuşturucu veya inhibitörleri 7,8 ile düzenlenir onarım mekanizmaları nedeniyle yaralanmalara incelemek için mükemmel bir model. </li><li> Transmural enflamasyon: DNBS yukarıda belirtilen uygulamalara ilave olarak, model aynı zamanda bağırsak transmural enflamasyon, CD&#39;li hastalardan bulunan klasik bir özelliği çalışma uygulanabilir. DNBS ve TNBS ile indüklenen kolit, her ikisi de T-hücresi bağımlı bağışıklık mekanizmaları incelemek için, bu model, özellikle faydalı bir hale getirir kolon mukozası içine, lenfositlerin önemli bir infiltrasyonu ile ilişkilidir. </li></ol> DSS modeli ile karşılaştırıldığında, DNBS ile TNBS ile indüklenen kolit avantajlar arasınnda, düşük maliyet, kolit hızlı bir gelişme (ülser çoğunlukla yeniden üretilebilmekte ve iltihap göstermek için 1-3 gün gerektirir) ve distal kolon tutarlı lokalize hasar bulunmaktadır. Ancak sakıncaları bir için bir gereklilikteknik uzmanlık, DNBS / TNBS dozunun optimizasyonu, ve rektal uygulama için anestezi için ihtiyaç daha yüksek düzeyde. Bu metodolojik yazıda (SO) bitkisel yağlar, papağanyemi yağı kullanılarak sıçanlarda DNBS indüklediği kolit için kolon mukoza yanıtı değiştiren on n-6 ve n-3 çoklu doymamış yağ asitlerinin değişik konsantrasyonlarda etkilerini inceledi ve kanola yağı, (CO) ve balık yağı (FO). Bu, n-6 ve n-3 yağ asitleri, hücre zarı phosopholipids 9 asil parçalar olarak oynadıkları rol bağırsak iltihaplı hastalıkların önemli aracılar olduğu gösterilmiştir. N-6 yağ asitleri proenflamatuar potansiyel aksine, yeterince yüksek alımı, n-3 yağ asitleri, potansiyel olarak güçlü anti-enflamatuar maddelerdir. N-3 yağ asitlerinin anti-inflamatuar etkileri proinfl değiştirilmesi yoluyla dolaylı olarak arakidonik asit metabolizma ve önleme, bir alt-tabaka olarak eicosanoid arakidonik asit yerine doğrudan aracılık ederammatory gen ekspresyon ve hücre sinyal. N-3 yağ asitleri, aynı zamanda, resolvins anti-iltihap aracılarının bir aile neden olmaktadır. N-3 yağ asitlerinin yüksek alımı proenflamatuar eikosanoidler, sitokinler, kemokinler, reaktif oksijen türleri ve yapışma moleküllerinin ifade üretiminde bir azalma ile ilişkilidir. Bu çalışmada fareler ile, yağ asitleri dışındaki tüm besinler aynı ad libitum diyetler beslenmiştir yağ,% 20 SO, 20% CO veya% 18 balık yağı artı% 2 aspur yağı (FO) 10-11 bir yüzde enerji olarak . Günlük enerjisinin bir yüzdesi olarak, SO diyet &lt;% 0,06 α-linolenik asit (ALA) ve hiçbir eikosapentaenoik asit (EPA) ve dokosaheksaenoik asit (DHA) olan,% 15 linoleik asit (LA) sağlanan, CO diyet 4.2 oldu % LA ve ALA% 1.9 no EPA veya DHA ile ve FO diyet% 1.4 EPA, DHA% 4.9,% 0.32 LA, ALA ve% 0.12 verdi. Üç hafta lipid diyetler başlandıktan sonra, fareler, intrarektal DNBS ya da% 50 etanol verilir ve 5 gün sonra kurban edilmiştir. Inflammatory tepki kilo kaybı, histolojik hasar skorları ve doku myeloperoksidaz aktivitesinin değerlendirilmesi ile değerlendirildi.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="627">
	<colgroup>
		<col />
		<col /> 
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">1 mL syringe</td>
			<td style="width:121px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">309659</td>
			<td style="width:167px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">19 gauge needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing PE-50</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427517</td>
			<td>for intra-rectal administration in mice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing PE-90</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427519</td>
			<td>for intra-rectal administration in rat</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNBS</td>
			<td>MP Bio</td>
			<td>150959</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">tear gel</td>
			<td>Novartis</td>
			<td>63601662596</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10% Formalin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>5F93-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">warming pad</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>TPZ-0510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A-962.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">hexadecyltrimethyl-ammonium bromide</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>H5882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium phosphate buffer solution</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>79628-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">O-dianisidine dihydrochloride</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>D3252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">30% H2O2</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>31642</td>
			<td>hydrogen peroxide</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spectrophotometer</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>Benchmarker Plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Light Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Image.Z1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Data analysis software program </td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td style="width:119px;"> GraphPad Prism Software Version 4.00 </td>
			<td><a href="http://www.graphpad.com/">San Diego California USA, www.graphpad.com</a></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dnbs/tnbs colitis models: providing insights into inflammatory bowel disease and effects of dietary fat

Crohn hastalığı ve ülseratif kolit de dahil olmak üzere inflamatuvar bağırsak hastalığı (IBD), ve uzun bir genetik olarak bağlantılı olmuştur ve daha yakın zamanda mikrobiyal ajanlara ve çevresel bağışıklık tepkileri barındırması. Dinitrobenzen sülfonik asit (DNBS) kaynaklı kolit böyle bir stres ve beslenme, potansiyel tedavilerin etkileri ve mekanizmaları yatan bağırsak iltihabı ve mukozal hasarı gibi IBD ilişkili çevresel tetikleyiciler patogenezi çalışma sağlar. Bu yazıda, sıçanlarda DNBS kaynaklı kolit kolon mukozal inflamatuar yanıt üzerine diyet, n-3 ve n-6 yağ asitlerinin etkileri araştırıldı. Bütün sıçanlar [aspur yağı (SO), kanola yağı (CO), ya da balık yağı (FO)] üç hafta önce, maruz kalma DNBS intrarektal için yağ asitlerinin farklı hariç aynı diyetler beslenmiştir. Intrarektal etanol verilen Kontrol sıçanları DNBS-muamele edilmiş fareler ise beslenen lipid diyetler tüm los, 5 günlük çalışma boyunca kilo almaya devam ettiFO ve CO beslenen fareler, 48 saat ve 72 saat SO beslenen fareler tarafından önemli kilo kaybı gösteren ile t ağırlık. Kilo alımı 72 saat sonrası DNBS sonra tekrar başladı ve 5 gün sonrası DNBS tarafından, FO grup SO veya CO grupları daha yüksek vücut ağırlığı vardı. Kolon kesitleri 5 gün sonrası DNBS tedavi fokal ülserasyon, crypt yıkım, goblet hücre tükenmesi ve diyet gruplar arasında şiddeti farklıydı hem akut ve kronik inflamatuar hücrelerin mukozal infiltrasyon toplandı. SO beslenen grup CO ardından en ağır hasarı gösterdi, ve FO doku hasarının hafif derecesini gösterdi grupları beslenir. Benzer şekilde, myeloperoksidaz (MPO) aktivitesi, nötrofil aktivite belirteci FO beslenen fareler anlamlı düşük MPO aktivitesi olan, SO CO beslenen farelerde, ardından anlamlı olarak yüksek bulundu. IBD patogenezinde diyetin etkisini belirlemek için, bu protokolde tarif edildiği gibi bu sonuçlar DNBS kaynaklı kolit kullanımını göstermektedir.

DNBS ile sıçan (Sprague-Dawley) veya farelerde (C57BL / 6) Challenge tipik bazen dışkıda kan varken, geçici kilo kaybı ve ishal sonuçları. Ancak, bu tür genetik, beslenme ve intestinal mikrobiyota gibi faktörler DNBS indüklenen duyarlılık değiştirebilir. Bu nedenle, hayvan deneylerinde dahil lokal olarak türetilmiş ya da bir hayvan tedarikçiden sipariş ya da, aynı kurumdan olmalıdır. Tüm hayvanlar dikkatle kilo kaybı ve kolit sırasında uğradığı sıkıntı belirtilerinin derecesi için izle...

Watch this Scientific Journal Video about DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat at JoVE.com

DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

DNBS / TNBS indüksiyonlu kolit bir alternatif ve iltihabik barsak hastalığı patobiyolojisini incelemek için pahalı olmayan yöntemi sunmaktadır. Bu yazıda tartışılan protokolü farelerde ve sıçanlarda kolit başlatmak için DNBS başarılı uygulama özetliyor ve bir iyice konak-aracılı bağırsak yanıtları çalışma sağlar.

DNBS / TNBS kolit Modelleri: Koliti içine Trendleri ve Diyet Yağ Etkileri sağlanması

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently ...

dnbstnbs-colitis-models-providing-insights-into-inflammatory-bowel

Research

JoVE Journal

Medicine

46.8K Görüntüleme.  BC Children's Hospital.  DNBS / TNBS indüksiyonlu kolit bir alternatif ve iltihabik barsak hastalığı patobiyolojisini incelemek için pahalı olmayan yöntemi sunmaktadır. Bu yazıda tartışılan protokolü farelerde ve sıçanlarda kolit başlatmak için DNBS başarılı uygulama özetliyor ve bir iyice konak-aracılı bağırsak yanıtları çalışma sağlar. 

Video: DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues as well as altered cytokine homeostasis. The innate immune system plays a crucial role in recognizing pathogens and other endogenous danger stimuli. One of the major cytokines released by innate immune cells is Interleukin (IL)-1. Therefore, we utilize a whole blood stimulation assay in order to measure the secretion of inflammatory cytokines and specifically of the pro-inflammatory cytokine IL-1&beta; 1, 2, 3.
Patients with genetic dysfunctions of the innate immune system causing autoinflammatory syndromes show an exaggerated release of mature IL-1&beta; upon stimulation with LPS alone. In order to evaluate the innate immune component of patients who present with inflammatory-associated pathologies, we use a specific immunoassay to detect cellular immune responses to pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), such as the gram-negative bacterial endotoxin, lipopolysaccharide (LPS). These PAMPs are recognized by pathogen recognition receptors (PRRs), which are found on the cells of the innate immune system 4, 5, 6, 7. A primary signal, LPS, in conjunction with a secondary signal, ATP, is necessary for the activation of the inflammasome, a multiprotein complex that processes pro-IL-1&beta; to its mature, bioactive form 4, 5, 6, 8, 9, 10.
The whole blood assay requires minimal sample manipulation to assess cytokine production when compared to other methods that require labor intensive isolation and culturing of specific cell populations. This method differs from other whole blood stimulation assays; rather than diluting samples with a ratio of RPMI media, we perform a white blood cell count directly from diluted whole blood and therefore, stimulate a known number of white blood cells in culture 2. The results of this particular whole blood assay demonstrate a novel technique useful in elucidating patient cohorts presenting with autoinflammatory pathophysiologies.

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&amp;#946; using a Whole Blood Stimulation Assay

We describe a simple immunoassay to measure the production of pro-inflammatory cytokines, such as IL-1 beta production, in patients presenting with autoinflammatory phenotypes. By activating cells in whole blood cultures with pathogen-associated molecular patterns, specifically with lipopolysaccharide, cytokine secretion can be conveniently evaluated in whole blood supernatants.

Tam Kan Stimülasyon Testi kullanarak Pro-inflamatuar sitokin IL-1β Doğru ve Basit Ölçme

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Tıp

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are associated with obesity, though the precise underlying mechanisms that contribute to the disease are currently being delineated.2,3 Several small animal models of obesity have been developed and are employed in a variety of studies.4 A critical component to these experiments involves the collection of regional and/or total animal fat content data under varied conditions.
Traditional experimental methods available for measuring fat content in small animal models of obesity include invasive (e.g. ex vivo measurement of fat deposits) and non-invasive (e.g. Dual Energy X-ray Absorptiometry (DEXA), or Magnetic Resonance (MR)) protocols, each of which presents relative trade-offs. Current invasive methods for measuring fat content may provide details for organ and region specific fat distribution, but sacrificing the subjects will preclude longitudinal assessments. Conversely, current non-invasive strategies provide limited details for organ and region specific fat distribution, but enable valuable longitudinal assessment. With the advent of dedicated small animal X-ray computed tomography (CT) systems and customized analytical procedures, both organ and region specific analysis of fat distribution and longitudinal profiling may be possible. Recent reports have validated the use of CT for in vivo longitudinal imaging of adiposity in living mice.5,6 Here we provide a modified method that allows for fat/total volume measurement, analysis and visualization utilizing the Carestream Molecular Imaging Albira CT system in conjunction with PMOD and Volview software packages.

Fat content analysis is routinely conducted in studies utilizing murine obesity models. Emerging methods in small animal CT imaging and analysis are providing for longitudinal detail rich fat content analysis. Here we detail step by step procedures for performing small animal CT imaging, analysis, and visualization.

Segmentasyon ve Mürin Obezite Modelleri Yağ Hacimleri ölçümü X-ray Bilgisayarlı Tomografi Kullanımı

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson's Disease

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease (PD) pathogenesis are less understood. Gene-environment interaction models have utility in unmasking the impact of specific cellular pathways in toxicity that may not be observed using a solely genetic or toxicant disease model alone.&#160;To evaluate if distinct LOX isozymes selectively contribute to PD-related neurodegeneration, transgenic (i.e. 5-LOX and 12/15-LOX deficient) mice can be challenged with a toxin that mimics cell injury and death in the disorder.&#160;Here we describe the use of a neurotoxin, 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP), which produces a nigrostriatal lesion to elucidate the distinct contributions of LOX isozymes to neurodegeneration related to PD. The use of MPTP in mouse, and nonhuman primate, is well-established to recapitulate the nigrostriatal damage in PD.&#160;The extent of MPTP-induced lesioning is measured by HPLC analysis of dopamine and its metabolites and semi-quantitative Western blot analysis of striatum for tyrosine hydroxylase (TH), the rate-limiting enzyme for the synthesis of dopamine. To assess inflammatory markers, which may demonstrate LOX isozyme-selective sensitivity, glial fibrillary acidic protein (GFAP) and Iba-1 immunohistochemistry are performed on brain sections containing substantia nigra, and GFAP Western blot analysis is performed on striatal homogenates.&#160;This experimental approach can provide novel insights into gene-environment interactions underlying nigrostriatal degeneration and PD.

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson&#039;s Disease

Lipoxygenase (LOX) isozymes can generate products that may increase or decrease neuroinflammation and neurodegeneration.&#160;A gene-environment interaction study could identify LOX isozyme-specific effects. Using the 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) model of nigrostriatal damage in two LOX isozyme-deficient transgenic lines allows for comparison of the contribution of LOX isozymes on dopaminergic integrity and inflammation.

Parkinson Hastalığında Maskeyi Düşürme Duyarlılık Mekanizmalarına Gen-Çevre Etkileşim Modelleri

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

Mikro-Bilgisayarlı Tomografi ile Çıplak Fareler içine İnsan Yağ Enjeksiyonu Canlılığına Değerlendirilmesi

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Therapeutic Effectiveness of a Dietary Supplement for Management of Halitosis in Dogs

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized placebo-controlled crossover clinical evaluation, we assessed&#160;the effectiveness of a dedicated dietary supplement to improve chronic halitosis in 32 dogs of different breeds and ages. This protocol describes how to evalute the presence of oral volatile suphur compunds, e.g. methyl mercaptan, hydrogen sulfide and dimethyl sulfide, by means of a portable gas chromatograph device coupled with a syringe, which was used to collect the breath, and a dedicated software, which allows the operator to monitor each compound concentration during each measurement, in a relatively short time (8 min).
A significant modification of halitosis parameters was observed after 30 days since the beginning of treatment (p &#60;0.05), while a long-lasting effect was still observed even 20 days after the suspension of the treatment. Portable gas chromatograph, which is also widely used in clinical practice, can be therefore used to confirm&#160;and control halitosis in humans and animals. Even though human and animal species present some differences,&#160;this innovative and alternative therapy for halitosis management might be extended to human clinical practice as an adjuvant dietary approach.

We describe a simple approach for diagnosis of halitosis in dogs as well as a dietary approach for its management. This protocol may be extended to the management of halitosis in humans in the near future.

Köpeklerde Ağız kokusunun Yönetimi için Diyet Supplement Terapötik Etkinliği

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized ...

Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to induce reflux of gastric contents, duodenal contents or mixed contents. Surgical procedures and general principles have been described in detail. A researcher with surgical experience should be able to grasp the technique after a short period of practice. After surgery, most mice can survive and develop reflux esophagitis similar to that in humans. However, it should be noted that histological differences between mouse and human esophagus are the inherent limitations of these surgical models. If used for research on Barrett&#8217;s esophagus and adenocarcinoma, these procedures may need to be combined with genetic modifications.

This article demonstrates surgical procedures of gastroesophageal reflux with mice. These models are useful tools for research on mechanisms and treatment of gastroesophageal reflux disease and potentially Barrett&#8217;s esophagus and esophageal adenocarcinoma.

Fare ile Gastroözofageal Reflü Cerrahi Modelleri

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to ...

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying tissue compartments, restricting the transport of smaller molecules across the epithelium and almost completely prohibiting epithelial macromolecular transport. This selectivity is determined by the mucous gel layer, which limits the transport of lipophilic molecules and both the apical receptors and tight junctional protein complexes of the epithelium. In vitro cell culture models of the epithelium are convenient, but as a model, they lack the complexity of interactions between the microbiota, mucous-gel, epithelium and immune system. On the other hand, in vivo assessment of intestinal absorption or permeability may be performed, but these assays measure overall gastrointestinal absorption, with no indication of site specificity. Ex vivo permeability assays using &#34;intestinal sacs&#34; are a rapid and sensitive method of measuring either overall intestinal integrity or comparative transport of a specific molecule, with the added advantage of intestinal site specificity. Here we describe the preparation of intestinal sacs for permeability studies and the calculation of the apparent permeability (Papp) of a molecule across the intestinal barrier. This technique may be used as a method of assessing drug absorption, or to examine regional epithelial barrier dysfunction in animal models of gastrointestinal disease.

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

This protocol describes the use of excised intestinal tissue preparations or "intestinal sacs" as an ex vivo model of intestinal barrier function. This model may be used to assess integrity of both the epithelial barrier and the mucous gel layer at specific intestinal sites in animal models of digestive disease.

Ex Vivo Bağırsak Sacs Gastrointestinal Hastalık Modelleri mukozal geçirgenliği Değerlendirmek için

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

Fare Yumurtalık Yağ Pad içine Transplantasyon

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause severe problems, such as abdominal cramping, bloody diarrhea, and weight loss, in affected individuals. Unfortunately, there is no cure yet, and treatments only aim to alleviate symptoms. Current treatments include anti-inflammatory and immunosuppressive drugs that may cause severe side effects. This warrants the search for alternative treatment options, such as nutritional supplements, that do not cause side effects. Before their application in clinical studies, such compounds must be rigorously tested for effectiveness and security in animal models. A reliable experimental model is the dextran sulfate sodium (DSS) colitis model in mice, which reproduces many of the clinical signs of ulcerative colitis in humans. We recently applied this model to test the beneficial effects of a nutritional supplement containing vitamins C and E, L-arginine, and &#969;3-polyunsaturated fatty acids (PUFA). We analyzed various disease parameters and found that this supplement was able to ameliorate edema formation, tissue damage, leukocyte infiltration, oxidative stress, and the production of pro-inflammatory cytokines, leading to an overall improvement in the disease activity index. In this article, we explain in detail the correct application of nutritional supplements using the DSS colitis model in C57Bl/6 mice, as well as how disease parameters such as histology, oxidative stress, and inflammation are assessed. Analyzing the beneficial effects of different diet supplements may then eventually open new avenues for the development of alternative treatment strategies that alleviate IBD symptoms and/or that prolong the phases of remission without causing severe side effects.

Current treatments of inflammatory bowel diseases (IBD) aim at alleviating disease symptoms but may cause severe side effects. Thus, alternative strategies are being investigated in animal colitis models. Here, we explain how the beneficial effects of diet supplements on clinical IBD signs are analyzed in such a colitis model.

Deneysel Kolit sırasında Bağırsak epitel Bariyer Fonksiyonları Üzerine Ek Beslenme Faydalı Etkileri Analizi

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...