Yazarlar laboratuvar sarf yönetiminde ona yardım için Tammy Esmaili teşekkür etmek istiyorum. AA Alzheimer Hastalığı Araştırma ve Bakım, Tıbbi Bilimler, Edith Cowan University School of Excellence Merkezi&#39;ne Doktora Bursu sahibidir. MC Rotary Kulübü, Perth Doktora finansman desteği alır. AM, GV, KT ve RNM McCusker Alzheimer Araştırma Vakfı tarafından finanse edilmektedir.

1. Sistem Bakım <ol><li> Zebra balığı sürekli filtreleri sirkülasyon sistemi tutulur ve sağlıklı bir su ortamı için gerekli olan su kalitesini korumak için sistem suyu havalandırır edilir. Sirkülasyon sistemi ayrıca aşırı gıda ve balık dışkısı filtrelemeye yardımcı olmaktadır. Farklı şirketlerin zebrafish sistemleri sağlamak ama bizim laboratuvarda, ABD Sucul Habitatlar gelen sistemleri kullanırlar. (: Karanlık ışık) Oda sıcaklığı veya tank sıcaklığı genellikle 26-28,5 ° C ve aydınlatma koşulları 14:10 saattir korunur. Sucul Habitatlar A zebrafish sistemi (örneğin, Tezgahüstü sistemi) maliyetlerini ~ 9.000 USD. İki raflı Bu benchtop sistemi her rafta altı 10 litre, 3 litre oniki ya da yirmi 1.5-litrelik tanklar tutabilir. Balık Çoklu çizgiler (örneğin, transgenik, mutant, vahşi tip) de aynı sistem üzerinde yerleştirilebilir. </li><li> Filtre farklı bir dizi sistem kullanılmaktadır. Tüm tankları PA Sistemimizde, su120 mikron filtre pedi, 50 mikron dış filtre, biyolojik filtre, aktif karbon emilimi filtre ve UV dezenfeksiyon filtresi aracılığıyla sses önce tankın içine geri sirküle ediliyor. De-chlorinated/aged su zebrafish sisteminde kullanılmaktadır. Su en az 48 saat boyunca yaşlanma ile de-klorlu edilebilir. İdeal koşullar altında, su sıcak tutmak için su sirkülasyon pompa ile bir rezervuar tutulur ve de-klorlama hızlandırmak olmalıdır. </li><li> Sistem suyunun pH günlük olarak kontrol edildi ve 6.8 ve 7.5 arasında muhafaza edilmelidir. Gerekli olduğunda, sodyum bikarbonat, pH arttırmak için kullanılabilir. </li><li> Balık tankları düzenli olarak temizlenmelidir. , Bir balık tankı temizlemek bu tanka su akışını kapatmak, geriye eğerek tank tarafından fazla suyu boşaltın ve sistemin dikkatlice depo kaldırmak için. Kir ve yosun tankı ve alt tarafta belirgin olacaktır. </li><li> Temiz bir tanka bölme yerleştirin, ve de-klorlu su (aka Sistemi wa ile doldurmakTer). Dikkatlice bir balık ağı ile bu tankın içine balık aktarın. Kapağını kapatın ve tank ad etiketi aktarın. Dikkatlice sistemi içine temiz tanka yerleştirin ve su beslemesini açın. </li><li> % 70 etanol ile balık ağı, sprey dezenfekte etmek için, su ile durulayın ve tekrar kullanmadan önce kurumasını bekleyin. Kirli tanktan bölmesini çıkarın ve% 70 etanol ile iki parça püskürtün. Musluk suyu ile iyice durulayın ve tank izin ve tekrar kullanmadan önce tamamen kurumasını kafasını karıştırır. </li><li> Sirkülasyon sistemi filtreleri kontrol edilmeli ve bunların düzgün çalışmasını sağlamak için düzenli olarak değiştirilmesi gerekir. Bu filtreler tüm balık tankları için uygun ve temiz su temini sağlamak için düzenli olarak değiştirilmesi gerekir. </li><li> 120 mikron filtre pedi genellikle yeniden yerleştirilebileceğini ya da günlük olarak değiştirilir; yenisi ile değiştirmeden önce cihazın tamamen kullanmak için su akışını doğru konumlandırmak. </li><li> Kapak filtresi haftalık değiştirilmesi gerekir. Dış filtre değiştirmek için, karınca bükerek filtre ünitesi çıkarınBir anahtarı veya ellerle iclockwise. Plastik bir levha veya su dökülmesini önlemek veya absorbe için aşağıdaki havlu yerleştirin. Yenisi ile teneke kutu filtresini değiştirin ve filtre ünitesi geri sistemine sığması, dikkatle ellerini ve bir anahtar gerekirse sıkın. </li><li> Karbon filtresi (her iki hafta) iki haftada bir değiştirilmelidir. Karbon filtre değiştirmek için, bir anahtar ile dikkatlice karbon filtre birimini çıkarın. Kullanılan aktif karbon atın ve yeni aktif karbon ile değiştirin. Karbon tutucu yeniden uyum ve filtre ünitesi içine geri yerleştirin. Sistem içine filtre ünitesine geri takın. Sistemi açın ve suyun filtreye akıyor kontrol edin. Eğer gerekirse, sistem içine filtre takılmadan önce boru içinde kir temizlemek için boru ile bir miktar su yıkayınız. </li><li> Biyolojik filtre her altı ayda bir temizlenmesi gerekir. Bir biyolojik filtre genellikle sirkülasyon sistemi içinde teneke kutu ve karbon filtresi arasında yer almaktadır. Biyolojik filtre, rem değiştirmek içinsisteminden filtre ünitesi ove. Baskı serbest bırakma düğmesine basarak filtre basıncı serbest bırakın. Bir anahtar ile sökün filtresi. Genellikle iki kişi bu adım için gereklidir. Filtre ünitesinin kapağını çıkarın. Su siporax ayırmak için bir elek kap içine filtre içeriği boşaltılır. Not: siporax nitrifikasyon-denitrifikasyon hem gerçekleştirme yeteneğine sahip bir ince gözenekli biyo-filtre medya. </li><li> Siporax çok kirli ise yeni ile değiştirin. Sistem su (de-klorlu su) ile filtre ünitesi doldurun, kapağını kapatın, sistemi ve su kaynağı anahtarına filtre ünitesi döner. Not: Bir acclimated akvaryumda, siporax birkaç nitrifikasyon bakterileri için evde olacak. Bu mikroorganizmalar, bir nitrit başak ardından, ciddi bir amonyak başak neden olabilir akvaryum içerisindeki azot döngüsünü sürdürmek ve biyolojik filtre (kirli siporax) için birincil konut kaldırılması için kritik olan ise new biyolojik filtre (yeni siporax ile) yeniden kurulması. Azot döngüsü bu ara devletlerin Hem Sudaki organizmalar için toksik olabilir ve uygun yanıt değilse zebrafish öldürebilir. Bu nedenle, bu yeni siporax bu mikroorganizmaların hızlı bir repopulation izin vermek için başka zebrabalığı muhafaza sistemi (örneğin, Sucul sistem içinde toplama tankı) içinde bir ikincil biyolojik filtre olması önemlidir. </li><li> UV filtreleri sistemi biyolojik kirleticilerin (bakteriler gibi) kontrol etmek için kullanılır ve her geçen dokuz on ay değiştirilmesi gerekir. UV filtre dezenfeksiyon doz oranı ~ 110 mJ / lamba süresinin başlangıcında cm2 ve doz oranı da o yine de görünse de dünya değiştirmek için gerekli olan, dolayısıyla zamanla azalır olduğu not edilmelidir fonksiyonel. </li></ol> 2. Besleme <ol><li> Zebra balığı larvaları t için 100 mikron kuru gıda (gıda boyutu ile beslenebiliro 300 / yetişkin balık) ya da canlı yem (salamura karides) için 400 mikron. Salamura karides (Artemia sp.) Yumurta yerel evcil hayvan dükkanları mevcuttur ve aşağıda açıklanan basit adımları takip ederek laboratuvar yumurtadan olabilir. <ol class="lalpha"><li> Daha iyi çözünürlük için bir manyetik karıştırıcı üzerinde tuz ile bir behere koyarak yaşlı suda kırmızı deniz tuzu eritin. Alternatif olarak, tuz havalandırma borusu ile havalandırılmasıyla su içinde çözülebilir. Kırmızı deniz tuz mevcut değilse, anlık okyanus tuz aynı zamanda bir kuluçka çözelti olarak kullanılabilir. Salamura karides tuzluluk geniş tolere edebilir, ancak biz 30-35 g / L kırmızı deniz tuzu su bizim salamura karides (10-15 g) çıkar. Not: durumda salamura karides yumurta ardından kapsüle salamura karides de karides kuluçkahane eklemeden önce gruplar halinde &quot;Dekapaj&quot; sonra kullanılabilir yerel evcil hayvan mağazalarında hazır değildir. Bu aynı zamanda evcil hayvan mağazası sık geziler önlemek olabilir. </li><li> Sa ile salamura karides çıkım doldurunlt su ve 1.2 kaşığı / litre &#39;lik bir konsantrasyonda karides yumurta ilave edin. Bir hava pompası ile kuvvetlice çıkım havalandırınız ve ~ 48 saat süreyle kuluçkaya salamura karides yumurta bırakın. Not: Bu un-zenginleştirilmiş artemia besin değeri her saat sonrası kuluçkalık kaybetmek olduğu unutulmamalıdır. Bu nedenle, 24 saat boyunca ya da yumurtadan uygun olabilir veya salamura karides maksimum besin değeri elde etmek için 48 saat boyunca zenginleştirebilir. </li><li> Kuluçka sistemi Atık su çamaşır suyu ile dezenfekte ve daha sonra bertaraf edilmek üzere karantinaya atık eklenir. </li></ol></li><li> Salamura karides toplamak için, hava borusu çıkarın ve kültür ama fazla 10 dakika 4-5 dakika yerleşmek için izin verir. Yumurtadan salamura karides Hatcher altında toplamak. <ol class="lalpha"><li> Çıkım altındaki musluk kullanarak salamura karides toplayın. Un yumurtadan salamura karides yumurta oluşur ilk akış atın. </li><li&gt; atarak sonra un yumurtadan salamura karides, zebrafish yiyecek olarak kullanılacak yumurtadan salamura karides toplamak. </li><li> Bir tuzlu su karidesi koleksiyonu Net (~ 350 mikron naylon mesh) kullanarak, tuzlu su tuzlu karides ayırın. Sistemi su kullanarak bir kabın içine net salamura karides durulayın. </li></ol></li><li> Toplanan tuzlu su karides genellikle oldukça turuncu renk veren kabın altındaki yüksek bir konsantrasyonda mevcuttur. </li><li> Bir pipet veya damlalık / squeezy şişe kullanarak zebrafish için salamura karides besleyin. Dağıtılan gıda miktarı bireysel tanklarının nüfusun büyüklüğüne bağlıdır. Zebrafish için yaygın kabul oranı günlük gıda vücut ağırlığının% 4 almaktır. Bu bazı balık overeating nedeniyle ölebilir gibi muhtemelen, üreme veya canlılığını etkileyen, suda nitrat seviyesini artırabilir olarak Zebrafish overfed asla. <ol class="lalpha"><li> Içine gıda enjekte üzerinesu, aç balık salamura karides yakalamak için yüzebilirsiniz. </li></ol></li><li> Kuru besleme bir Sucul Eko-System / Sucul Habitatlar basit yaylı tabanlı balık yiyecek dağıtıcı kullanılarak yapılabilir. Alternatif olarak, kuru besleme de basit bir kaşık kullanarak gerçekleştirilen ya da bir küçük kaşık bir görünüm vermek için makas ile çapraz bir plastik damlalığı keserek edilebilir. </li></ol> 3. Üreme <ol><li> Işık başlangıcında yetiştirme başlatmak zebrafish. Döllenmiş yumurta tank içi üreme ya da ikili yetiştirme yoluyla elde edilebilir. Depo içi yetiştirme daha emek-verimli ve laboratuvarımızda düzenli embriyo toplama için uygulanan edilirken genler veya mutasyonlar, bireysel balık taranacak olduğunda, ikili ıslahı tercih edilir. </li><li> Depo içi üreme için, depo içi damızlık monte ve ışık başlangıcından sonra akvaryum içine yavaşça bırakın. Alternatif olarak, tank içi ıslah kurulum akvaryum içinde gece boyunca bırakılabilir. </li><li> Lsaçak yaklaşık 15 dakika depo içi damızlık balık tanktan damızlık çıkarmadan ve yumurta toplama öncesi çiftleşmek için izin vermek. </li><li> İkili üreme genellikle beslenmeden sonra afternoon kurulur. </li><li> Üreme tankı kurma ve yaşlı sistemi su ile doldurun. </li><li> Islah tankın zıt taraflarına bir dişi biri erkek aktarın. Dişiler, çünkü onların büyük Göbek erkeği ayırt edilebilir. Onlar kadınlarda daha renkli daha ince ve koyu çünkü Erkeklerde de kadınlarda ayırt edilebilir. Ayrıca, erkekler dişilerden (bkz. Şekil 1) ile karşılaştırıldığında anal yüzgeç daha sarı renge sahip. Ne zaman kadın Zebra balığı yumurtlama borusu (bkz. Şekil 4) için şüphe görünüm. </li><li> Kısa bir süre ışığın başlangıcından sonra ertesi sabah bölücü çıkarın. Embriyoların yeterli sayıda tankın altına yerleştirilir kadar, 20 dakika süre ile veya bozulmamış meydana çiftleşme izin verir. </li><li> Islah sonra,onların tankları balık dönün. Bir süzgeç kullanarak yumurtaları toplayın. </li><li> Sistemi su ile iyice embriyolar yıkayın. </li><li> Aka EM3 (NaCl, 13.7 mM;; KCl, 0.54 mM; MgSO4, 1,0 mM; CaCl 2, 1.3 mM; Na 2 HPO 4, 0.025 mM; embriyo orta süzgeç durulama tarafından Petri kabı embriyolar transfer KH 2 PO 4, 0.044 mM; NaHCO 3, 4.2 mM). </li><li> Embriyolar mikroskop altında görülebilir. Döllenmiş yumurta sonra bir iğne ile bir pipet (bakınız Şekil 3) kullanılarak döllenmemiş yumurta ayrılır. </li></ol> 4. Larva yetiştiriciliği <ol><li> Döllenen yumurtalar, kuluçka (~ 28.5 ° C) 72 saat boyunca larvalar yumurtadan kadar tutulur. </li><li> Şimdi larva özgürce bir ana balık tankına aktarmak için hazır koryon ve yüzme dışında. Larva (kompozisyon açıklanan 5 gün sonrası fertilizasyon (DPF) beslenen gerekir ve embriyo ortamda tutulurBölüm 3, 10) veya sistem su. Larva suyun ~% 50 ya da daha fazla burada günlük olarak değiştirildi yuvarlak yemekleri muhafaza edilebilir. Su değişimi ölü ya da hastalıklı larva ve diğer enkaz kaldırma içermelidir. </li><li> Küçük ölçekli bir siper (300-400 mikron) içeren bir tank içine yavaşça larvaları aktarın. Ölü larva ve hastalıklı kaldırılır ve çok az su mL günlük olarak yavaş yavaş ilave edilmelidir. </li><li> 14 gün sonra, larvalar tank sistem içine rafa olabilir, ve bisiklet suyun küçük bir akım (saniye başına 1-2 damla) ile birlikte verilmektedir. Larvalar büyüdükçe, su akış arttırılabilir. Sürgüler farklı boyutlarda yetişkin balıklar için kullanılması gereken larvaları (örn. bölmesinin boyutu 300-400, 500, 700-750, 1000 mikron) ve normal bir plastik bölmesinin boyutuna bağlı olarak kullanılabilir. </li><li> Embriyoların cinsel olgun yetişkin haline gelmesi için genellikle 3 ay sürer. </li></ol>

<ol>
	<li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+color+preference+in+zebrafish+for+learning+and+memory.">Evaluation of color preference in zebrafish for learning and memory.</a> J. Alzheimers Dis. 28, 459-469 (2012).</li><li>Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+behaviour+and+ecology+of+the+zebrafish,+Danio+rerio.">The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio.</a> Biol. Rev. Camb. Philos. Soc. 83, 13-34 (2008).</li><li>Best, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-associative+learning+in+larval+zebrafish.">Non-associative learning in larval zebrafish.</a> Neuropsychopharmacology. 33, 1206-1215 (2008).</li><li>Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+modulation+of+memory+formation+in+larval+zebrafish.">Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 15468-15473 (2011).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function.">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).</li><li>Gerlai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebra+fish:+an+uncharted+behavior+genetic+model.">Zebra fish: an uncharted behavior genetic model.</a> Behav. Genet. 33, 461-468 (2003).</li><li>Eddins, D., Petro, A., Williams, P., Cerutti, D. T., Levin, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nicotine+effects+on+learning+in+zebrafish:+the+role+of+dopaminergic+systems.">Nicotine effects on learning in zebrafish: the role of dopaminergic systems.</a> Psychopharmacology. (Berl). 202, 103-109 (2009).</li><li>Colwill, R. M., Raymond, M. P., Ferreira, L., Escudero, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+discrimination+learning+in+zebrafish+(Danio+rerio.">Visual discrimination learning in zebrafish (Danio rerio.</a> Behav. Processes. 70, 19-31 (2005).</li><li>Blaser, R. E., Chadwick, L., McGinnis, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+measures+of+anxiety+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Behavioral measures of anxiety in zebrafish (Danio rerio).</a> Behav. Brain Res. 208, 56-62 (2010).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+(Danio+rerio).">A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).</a> THE ZEBRAFISH BOOK. , (2007).</li><li>Delaney, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+interaction+and+distribution+of+female+zebrafish+(Danio+rerio)+in+a+large+aquarium.">Social interaction and distribution of female zebrafish (Danio rerio) in a large aquarium.</a> Biol. Bull. 203, 240-241 (2002).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Kuzey Hindistan&#39;da Ganj Nehri kaynaklanan zebrafish ve Spence ve arkadaşları tarafından incelenir, onların yetişkin ve larva evreleri 2 hem de araştırma daha popüler hale gelmektedir. 3. Zebra balığı, yüksek doğurganlık, bakım kolaylığı, embriyoların optik mesafesi, hızlı embriyonik gelişim ve düşük bakım maliyeti gibi diğer hayvan modelleri üzerinde çeşitli avantajlar sahip. Bunlar genetik manipülasyonu için müsait 6 ve yüksek verimli ilaç eleme 4,5 uygundur. Onların döllenme gelişimsel biyologlar tarafından kendi kullanımı için avantajlı olan dış olduğunu. Bu olumlu özellikleri nedeniyle, zebrafish genetiği 7, farmakolojik 8 ve davranış araştırmaları 9,10 popülerlik kazanmaktadır. Embriyo elde etmek için bir zebrafish imkan ve zebrafish hayvancılık korumak için bir takım zorluklar vardır. Bu yazıda, bu zorlukları ve o ele tecrübelerimizi ve öneriler tarifsistem bakımı için bir protokol, beslenme üreme ve larvaların yetiştirme utline. Sistem bakımı Sağlıklı bir durumda zebrafish korumak için, düzgün işleyen bir akvaryum sistemine temiz bir çevre ile bunları sağlamak için önemlidir. Bu önemli bir kısmı düzenli böylece tüm tanklar uygun su akışı ve temiz su almasını sistemi filtreleri değişiyor. Bu bloke sistemi boruları nedeniyle her bir tank için bisiklet su kaynağının yetersizliği önlemek için hayati önem taşımaktadır. Tıkanıklık meydana gelirse boruları normal su basıncı yüksek ve akış kullanılarak temizlenebilir. İdeal olarak, sistem suyun yaklaşık 10% iyi su kalitesini korumak için günlük değiştirilmesi gerekir. Kapak ya da karbon filtresi değiştirme sırasında alternatif olarak su değiştirilebilir. Bu bu filtreleri bağlayan boru yatırılan kir kaldırılır sağlar. Su kalitesi düzenli olarak kontrol edilmelidir. Böyle alkalinite, pH, temperat gibi parametrelerure, sertlik, amonyak, çözünmüş oksijen, tuzluluk ve iletkenlik sistemi su (ayrıntılar için bkz Tablo 2) kalitesini temsil eden önemli faktörler olarak kabul edilmelidir. En azından nitrat azından, pH ve sıcaklık konut zebrafish için iyi su kalitesi sağlamak için düzenli olarak izlenmelidir. İdeal nitrat (NO 3 -) seviyeleri &lt;50 mg / L 11, yüksek düzeyde varsa, bu yeni sistem ile su sirkülasyon sistemi su ile değiştirerek azaltılabilir. Bazen, filtreler iyi oturuyor ve bir filtre değişiminden sonra herhangi bir sızıntı olup olmadığını kontrol etmek için önerilir böylece sızıntı yok. Ana rezervuar su akış su pompası değiştirme veya filtreyi değiştirdikten sonra ya da bloke olursa, su akışı gevşetmeden veya borularda üretilen herhangi bir vakumu boşaltmak için birkaç saniye filtresini kaldırarak ya tarafından restore edilebilir. Filtreleri değiştirmek için gerekli zaman gibi toplam biyolojik yük o gibi çeşitli faktörlere bağlı olarak değişebilirn sistemi, diğer filtrelerin temizliği, ve kir borular yatırılır. Onlar kirli görünüyorsa veya tüm tankların doğru su almıyor yüzden, eğer filtreleri derhal değiştirilmelidir. Ayrıca, balık ağı% 70 etanol ile temizlendi, ve temizlemek için su içinde durulanmış ve tekrar kullanılmadan önce, kurumasına izin önerilir. Kurutma aksi balıklar için toksik etanol buharlaşmasını sağlar. Zebrafish sistemlerinin çoğu de-klorlu musluk suyu kullanın, ancak bazı sistemlerde deiyonize su kullanın. Bu balık vücut tuzları korumak için gerekli olan enerji miktarını azaltarak olarak 300 ve ~ 1,500 μS arasında sistem suyun iletkenliğine tutmak için önemlidir. Tuzları optimum iletkenlik seviyenin muhafaza edilmesi için ilave edilir Bu yüzden, zebrafish deiyonize su içinde muhafaza edilemez. Karbon filtre bakır kaldırmaz çünkü musluk suyu kullanılması durumunda sistem su olası yüksek bakır konsantrasyonları riski vardır. Bu nedenle, users bakır konsantrasyonları kontrol ve mümkünse boru bakır kaçınmalısınız. Besleme Bazı balık overeating nedeniyle ölebilir, bu, muhtemelen onların üreme 11 veya canlılığını etkileyen, suda nitrat seviyesini artırabilir olarak Zebrafish overfed asla. Biz balık tankı 10 dakika içinde bitirebiliriz dışında herhangi bir besleme sırasında daha yiyecek sağlayan öneririz. Bu aşırı tuz konsantrasyonu ölüme neden olarak zebrafish onları beslemeden önce salamura karides tuz kaldırmak için çok önemlidir. Daha zebrafish yumurta gerekli olması halinde, balık, günde üç kez beslenebilir. Günlük damızlık balık tankları temizliği de yumurta üretim düzeylerini artırır. Sucul Habitatlar sistemlerinde besleme zaman biz genellikle balık 10 dakika boyunca yemek yemek için izin su pompası ve hava pompası kapatın. Bu filtre içine yıkanır gıda miktarını azaltır. Ancak, kullanıcılar rem dikkatli olmalısınızdaha sonraları bu pompalar açmak için Ember. Üreme Zebra balığı ~ 3 ve 18 aylık arasındaki optimal üreme kondisyonuna kısmındadır. İkili üreme iki gün üst üste 11 değil gerçekleştirilmesi gerektiğini, ancak, depo içi yetiştirme bir tank gibi günlük yapılabilir bir satırda iki gün boyunca yetiştirilen balıkların aynı çifti şansını azaltır birçok balık tutabilir. Damızlık yumurta gerekli olmasa bile düzenli aralıklarla yapılmalıdır. Bu işlem, balık yetiştiriciliği döngüsü korunmasını sağlar. Bir üreme erkeklerde set-up daha kadın olduğunu önerilir. Erkek zebrafish daha bu tavsiyeyi destekler günlük olarak 12 onların kadın ortakları değiştirmek. Ayrıca, laboratuvar içinde biz başlangıçta kurulum sorunu çözmeye yardımcı üreme erkeklere göre daha fazla kadın ile, ancak, üreme ile ilgili sorunlar yaşadı. Ayrıca, yüksek protein conte ile beslement diyet ve salamura karides iki-üç kez bir gün, set-up 27 ve 28 ° C arasında, ve bloke over tüpleri ile kadınların karınlarını sıkma kullanarak üreme sıcaklığı muhafaza farklı tanklar (farklı veliler) dan karıştırma balık yumuşak masaj fazla yumurta üretimi geliştirdi. Biz balık çizgiler / kökenleri rekor kardeşler arasında-ıslahında önlemek için tutmak öneririz. Bu da embriyo üretimi artırır. Her tank balık tarafından atılmıştır embriyo sayısı bir kaydını tutmak da tavsiye edilir. Bu iyi yetiştirme balık tanklarının bir parça tutmak ve yumurta değil balık yetiştiriciliği geliştirmek için önlemler alarak yardımcı olmaktadır. Larva Raising Larvaların beslenmesi 5 dpf (gün sonrası fertilizasyon) dan başlamalıdır. Genç larvalar ~ 100 boyutu mikron (örneğin, ZM100) veya amip ve rotifer (büyüme uyarır) gibi canlı gıda, kuru gıda ile beslenebilir. Gıda boyut yavaş yavaş arttırılabilir200 mikron (örn. ZM200) ya da 300/400 mikron (örn. ZM300) için. Erişkin balık A nüfus litre suya 6-7 çevresinde balık olmalıdır. Bu uygulama tanklara BOİ (Biyolojik Oksijen İhtiyacı) daha iyi bakım için tavsiye edilir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td></td></tr><tr><td> Zebra balığı dolaşımdaki sistemi </td><td> Sucul Habitatlar, ABD </td><td> Stand-alone Ahab, tezgah üstü sistemlerde </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum bikarbonat </td><td> Sigma Aldrich </td><td> S6297 </td><td></td></tr><tr><td> Balık yemek dağıtıcı / Kuru gıda besleyici </td><td> Sucul Habitatlar, ABD </td><td> AH19 </td><td></td></tr><tr><td> Mikroskop </td><td> Olimpos </td><td> SZX12 </td><td></td></tr><tr><td> Kuru Gıda </td><td> ZM Balık gıda, İngiltere </td><td> ZM100, ZM200, ZM300 </td><td></td></tr><tr><td> Salamura karides yumurta </td><td> Salt Creek, Inc, ABD </td><td> Premium Grade </td><td></td></tr><tr><td> In-tankı yetiştiricileri</td><td> Sucul Habitatlar, ABD </td><td> ITSTS-A </td><td></td></tr><tr><td> Aktif kömür </td><td> Penn-Plax Pro-yengeç, ABD </td><td> PBC3MF </td><td></td></tr><tr><td> Damızlık tankları </td><td> Sucul Habitatlar, ABD </td><td> SBTANK (1L) Damızlık Tank-2 (2L) </td><td></td></tr><tr><td> Kırmızı deniz tuzu </td><td> Kırmızı deniz tuzu, ABD </td><td> Yerel evcil hayvan mağazası / <a href="http://www.redseafish.com" target="_blank">www.redseafish.com</a> </td><td></td></tr><tr><td> Filtreler (Kapak, filtre pedleri, ve UV) </td><td> Sucul Habitatlar, ABD </td><td> <a href="http://www.aquatichabitats.com" target="_blank">aquatichabitats.com</a> </td><td></td></tr><tr><td> Siporax Medya </td><td> Sucul Habitatlar, ABD </td><td> BF 820 </td><td></td></tr><tr><td> Salamura karides ağı </td><td> Sucul Habitatlar, ABD </td><td> BSN1 </td><td></td></tr><tr><td> Salamura karides çıkım </td><td> Sucul Habitatlar, ABD </td><td> BS252 </td><td></td></tr><tr><td> Sürgüler </td><td> Sucul Habitatlar, ABD </td><td> <a href="http://www.aquatichabitats.com" target="_blank">aquatichabitats.com</a> </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Tablo 1. Bu protokolde kullanılan spesifik reaktifler ve ekipman Tablo. </td></tr></tbody></table>

regular care and maintenance of a zebrafish (danio rerio) laboratory: an introduction

Bu protokol bir zebrafish laboratuvar düzenli bakım ve açıklar. Zebrafish şimdi genetik, farmakolojik ve davranışsal araştırma popülerlik kazanmaktadır. Bir omurgalı olarak, insanlarda ve birlikte zebrafish pay önemli genetik sekans benzerlik çeşitli insan hastalık durumları için bir hayvan modeli olarak kullanılmaktadır. Diğer ortak omurgalı modellere kıyasla zebrafish avantajları yüksek yumurta verimi, düşük bakım maliyeti, şeffaf embriyo ve hızlı bir gelişme vardır. Zebrafish araştırma, üretken zebrafish konut tesis kurmak ve sürdürmek için ihtiyaç ilgi teşvik nedeniyle de artmaktadır. Literatürde bir zebrafish laboratuvar bakımı için kullanılabilir olsa da, kısa bir video protokol yoksundur. Bu video, beslenme üreme ve zebrafish larvaların yetiştirme, düzenli konut protokolünü gösterir. Bu süreç araştırmacılar zebrafis doğal davranış ve uygun koşulları anlamanıza yardımcı olacaktırh hayvancılık ve dolayısıyla balık yetiştiriciliği koşullarından kaynaklanan deneysel sorunları. Bu protokol bir zebrafish laboratuvar kurmak ve aynı zamanda bir hayvan modeli olarak zebrafish kullanmak isteyen öğrenciler mezun olmak için planlama araştırmacılar için büyük yardım olacaktır.

Zebra balığı konut ve bakım geleneksel kemirgen modelleri daha kolay ve ucuzdur. Binlerce zebrafish küçük bir laboratuvarda muhafaza edilebilir. Bu protokol sonucunda, araştırmacılar zebrafish sağlıklı koşullar sağlayacak bir zebrafish tesisi yönetmek mümkün olacak. Buna ek olarak, aşağıdaki resimlere tanımlamak döllenmiş yumurta, yetişkin zebrafish, ve bunların gıda yardımcı olacaktır. Bir erkek zebrafish (Şekil 1A) ve kadın zebrafish (Şekil 1B ve 1C) bir illüstrasyon araştırmacılar erkek ve amaç damızlık dişi zebrafish ayırt edilmesine yardımcı olması gösterilmiştir Şekil 2 bir mikroskopik görünümü resmediyor;. 12X az tuzlu karides (Şekil 2A), 90X (Şekil 2B) tek bir salamura karides ve 90X (Şekil 2C) bir döllenmemiş salamura karides yumurta. Bu pervane için döllenmemiş ve döllenmiş salamura karides arasındaki farkı anlamada yardımcı olacaktırer besleme amaçlar. Döllenmiş yumurta döllenmemiş ve Şekil 3 &#39;de gösterilmiştir. Şekil 3A ve döllenmiş döllenmemiş embriyo mikroskopik bir görünümünü tasvir etmektedir. Döllenmemiş embriyolar koryon içinde rüptüre hücre (leri) (siyah ok) döllenmiş embriyo iken sağlam ve (zebrafish embriyolar farklı aşamalarında ayrıntılı okuma için 1&#39;e bakınız) sonraki hücreye bölünme devlet büyüyen görünür genelde opak ve / veya vardır. Döllenmiş ve döllenmemiş yumurta sırasıyla Şekil 3B gösterilir ve 3C edilir. Şekil 4 Yüksek büyütme araştırmacılar bir erkek ve bir dişi zebrafish ayırt yardımcı olmak için bir kadın zebrafish kullanıcısının yumurtlama borusu göstermektedir. Bir zebrafish laboratuvar meydana gelebilecek birçok kritik sorunları / bireyin bütün konut sisteminde tankları, kötü su kalitesi ve sirkülasyon sisteminin boruları veya rezervuar kaçak su tıkanma vardır. Buna ek olarak,ıslah embriyolar elde etmedeki problemlerle başka endişe olabilir. Bu konuların Giderme aşağıda ele alınmıştır. <img src="/files/ftp_upload/4196/4196fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. Bir erkek zebrafish (A) ve dişi zebrafish (B, C) ​​lik bir örnek. <img src="/files/ftp_upload/4196/4196fig2.jpg" alt="Şekil 2," /> Şekil 2.. 12X (A), 90X (B) tek bir salamura karides ve 90X (C) bir döllenmemiş salamura karides yumurta az tuzlu karides bir mikroskopik görünümü. <img src="/files/ftp_upload/4196/4196fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3. Yalnızca iki yumurta döllenmemiş olan döllenmiş ve döllenmemiş yumurta, mikroskopik görünümü (16X), döllenmemiş yumurta (A) siyah oklar ile gösterilir. Yüksek büyütmeuygunluğu (90X) döllenmiş bir (B) ve bir döllenmemiş yumurta (C). <img src="/files/ftp_upload/4196/4196fig4.jpg" alt="Şekil 4," /> Şekil 4. Bir dişi zebrafish kullanıcısının yumurtlama borusu (siyah ok ile gösterilen) illüstrasyon. <table border="1"><tbody><tr><td fo:width="2in"> Parametre </td><td fo:width="3in"> Optimum aralık </td></tr><tr><td> Alkaliklik </td><td> 50-150 mg / L CaCO 3 </td></tr><tr><td> pH </td><td> 6,8-7,5 (6.0-8.5 tolere) </td></tr><tr><td> Sıcaklık </td><td> 26-28,5 ° C </td></tr><tr><td> Sertlik </td><td> 50-100 mg / L CaCO3 </td></tr><tr><td> Un-iyonize Amonyak </td><td> &lt;0.02 mg / L </td></tr><tr><td> Nitrat (NO 3 -) </td><td> &lt;50 mg / l </td></tr><tr><td> Nitrit (NO 2 -) </td><td> &lt;0.1 mg / L </td></tr><tr><td> Çözünmüş oksijen </td><td> &gt; 6.0 mg / L </td></tr><tr><td> Tuzluluk </td><td> 0.5-1 g / L </td></tr><tr><td> Iletkenlik </td><td> 300 -1.500 μS </td></tr></tbody></table> Tablo 2. Su kalite parametreleri. Su kalite parametreleri. Zebrafish akvaryum 11 çevresel parametrelerin optimum kullanım alanı.

Watch this Scientific Journal Video about Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction at JoVE.com

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction

Bu protokol zebrafish yetiştiriciliği için en uygun koşulları sağlamak için düzenli bakım ve bakım özetliyor. Video sistemi bakımı, düzenli barınma, beslenme, üreme ve zebrafish larvaların yetiştirme için protokol göstermektedir.

Bir Zebra balığı Düzenli Bakım ve Onarım (<em&gt; Br.rerio</em&gt;) Laboratuvar: An Introduction

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and ...

regular-care-maintenance-zebrafish-danio-rerio-laboratory-an

Research

JoVE Journal

Biology

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction

88.4K Görüntüleme.  Edith Cowan University. Bu protokol zebrafish yetiştiriciliği için en uygun koşulları sağlamak için düzenli bakım ve bakım özetliyor. Video sistemi bakımı, düzenli barınma, beslenme, üreme ve zebrafish larvaların yetiştirme için protokol göstermektedir.

Video: Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish (Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the cellular and molecular features of the epithelia, which are mainly composed of two types of cells: hair cells (HCs) and supporting cells (SCs). Here we choose to study the inner ear sensory epithelia in adult zebrafish not only because the epithelial structures are highly conserved in all vertebrates studied, but also because the adult zebrafish is able to regenerate HCs, an ability that mammals lose shortly after birth. We use the inner ear of adult zebrafish as a model system to study the mechanisms of inner ear HC regeneration in adult vertebrates that could be helpful for clinical therapy of hearing/balance deficits in human as a result of HC loss.
Here we demonstrate how to do gross and fine dissections of inner ear sensory epithelia in adult zebrafish. The gross dissection removes the tissues surrounding the inner ear and is helpful for preparing tissue sections, which allows us to examine the detailed structure of the sensory epithelia. The fine dissection cleans up the non-sensory-epithelial tissues of each individual epithelium and enables us to examine the heterogeneity of the whole epithelium easily in whole-mount epithelial samples.

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish Danio rerio

The inner ear sensory epithelium of adult zebrafish is a good model system for understanding the mechanisms of hair cell regeneration in adult vertebrates. This protocol demonstrates the fine dissection of the epithelia, through which we can get tissue samples for studying the regenerative events at cellular and subcellular levels.

Yetişkin Zebra balığı İç Kulak Duyu Epiteli Brüt ve Güzel Diseksiyon ( Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the ...

Biyoloji

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work examining post-embryonic through adult cardiac development has been limited7-10. Examining the changing morphology of the maturing and aging heart are restricted by the lack of techniques available for staging and isolating juvenile and adult hearts. In order to analyze heart development over the fish's lifespan, we dissect zebrafish hearts at numerous stages and photograph them for further analysis11. The morphological features of the heart can easily be quantified and individual hearts can be further analyzed by a host of standard methods. Zebrafish grow at variable rates and maturation correlates better with fish size than age, thus, post-fixation, we photograph and measure fish length as a gauge of fish maturation. This protocol explains two distinct, size dependent dissection techniques for zebrafish, ranging from larvae 3.5mm standard length (SL) with hearts of 100&mu;m ventricle length (VL), to adults, with SL of 30mm and VL 1mm or larger. Larval and adult fish have quite distinct body and organ morphology. Larvae are not only significantly smaller, they have less pigment and each organ is visually very difficult to identify. For this reason, we use distinct dissection techniques.
We used pre-dissection fixation procedures, as we discovered that hearts dissected directly after euthanization have a more variable morphology, with very loose and balloon like atria compared with hearts removed following fixation. The fish fixed prior to dissection, retain in vivo morphology and chamber position (data not shown). In addition, for demonstration purposes, we take advantage of the heart (myocardial) specific GFP transgenic Tg(myl7:GFP)twu34 (12), which allows us to visualize the entire heart and is particularly useful at early stages in development when the cardiac morphology is less distinct from surrounding tissues. Dissection of the heart makes further analysis of the cell and molecular biology underlying heart development and maturation using in situ hybridization, immunohistochemistry, RNA extraction or other analytical methods easier in post-embryonic zebrafish. This protocol will provide a valuable technique for the study of cardiac development maturation and aging.

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

A clear, standardized method for dissection and isolation of the zebrafish heart at multiple developmental stages are described. Annotation and quantification techniques are also discussed.

Larvaların Kalp Diseksiyon, Çocuk ve Yetişkin Zebra balığı, Danio rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

In Vivo Modeling of the Morbid Human Genome using Danio rerio

Here, we present methods for the development of assays to query potentially clinically significant nonsynonymous changes using in vivo complementation in zebrafish. Zebrafish (Danio rerio) are a useful animal system due to their experimental tractability; embryos are transparent to enable facile viewing, undergo rapid development ex vivo, and can be genetically manipulated.1 These aspects have allowed for significant advances in the analysis of embryogenesis, molecular processes, and morphogenetic signaling. Taken together, the advantages of this vertebrate model make zebrafish highly amenable to modeling the developmental defects in pediatric disease, and in some cases, adult-onset disorders. Because the zebrafish genome is highly conserved with that of humans (~70% orthologous), it is possible to recapitulate human disease states in zebrafish. This is accomplished either through the injection of mutant human mRNA to induce dominant negative or gain of function alleles, or utilization of morpholino (MO) antisense oligonucleotides to suppress genes to mimic loss of function variants. Through complementation of MO-induced phenotypes with capped human mRNA, our approach enables the interpretation of the deleterious effect of mutations on human protein sequence based on the ability of mutant mRNA to rescue a measurable, physiologically relevant phenotype. Modeling of the human disease alleles occurs through microinjection of zebrafish embryos with MO and/or human mRNA at the 1-4 cell stage, and phenotyping up to seven days post fertilization (dpf). This general strategy can be extended to a wide range of disease phenotypes, as demonstrated in the following protocol. We present our established models for morphogenetic signaling, craniofacial, cardiac, vascular integrity, renal function, and skeletal muscle disorder phenotypes, as well as others.

In Vivo Modeling of the Morbid Human Genome using Danio rerio

Here, we present a systematic approach for developing physiologically relevant, sensitive and specific in vivo assays for interpreting variation in human pathology. Transient genetic manipulation via microinjection of WT and mutant human mRNA and morpholino (MO) antisense oligonucleotides harness the tractability of the developing zebrafish embryo to rapidly assay pathogenic mutations, especially, but not exclusively, in the context of human developmental disorders.

Br.rerio kullanarak Morbid İnsan Genomu İn Vivo Modelleme

Here,  we present methods for the development of assays to query potentially clinically  significant nonsynonymous changes using in  vivo complementation ...

High Throughput Danio Rerio Energy Expenditure Assay

Zebrafish are an important model organism with inherent advantages that have the potential to make zebrafish a widely applied model for the study of energy homeostasis and obesity. The small size of zebrafish allows for assays on embryos to be conducted in a 96- or 384-well plate format, Morpholino and CRISPR based technologies promote ease of genetic manipulation, and drug treatment by bath application is viable. Moreover, zebrafish are ideal for forward genetic screens allowing for novel gene discovery. Given the relative novelty of zebrafish as a model for obesity, it is necessary to develop tools that fully exploit these benefits. Herein, we describe a method to measure energy expenditure in thousands of embryonic zebrafish simultaneously. We have developed a whole animal microplate platform in which we use 96-well plates to isolate individual fish and we assess cumulative NADH2 production using the commercially available cell culture viability reagent alamarBlue. In poikilotherms the relationship between NADH2 production and energy expenditure is tightly linked. This energy expenditure assay creates the potential to rapidly screen pharmacological or genetic manipulations that directly alter energy expenditure or alter the response to an applied drug (e.g. insulin sensitizers).

High Throughput Danio Rerio Energy Expenditure Assay

Zebrafish are an important model organism for the study of energy homeostasis. By utilizing a NADH2 sensitive redox indicator, alamar Blue, we have developed an assay that measures the metabolic rate of zebrafish larvae in a 96 well plate format and can be applied to drug or gene discovery.

Yüksek Verimli<em&gt; Danio rerio</em&gt; Enerji Harcaması Deneyi

Zebrafish are an important model organism with inherent advantages that have the potential to make zebrafish a widely applied model for the study of ...

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life cycle of Drosophila enables collection of large quantities of material from embryos, larvae, pupae and adult flies, in a synchronized way, at a low economic cost. A major strategy for propagating large numbers of flies is the use of a fly population cage. This useful and common tool in the Drososphila community is an efficient way to regularly produce milligrams to tens of grams of embryos, depending on uniformity of developmental stage desired. While a population cage can be time consuming to set up, maintaining a cage over months takes much less time and enables rapid collection of biological material in a short period. This paper describes a detailed and flexible protocol for the maintenance of a Drosophila melanogaster population cage, starting with 1.5 g of harvested material from the previous cycle.

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

This manuscript reports a detailed protocol for culturing, on a regular basis, a population of Drosophila melanogaster using a fly population cage.

Bir bakımı<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Nüfus Kafes

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid decline in renal function and development of the clinical syndrome known as acute kidney injury (AKI). Pharmacological agents used to treat medical circumstances ranging from bacterial infection to cancer, when administered individually or in combination with other drugs, can initiate AKI. Zebrafish are a useful animal model to study the chemical effects on renal function in vivo, as they form an embryonic kidney comprised of nephron functional units that are conserved with higher vertebrates, including humans. Further, zebrafish can be utilized to perform genetic and chemical screens, which provide opportunities to elucidate the cellular and molecular facets of AKI and develop therapeutic strategies such as the identification of nephroprotective molecules. Here, we demonstrate how microinjection into the zebrafish embryo can be utilized as a paradigm for nephrotoxin studies.

Renal injuries incurred from nephrotoxins, which include drugs ranging from antibiotics to chemotherapeutics, can result in complex disorders whose pathogenesis remains incompletely understood. This protocol demonstrates how zebrafish can be used for disease modeling of these conditions, which can be applied to the identification of renoprotective measures.

Zebra balığı Nephrotoxin Mikroenjeksiyon Akut Böbrek Yaralanması Model

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...

Detecting Estrogenic Ligands in Personal Care Products using a Yeast Estrogen Screen Optimized for the Undergraduate Teaching Laboratory

The Yeast Estrogen Screen (YES) is used to detect estrogenic ligands in environmental samples and has been broadly applied in studies of endocrine disruption. Estrogenic ligands include both natural and manmade &#34;Environmental Estrogens&#34; (EEs) found in many consumer goods including Personal Care Products (PCPs), plastics, pesticides, and foods. EEs disrupt hormone signaling in humans and other animals, potentially reducing fertility and increasing disease risk. Despite the importance of EEs and other Endocrine Disrupting Chemicals (EDCs) to public health, endocrine disruption is not typically included in undergraduate curricula. This shortcoming is partly due to a lack of relevant laboratory activities that illustrate the principles involved while also being accessible to undergraduate students. This article presents an optimized YES for quantifying ligands in personal care products that bind estrogen receptors alpha (ER&#945;) and/or beta (ER&#946;). The method incorporates one of the two colorimetric substrates (ortho-nitrophenyl-&#946;-D-galactopyranoside (ONPG) or chlorophenol red-&#946;-D-galactopyranoside (CPRG)) that are cleaved by &#946;-galactosidase, a 6-day refrigerated incubation step to facilitate use in undergraduate laboratory courses, an automated application for LacZ calculations, and R code for the associated 4-parameter logistic regression analysis. The protocol has been designed to allow undergraduate students to develop and conduct experiments in which they screen products of their choosing for estrogen mimics. In the process, they learn about endocrine disruption, cell culture, receptor binding, enzyme activity, genetic engineering, statistics, and experimental design. Simultaneously, they also practice fundamental and broadly applicable laboratory skills, such as: calculating concentrations; making solutions; demonstrating sterile technique; serially diluting standards; constructing and interpolating standard curves; identifying variables and controls; collecting, organizing, and analyzing data; constructing and interpreting graphs; and using common laboratory equipment such as micropipettors and spectrophotometers. Thus, implementing this assay encourages students to engage in inquiry-based learning while exploring emerging issues in environmental science and health.

This article presents an optimized yeast estrogen screen for quantifying ligands in Personal Care Products (PCPs) that bind estrogen receptors alpha (ER&#945;) and/or beta (ER&#946;). The method incorporates two colorimetric substrate options, a six-day refrigerated incubation for use in undergraduate courses, and statistical tools for data analysis.

Kişisel bakım ürünleri için lisans öğretim laboratuvar bir maya östrojen ekran optimize kullanarak östrojenik ligandlar saptamak

The Yeast Estrogen Screen (YES) is used to detect estrogenic ligands in environmental samples and has been broadly applied in studies of endocrine ...

Anaerobic Growth and Maintenance of Mammalian Cell Lines

Most mucosal surfaces along with the midpoints in tumors and stem cell niches are geographic areas of the body that are anoxic. Previous studies show that the incubation in normoxic (5% CO2 in air) or hypoxic (low oxygen levels) conditions followed by an anoxic incubation (an absence of free oxygen) results in limited viability (2&#8211;3 days). A novel methodology was developed that enables an anoxic cell cultivation (for at least 17 days; the maximum time tested). The most critical aspect of this methodology is to ensure that no oxygen is introduced into the system. This is obtained by the degassing of media, and by flushing tubes, dishes, flasks, and pipettes with an anaerobic gas mixture (H2, CO2, N2) followed by permitting the materials to equilibrate to the anoxic (non-oxygen) environment prior to usage.&#160;Additional care must be exercised when acquiring photomicrographs to ensure that the micrographs obtained do not contain artifacts. In the absence of oxygen, cell morphology is significantly altered. Two distinct morphotypes are noted for all anaerobically-grown cells. The ability to grow and maintain mammalian cells in the absence of oxygen can be applied to the analysis of cell physiology, polymicrobial interactions, and the characterization of biosynthetic pathways for novel cancer drug development.

Here, we describe a new method that enables the anaerobic long-term cultivation of established cell lines. The maximum survival time that was tested is 17 days. This method is suitable for the testing of cytotoxic agents and exploring the physiology of anoxically replicating cells.

Anaerobik büyüme ve bakım memeli hücre hatları

Most mucosal surfaces along with the midpoints in tumors and stem cell niches are geographic areas of the body that are anoxic. Previous studies show that ...

Establishment and Maintenance of Gnotobiotic American Cockroaches (Periplaneta americana)

Gnotobiotic animals are a powerful tool for the study of controls on microbiome structure and function. Presented here is a protocol for the establishment and maintenance of gnotobiotic American cockroaches (Periplaneta americana). This approach includes built-in sterility checks for ongoing quality control. Gnotobiotic insects are defined here as cockroaches that still contain their vertically transmitted endosymbiont (Blattabacterium) but lack other microbes that normally reside on their surface and in their digestive tract. For this protocol, egg cases (oothecae) are removed from a (nonsterile) stock colony and surface sterilized. Once collected and sterilized, the oothecae are incubated at 30 &#176;C for approximately 4&#8722;6 weeks on brain-heart infusion (BHI) agar until they hatch or are removed due to contamination. Hatched nymphs are transferred to an Erlenmeyer flask containing a BHI floor, sterile water, and sterile rat food. To ensure that the nymphs are not housing microbes that are unable to grow on BHI in the given conditions, an additional quality control measure uses restriction fragment-length polymorphism (RFLP) to test for nonendosymbiotic microbes. Gnotobiotic nymphs generated using this approach can be inoculated with simple or complex microbial communities and used as a tool in gut microbiome studies.

Establishment and Maintenance of Gnotobiotic American Cockroaches Periplaneta americana

This protocol is used in establishing and maintaining gnotobiotic American cockroaches (Periplaneta americana) by surface sterilizing the egg cases (oothecae) prior to hatching. These gnotobiotic insects contain their vertically transmitted Blattabacterium endosymbionts but have axenic guts.

Gnotobiyotik Amerikan Hamamböceklerinin Kurulması ve Bakımı (Periplaneta americana)

Gnotobiotic animals are a powerful tool for the study of controls on microbiome structure and function. Presented here is a protocol for the establishment ...

Fluorescence In Situ Hybridization on DNA Halo Preparations to Reveal Whole Chromosomes, Telomeres and Gene Loci

The genome is associated with several structures inside cell nuclei, in order to regulate its activity and anchor it in specific locations. These structures are collectively known as the nucleoskeleton and include the nuclear lamina, the nucleoli, and nuclear bodies. Although many variants of fluorescence in situ hybridization (FISH) exist to study the genome and its organization, these are often limited by resolution and provide insufficient information on the genome&#39;s association with nuclear structures. The DNA halo method uses high salt concentrations and nonionic detergents to generate DNA loops that remain anchored to structures within nuclei through attachment regions within the genome. Here, soluble nuclear proteins, such as histones, lipids, and DNA not tightly bound to the nuclear matrix, are extracted. This leads to the formation of a halo of unattached DNA surrounding a residual nucleus which itself contains DNA closely associated with internal nuclear structures and extraction-resistant proteins. These extended DNA strands enable increased resolution and can facilitate physical mapping. In combination with FISH, this method has the added advantage of studying genomic interactions with all the structures that the genome is anchored by. This technique, termed HALO-FISH, is highly versatile whereby DNA halos can be coupled with nucleic acid probes to reveal gene loci, whole chromosomes, alpha satellite, telomeres and even RNA. This technique provides an insight into nuclear organization and function in normal&#160;cells and in disease progression such as with cancer.

Combining DNA halo preparations with fluorescence in situ hybridization enables high-resolution analysis of genomic interactions with the nucleoskeleton. Attached genome leads to hybridized fluorescent signals located within the residual extracted nuclei, whereas non-attached genome is in the halo of DNA surrounding the residual nuclei.