Araştırma bronkoskopilerin ile yaptığı desteği için Elena Mitsi (Araştırma Görevlisi) ve Sr Carole Hancock (Araştırma hemşire) ve filme katkılarından dolayı tiyatro personel, ve David Shaw (araştırma hemşire) teşekkür ederiz. Bu prosedür filme izin verdiği için de bizim gönüllü Rebecca Dunphy için teşekkürler.

1.. Konular Solunum Araştırma Hemşiresi tarafından Geliş Met vardır <ol><li> Konu katı gıda ve berrak sıvıların 1 için 2 saat süreyle&gt; 4 saat oruç olmuştur. </li><li> Prosedürü (standart hastane politikası uyarınca) uygun öncesi ve işlem sonrası kontrolleri ile bir günlük vaka olarak gerçekleştirilir. </li><li> Konu bir hastane elbisesi giyer. </li><li> Küçük bir göstergesi kanül (ideal sol eline) yerleştirilir ve işlem sonrası iyileşme dönemi 1 sonuna kadar yerinde kalır. </li><li> Uygulama öncesi gözlemler alınır (kan basıncı, kalp hızı, oksijen satürasyonu [sats]). </li><li> Konu bronkoskopi aktarılır. </li></ol> 2. Konu Bronkoskopi deneyimli bir Solunum Araştırma Klinisyen tarafından Suite Prosedür için hazırlanır <ol><li> 3-kurşun EKG, pulse oksimetre 1,10 ve tansiyon aleti; izleme ekipmanları da dahil olmak üzere takılır. Anesthetic destek yazılı bilgilendirilmiş onam dahil olmak üzere gerekli değildir. </li><li> Oksijen&gt;% 90 1 satürasyonu elde etmek kadar 4 L / dk nazal kanül aracılığı ile teslim edilebilir. </li><li> Operatör, bu steril serum fizyolojik aspire etkili emme sağlanması içerir, bronkoskop denetler. </li><li> Lidokain ile topikal anestezi (lidokain kullanılarak) (Instillagel 1 kullanarak) burun ve ağız mukozasında elde edilir </li><li> Sedasyon uygun ve konu ile talep varsa, intravenöz midazolam 1 verilir. Uygun bir ters madde (flumazenil) hemen kullanılabilir. </li><li> Resüsitasyon ekipmanı 1,10 hazır olmalıdır. </li></ol> 3. Bronkoskop yerleştirilebilirler edilir <ol><li> Entübasyon burun üzerinden genellikle. Bu durum, nazal polipler, iltihaplı konka ya da sonra herhangi bir rahatsızlık söz konusu ağız yolu ile entübe mümkün değilse (bir ağız koruma önlemek için kullanılır) kapsamı veya deneğin dişlerine zarar verebilir. </li><li> Gırtlak topikal anestezi genellikle 4-6 ml toplam kullanılan,% 4 lidokain kullanılarak tamamlandı. Genellikle bu damlatılmasından üzerinde öksürüğe neden olur. </li><li> Ses telleri geçti ve olan sağ alt lob (RLL) ve sağ orta lob (RML) bölünmesi de ve RML girişinde, karina 2 lidokain% 2 ml&#39;lik numuneler kullanılarak daha fazla mukozal anestezi. </li><li> Bronkoskop emme (&#39;Wink test&#39;, emme düğmesi kullanılarak uygulandığı zaman hava yolu daraltır ve böylece güvenli bir konumda olmak için yeterince uzak ama çok uzak olmayan bir konumda, ideal medial segmentte, RML içinde konumlandırılır .) </li><li> İyi konumlandırma tam bronkoskopist ve hemen nazik emiş tam kapanmıyor bir havayolu konumunda muhafaza edilebilir bir bronkoskop ile Göz testi sırasında belirtilir. </li></ol> 4. BAL Yapılır <ol><li> Dört 60 ml şırınga önceden vardır60 ml, 50 ml, 50 ml, ve birbirini takip eden şırıngalar içinde, 40 ml - ısıtıldı, normal tuzlu su ile doldurulur. Konu ve bronkoskopist hazır olduğunuzda bronkoskopist RML olarak konumunu korumaktadır ederken tuzlu ilk şırınga bronkoskopi asistanı tarafından telkin edilir. </li><li> Nazik el emme sonra aynı port ve 50 ml şırınga kullanarak asistanı tarafından yapılır. </li><li> Bu prosedür, o zaman özel bir teknik kullanılan 200 ml&#39;lik bir maksimum hacme sahip, bir başka 3 kez tekrar edilir. </li><li> Alınan BAL sıvısı zaten erimeye buz üzerinde tutulan etiketli kaplar içine yavaşça dışarı atılır. Cam kaplar, hücre bağlanmasının inhibe edilmesi ve hücre dönüş en üst düzeye çıkarmak amacıyla presiliconized olabilir. </li><li> BAL sıvısı yüzey aktif maddeler ile oluşan yüzey, sabun köpüğü ile ışığa karşı puslu görünür. </li><li> Bronkoskop yavaş yavaş tamamen çekilir. </li><li> BAL sıvısı anında işlem için buz üzerinde bir gecikme olmaksızın taşınır. </li></ol> 5. Konu Kurtarma </p&gt; <ol><li> Konu bir koğuşta solunum araştırma hemşiresi tarafından 2-4 saat için geri kazanılır. </li><li> Bu süre içinde onlar (kendi yutmak güvenli olarak değerlendirilir zaman) işleminden sonra, sırayla aspirasyon riskini azaltmak dinlenmek ve daha sonra sadece yemek ve&gt; 60 dakika 1 içmek için izin verilir. </li><li> Mesaj usul gözlemler izlenir ve kaydedilir. Bir klinik muayene deşarj öncesinde oluşur. </li><li> Konu yaygın yan etkileri (ateş, hafif sağ submamariyan göğüste rahatsızlık hissi, boğaz ağrısı) hakkında Taburcu bilgi verdi ve önemli yan etkileri 1 oluşması durumunda bir irtibat numarası verilir. </li><li> Konu takip edilir 1-5 gün bir klinik temas sonrası prosedür de. Bu telefonla ya da şahsen olabilir. </li></ol> 6. Hücreler Laboratuvarında İzole nelerdir - Erime Ice gerçekleştirin nerede Olası <ol><li> BAL sıvısının hacmi, steril bir gazlı bez bir çift tabaka ile kaydedilir ve süzülürönceden soğutulmuş, steril bir 50 ml santrifüj tüplerine mukus fişler kaldırın. </li><li> Hücreler, 5-10 dakika boyunca 4 ° C&#39;de 500 x g&#39;de santrifüj ile pelet haline getirildi ve 50 ml normal tuzlu su içinde soğuk bir vorteks ile yıkanır. Santrifüj bir kez tekrarlanır. </li><li> Hücreler (RPMI-1640 +% 10 cenin sığır serumu + 2 mM L-glutamin + Penisilin [40 IU / ml], streptomisin [75 IU / ml] ve amfoterisin B [0.5 IU / ml]) ve kültür ortamında yeniden süspanse diferansiyel sayma tripan mavinin eşit hacmi ve bir hemasitometre kullanılarak gerçekleştirilmiştir. </li><li> Hücre süspansiyonu, uygun doku kültür levhaları içerisine pipetle tanıtıldı (biz 1 x 10 6 hücre / ml kullanımı) ve makrofaj yapışmasını sağlamak için 3 saat boyunca 37 ° C&#39;de inkübe istenilen yoğunluğuna normalize edilir. Oyuk başına bu hücre süspansiyonu 1 ml 24 oyuklu kültür plakaları için uygundur. </li><li> Lenfosit çalışması için, inkübasyon 3 saat sonra kültür ortamı nazikçe yukarı ve aşağı 3x pipetle ve toplanır. Bu ortam, lenfositler içerirve yapışmayan makrofajlar ve lenfosit fonksiyonunu değerlendirmek için kullanılabilir, aynı zamanda saflaştırma adımları kullanılabilmektedir makrofajlar kaldırmak için CD14 manyetik boncukları ile örneğin. </li><li> Makrofaj çalışması için, inkübasyon 3 saat sonra, ortam dikkatlice minimal pipetleme ile çıkarılır ve taze antibiyotikler olmadan, sıcak bir ortam (RPMI 1640 +% 10 cenin sığır serumu + 2 mM L-glutamin) ile değiştirildi. Makrofajlar (bkz. Şekil 1), doku kültürü plakasına yapışık. </li></ol>

<ol>
	<li>BTS, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+British+Thoracic+Society+Bronchoscopy+Guideline+Committee+-+A+sub-Committee+of+the+Standards+of+Care+Committee+of+the+British+Thoracic+Society.">The British Thoracic Society Bronchoscopy Guideline Committee - A sub-Committee of the Standards of Care Committee of the British Thoracic Society.</a> Thorax. 56 (Suppl I), 1-21 (2001).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+recommendations+and+guidelines+for+bronchoalveolar+lavage+(BAL)+report+of+the+European+Society+for+Pneumology+Task+Group.">Technical recommendations and guidelines for bronchoalveolar lavage (BAL) report of the European Society for Pneumology Task Group.</a> Eur. Respir. , 561-585 (1989).</li><li>Gordon, S. B., Irving, G. R., Lawson, R. A., Lee, M. E., Read, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+trafficking+and+killing+of+Streptococcus+pneumoniae+by+human+alveolar+macrophages+are+influenced+by+opsonins.">Intracellular trafficking and killing of Streptococcus pneumoniae by human alveolar macrophages are influenced by opsonins.</a> Infect. Immun. 68, 2286-2293 (2000).</li><li>Gordon, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+immunoglobulin+responses+to+Streptococcus+pneumoniae+are+altered+but+not+reduced+in+human+immunodeficiency+virus-infected+Malawian+adults.">Pulmonary immunoglobulin responses to Streptococcus pneumoniae are altered but not reduced in human immunodeficiency virus-infected Malawian adults.</a> J. Infect. Dis. 188, 666-670 (2003).</li><li>Fullerton, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Domestic+smoke+exposure+is+associated+with+alveolar+macrophage+particulate+load.">Domestic smoke exposure is associated with alveolar macrophage particulate load.</a> Trop. Med. Int. Health. 14, 349-354 (2009).</li><li>Jambo, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+CD4++T+cell+responses+to+respiratory+antigens+are+impaired+in+HIV-infected+adults.">Bronchoalveolar CD4+ T cell responses to respiratory antigens are impaired in HIV-infected adults.</a> Thorax. 66, 375-382 (2011).</li><li>Eagan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+fluid+immunoglobulin+from+HIV-infected+subjects+has+impaired+opsonic+function+against+pneumococci.">Lung fluid immunoglobulin from HIV-infected subjects has impaired opsonic function against pneumococci.</a> Clin. Infect. Dis. 44, 1632-1638 (2007).</li><li>Rose, A. S., Knox, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+lavage+as+a+research+tool.">Bronchoalveolar lavage as a research tool.</a> Sem. Respir. Crit. Care Med. 28, 561-573 (2007).</li><li>Wright, A. K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Nasal+Challenge+with+Streptococcus+pneumoniae+is+Immunising+in+the+Absence+of+Carriage.">Human Nasal Challenge with Streptococcus pneumoniae is Immunising in the Absence of Carriage.</a> PLoS Pathog. , (2012).</li><li>Bolliger, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERS/ATS+statement+on+interventional+pulmonology+European+Respiratory+Society/American+Thoracic+Society.">ERS/ATS statement on interventional pulmonology European Respiratory Society/American Thoracic Society.</a> Eur. Respir. J. 19, 356-373 (2002).</li><li>Ettensohn, D. B., Jankowski, M. J., Duncan, P. G., Lalor, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+lavage+in+the+normal+volunteer+subject.+I.+Technical+aspects+and+intersubject+variability.">Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. I. Technical aspects and intersubject variability.</a> Chest. 94, 275-280 (1988).</li><li>Ettensohn, D. B., Jankowski, M. J., Redondo, A. A., Duncan, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+lavage+in+the+normal+volunteer+subject.+2.+Safety+and+results+of+repeated+BAL,+and+use+in+the+assessment+of+intrasubject+variability.">Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. 2. Safety and results of repeated BAL, and use in the assessment of intrasubject variability.</a> Chest. 94, 281-285 (1988).</li><li>De Brauwer, E. I., Jacobs, J. A., Nieman, F., Bruggeman, C. A., Drent, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+lavage+fluid+differential+cell+count.+How+many+cells+should+be+counted.">Bronchoalveolar lavage fluid differential cell count. How many cells should be counted.</a> Anal. Quant. Cytol. Histol. 24, 337-341 (2002).</li><li>Mtunthama, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malawians+permit+research+bronchoscopy+due+to+perceived+need+for+healthcare.">Malawians permit research bronchoscopy due to perceived need for healthcare.</a> J. Med. Ethics. 34, 303-307 (2008).</li><li>Pereira, W., Kovnat, D. M., Snider, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+prospective+cooperative+study+of+complications+following+flexible+fiberoptic+bronchoscopy.">A prospective cooperative study of complications following flexible fiberoptic bronchoscopy.</a> Chest. 73, 813-816 (1978).</li><li>Huang, Y. C., Bassett, M. A., Levin, D., Montilla, T., Ghio, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+phase+reaction+in+healthy+volunteers+after+bronchoscopy+with+lavage.">Acute phase reaction in healthy volunteers after bronchoscopy with lavage.</a> Chest. 129, 1565-1569 (2006).</li><li>Gritzfeld, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Human+Pneumococcal+Carriage.">Experimental Human Pneumococcal Carriage.</a> J. Vis. Exp. (72), (2013).</li></ol>

Andrea M. Collins Bill ve Melinda Gates Vakfı, ve potansiyel hiçbir çatışan çıkarları tarafından finanse edilmektedir. O konferans ve ders ücretleri katılmak için Merck (MSD) ve GSK para aldı. 50 araştırma BALlar bağımsız gerçekleştirilir. Jamie Rylance Wellcome Trust tarafından finanse edilen ve herhangi bir çıkar çatışması vardır. O, başka bir fon aldı. 70 araştırma BALlar bağımsız gerçekleştirilir. Daniel G. Wootton bir NIHR Doktora Bursu tarafından finanse edilen ve çıkar çatışmaları vardır. 40 araştırma BALlar bağımsız gerçekleştirilir. Angela D. Wright hiçbir potansiyel çatışan çıkarları vardır. 100&#39;den fazla araştırma BAL ile destekli. Adam KA Wright hiçbir potansiyel çatışan çıkarları vardır. O 50 BAL örneğinin üzerinde işledi. Duncan G. Fullerton </strong&gt; Hiçbir potansiyel çatışan çıkarları vardır. 100 araştırma BALlar bağımsız gerçekleştirilir. Stephen B. Gordon hiçbir potansiyel çatışan çıkarları vardır. O konferanslara katılmak için Merck (MSD) ve Novartis fon aldı. 400 araştırma BALlar bağımsız gerçekleştirilir.

İyi sonuçlar elde etmek için, aşağıdaki faydalıdır: <ol><li> Dil ve posterior orofarinksin dibinde iyi anesthetisation. Bu konunun usul hoşgörü ve genel rahatlığı artırır, çünkü bu önemlidir. </li><li> Bir çocuk (dış çapı 3,4-3,6 mm) veya yetişkin bronkoskop (dış çapı 4,8-5,9 mm) da kullanılabilir. </li><li> Nazal entübasyon sırasında herhangi bir rahatsızlık varsa, ağızdan entübasyon tercih edilir. Genelde burun entübasyon basit bir tekniktir ya ya terk edilmelidir. </li><li> Orofarenks lidokain ilk uygulamasından sonra, konu bronkoskop ağızdan sokulur, özellikle anestezi başlangıcı bekleyen çekilmesini bronkoskop tercih edebilir. </li><li> En az 10 x 10 ml şırınga lidokain 2-4 ml ile doldurulmuş emin olun. Hava doğrudan kordonlar ve endobronşiyal muco üzerine anestezi geliştirilmiş teslimini sağlayan şırıngalar bırakılmalıdırsa. </li><li> İşlem sırasında öksürme yana önemli ölçüde BAL verimi azaltır; ısıtılmış tuzlu su kullanılarak ve iyi mukozal anestezi bu azaltmak için önemli olan. </li><li> 50 ml şırıngalar ısıtıldı tuzlu su ile doldurulmuş olması gerekir. Bu ölü alan kaybı ve terminal solunum yolları içine çalıştıran kalanına bağlı olarak 10-20 arasında ml elde etmek için aşılanan normal tuzlu su, ilk 50 ml yaygındır. Bundan başka alikotları sıvı daha büyük bir kısmının geri döner. </li><li> Operatör, her zaman steril serum fizyolojik aspire etkili emme sağlanması da dahil olmak üzere, entübasyon öncesi bronkoskop kontrol etmelisiniz. Emme kaybı yaygın nedeniyle bronkoskop veya emme cihazı ile bağlantıları etrafında tüp veya sızıntı dolaşmasının oluşabilir. </li><li> Manuel emme sırasında, ideal hava yolu daraltmak gerekir. Emme tekrarlı havayolunu çökerse, BAL döner bir valf mekanizması azalır ve lokal inflamasyon ve kanama olasılığı daha yüksektir vardır: Bu da solunum yolları m yaparcevher sinirli ve öksürük daha muhtemeldir. En uygun RML Subsegmental şube seçimi ve düşük emiş basıncı kullanarak bu nedenle önemlidir hem de. </li><li> Hava sürekli aspire edildiğinde bronkoskopa şırınganın bağlantısını ve aynı zamanda uzak solunum yollarında bronkoskop konumunu yeniden kontrol edin. Bu tekrarlayan bir sorun olup olmadığını, işlem sonrası bronkoskop kendisi hiçbir delik olmadığından emin olmak. </li><li> Sigara içenlerin BAL nedeniyle sık sık hücre içi partikül varlığı koyu. Sigara içenler daha az iyi bronkoskopi tahammül ve artan öksürük olabilir. </li><li> Tercih BAL hacim verimi&gt; 100 ml. &gt; 150 ml&#39;lik bir verimi mükemmeldir. Biz&gt; 170 ml herhangi bir verim yaşamamış. Hücre verimi ve BAL hacim verimi arasında doğrusal bir ilişki yoktur. </li><li> &lt;100 ml Verimleri, bizim deneyim, öksürük, göğüs ağrısı ve ateş gibi yan etkilere yol olasılığı daha yüksektir. Biz &lt;100 verimle konular Reco olması ml öneririzsol lateral pozisyonda Vered, bu kalan akciğer sıvısının drenajını yardımcı olabilir. </li><li> Klinik temas yan etkileri sağlamak için 1-5 gün içinde konu ile yapılmalıdır. </li><li> Midazolam sedasyon İngiltere&#39;de deneklerin% 50 ve Malavi &lt;% 5 &lt;için kullanılır. Midazolam doğrudan tolerabiliteyi artırmak için görünmüyor, bazı operatörler sedasyon bazen konu ile tutarlı (ve güven verici) diyalogu sürdürmek ters olabileceğini hissediyorum. </li><li> Bizim tecrübelerimize göre, bu teknik ile önemli bir öğrenme eğrisi vardır. Örneğin doktor ve hemşire arasında koordinasyon zaman alır ve verimleri öğrenme sürecinin başında genellikle düşüktür. </li><li> HIV pozitif kişilerde, biz profilaktik prebronchoscopy antibiyotik kullanın. </li></ol>

Arka plân Fiberoptik bronkoskopi klinik uygulama için geliştirilmiş olan ve yaygın olarak hem tanı hem de tedavi 1,2 kullanılır. Bronkoalveoler lavaj (BAL) yapışkan olmayan hücreler ve mukoza yüzeyinden akciğer astar sıvıyı ortadan kaldırır, biyopsi ve mukozal dokuları submukozal örnek için kullanılır. Araştırma ortamlarında, BAL akciğer içinde, (akciğer makrofajlar 3-5) doğuştan gelen bir hücre (B-ve T-hücreleri, 6) örnekleme ve humoral (immunoglobulin 7) yanıt sağlar. BAL uluslararası araştırma amaçlı 8 için kabul edilir ve 1999 yılından bu yana teknik grubumuz tarafından İngiltere ve Malavi&gt; 1.000 konularda yapılmıştır. Bu deney, insan pnömokok taşıyıcı 9,17, biyokütle duman 5, HIV ve aşılama ve ilave tedavi de dahil olmak üzere Stu pnömokok antijene, doğal hücresel ve humoral bağışıklık tepkilerinin çalışmalarda bu tekniği kullanmakpnömoni kurtarma içine ölür. Bizim teknik aranan sıvıya nazik el vakum kullanır, bu dönen BAL hacmini maksimuma çıkarmak ve BAL sıvısı içindeki hücrelerin yapısını ve fonksiyonunu korumak için kirpikli epitelya az kesme kuvveti uygulamak için tasarlanmıştır. Bir araştırma bağlamında BAL tanı veya tedavi parası kazanmak hedefliyoruz solunum ve yoğun bakım doktorları (sık olarak adlandırdığı bronşiyal yıkama, yıkamalar lavaj veya BAL) tarafından uygulanan farklı bir tekniği kullanır. Araştırma teknik hücreler hasat ve ex vivo kültür içinde hücrelerin büyümesini kolaylaştırmak için canlılığını korumak için tasarlanmıştır. Bu nedenlerle araştırma tekniği (genellikle 200 ml sırayla) daha büyük bir hacim instillate kullanır ve hücre hasarını azaltmak için el emme kullanır. Hastalar, lokal anestezi verilir bilinçli sedasyon (midazolam) sunulan ve minimal yan etkileri ile de işlemi tolere edilir. Sözlü ve yazılı subjektift bilgi toleransını arttırır ve yazılı bilgilendirilmiş onam 1. zorunludur. Hedef Genel amacı prosedür güvenli ve etkili olmasıdır. Denekler herhangi bir fizyolojik rahatsızlık yaşamazsınız ve operatörler sürekli konulardan BAL 100 ml aşan toplamak gerekir. İşlemden sonra, denekler minimal yan etkileri deneyim gerekir. Güvenlik Konunun güvenlik her şeyden önemlidir. Konular dikkatle net katma ve dışlama kriterleri kullanılarak seçilir. Bu protokol, potansiyel riskler ve bunları hafifletmek için atılan adımlardan bir açıklamasını içerir. Araştırma bronkoskopi Kontrendikasyonları mutlak veya göreceli olarak ifade edilebilir, ve ve dışlama kriterleri olarak çalışma protokolüne dahil edilmiştir. Bizim konular tüm tam sağlığını sağlamak için taranır. Mutlak kontrendikasyonlarkararsız servikal omurga, tepkisiz hipoksi, kararsız angina, kanama diyatezi, ve malign kardiyak aritmi içerir. Artmış komplikasyon oranları ile ilişkili durumlar dahil olmak üzere Göreceli kontrendikasyonlar, şunlardır: Genel: kötü kooperatif konu 1, önemli bir genel tıbbi bir sorun, örneğin epilepsi, lidokain veya midazolam, hamilelik, kötü beslenme olumsuz tepkiler bilinen önceki tolere bronkoskopi,. Solunum:, hiperkapni, kararsız astım 1, önemli ölçüde bozulmuş solunum fonksiyonu 1 (FEV 1 &lt;1 L), pulmoner hipertansiyon hipoksi [havanın &lt;% 94 üzerine doygunlukları (sats)]. Kardiyovasküler: üremi, miyokard enfarktüsü 1, vena kava tıkanıklığı 6 hafta içinde. Diğer: immunmodulatör (bizim grup düzenli olarak bu prosedürü gerçekleştirirHIV pozitif kişilerde dure). Araştırma için BAL ile ilgili riskler - Bakınız Tablo 1.

<table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:966px;" width="966">
	<tbody>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:25px;">
			Material
			</td>
			<td style="width:161px;height:25px;">
			Company
			</td>
			<td style="width:151px;height:25px;">
			Catalogue Number
			</td>
			<td style="width:410px;height:25px;">
			Comments
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Fibreoptic bronchoscope, light and suction source
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Surgical gown, sterile gloves
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Sphygnomanometer
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For continuous patient monitoring
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Pulse oximeter
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For continuous patient monitoring
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			3 lead ECG monitor
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For continuous patient monitoring
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Nasal oxygen delivery 2-4l/min
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Lidocaine 10% spray (Xylocaine)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			AstraZeneca
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For topical anaesthesia
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Lidocaine hydrochloride 2%
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For topical anaesthesia
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Lidocaine gel (Instillagel)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Farco-Pharma, Germany
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Normal saline, sterile 200ml
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Warm to 30oC
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			10ml taper-end syringe (x10)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For administration of lidocaine
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Intravenous cannula 18G
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For administration of midazolam
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Midazolam
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For sedation
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Flumazenil
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Reversal of benzodiazepine sedation (emergency use only)
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			60ml taper-end syringes (x4)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For normal saline injection and BAL fluid withdrawal.
			May require connector to attach to the injection port of the bronchoscope
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Sterile gauze swab
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Vernaid, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Sterile container for BAL fluid
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			See text and comments
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Siliconised glass bottles reduce macrophage adherence. Alternatively, 50ml centrifuge tubes may be used (total capacity 200ml)
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Sigmacote
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			SL2
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Only if siliconised glass bottles used. NB: Harmful and flammable. If used, follow precautions detailed in manufacturer&#8217;s MSDS
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Centrifuge
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;"></td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			At least 4x50ml tube capacity. Refrigeration to 4oC preferred.
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Shandon Cytospin centrifuge
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Thermo Scientific, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For differential count only
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			RPMI 1640 medium with L-glutamine
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			R8758
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Fetal bovine serum
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			F6178
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Penicillin-Streptomycin
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			P4333
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Amphotericin B
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			A2942
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Tissue culture plates
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Greiner Bio-One, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			662160
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Glass microscope slides
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For differential count only
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Shandon cytofunnel
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Thermo Scientific, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			A78710003
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For differential count only
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Shandon cytoclip
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Thermo Scientific, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			59910052
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For differential count only
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Hemacolor staining set (fixative, red and blue reagents)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Merck, Germany
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			111661
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Use according to manufacturer&#8217;s instructions
			</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bronchoalveolar lavage (bal) for research; obtaining adequate sample yield

Biz mukozal yüzeyinden yapışmayan hücreler ve akciğer astar sıvıyı çıkarmak için manuel el düzenlenen emme kullanarak bronkoalveoler lavaj (BAL) ile fiberoptik bronkoskopi için bir araştırma tekniği açıklar. Araştırma ortamlarında, BAL akciğer içinde doğuştan (akciğer makrofaj) örnekleme, hücre (B-ve T-hücreleri) ve humoral (immunoglobulin) yanıt sağlar. BAL uluslararası araştırma amaçlı kabul edilen ve 1999 yılından bu yana teknik grubumuz tarafından İngiltere ve Malavi&gt; 1.000 konularda yapılmıştır. Bizim teknik aranan sıvıya nazik el vakum kullanır, bu BAL hacim döndü üst düzeye çıkarmak ve BAL sıvısı içindeki hücrelerin yapısını ve fonksiyonunu korumak ve büyümeyi kolaylaştırmak için canlılığını korumak amacıyla kirpikli epitelya az kesme kuvveti uygulamak için tasarlanmıştır ex vivo kültür içinde hücreleri. Araştırma tekniği bu nedenle daha büyük hacimli eklentileri kullanırtillate (tipik olarak 200 ml sırayla) ve hücre hasarı azaltmak için elle emme kullanmaktadır. Hastalar, lokal anestezi verilir bilinçli sedasyon (midazolam) sunulan ve minimal yan etkileri ile de işlemi tolere edilir. Sözlü ve yazılı konu bilgi toleransını arttırır ve yazılı bilgilendirilmiş onam zorunludur. Konunun güvenlik her şeyden önemlidir. Konular dikkatle net katma ve dışlama kriterleri kullanılarak seçilir. Bu protokol, potansiyel risklerin bir açıklama ve bunları azaltmak için atılan adımları, kontrendikasyonlar listesi öncesi ve işlem sonrası kontrolleri, yanı sıra hassas bronkoskopi ve laboratuvar tekniklerini içerir.

Iyi klinik sonuç 100 ml üzerinde bir BAL hacmi ve en deneyimli olan bir konu, küçük bir rahatsızlık (bkz. Tablo 1) vardır. Bu rahat ve kooperatif konuyu gerektirir. Klinisyen, (Malzemeleri) tam hazır emin olmak ve anlayış gönüllü doğru olmalıdır. (Diferansiyel sayımı da dahil olmak üzere), hücresel verimle arası ve denekler arası değişkenlik tarif edilmiştir. Sağlıklı deneklerden Diferansiyel hücre sayımları, tipik haliyle&gt;% 90, nötrofillerin az sayıda ile makrofajlar (&lt;% 2) ve lenfositler (% 5-10) &#39;dir. Mikroskop lamı üzerine santrifüj BAL hücreleri bu bilgiyi (Şekil 1) elde etmek için bir diferansiyel nükleer boyası ile boyanmış olabilir. Şekil 1 &#39;de, BAL hücreleri sabit ve üreticinin talimatlarına göre Hemacolor lekeleme kullanılarak boyandı edilmiştir. En az 300 hücre makrofajlar için güvenilir sonuçlar elde etmek için sayılmalıdır,nötrofiller ve lenfositler, nadir hücre tipleri için 500 hücre. <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Tehlike </td><td> Risk </td><td> : Bu protokolde İndirimli </td></tr><tr><td colspan="3"> Bronkoskopi ve BAL 1, 14 Etkisi </td></tr><tr><td> Hafif rahatsızlık </td><td> &lt;25% 14 # </td><td> Uygun analjezi ve sedasyon. Konuya güvenen ve şefkatli bir yaklaşım. </td></tr><tr><td> Epistaksis </td><td> &lt;% 1 # </td><td> Sadece nazal entübasyon için hafif basınç. Eğer konu rahatsızlık veya daralmış diyafram - Oral entübasyon yerine. </td></tr><tr><td> Endobronşiyal kanama (hemoptizi) </td><td> &lt;% 0.1 * 15 </td><td> Hiçbir biyopsi alınır. Bronkoskopi sırasında dikkatli kontrolü - solunum mukozasını kaçınarak. </td></tr><tr><td> Nausadet, kusma ve aspirasyon pnömonisi </td><td> &lt;0.02% 14, # </td><td> Katı gıda&gt; 4 saat uygulama öncesi 1 Oruç. Yeterli lokal anestezi. İşlem sırasında Semirecumbent konumu. Dikkatli sonrası prosedür gözlem. </td></tr><tr><td> Ateş </td><td> 0.01 14-1% # 16 </td><td> Inflamasyon ile ilgilidir ve BAL maksimal toplama minimize edebilir. Tek lob BAL sadece. # </td></tr><tr><td> Boğaz burun / boğaz ve ses kısıklığı </td><td> &lt;25% 14 # </td><td> Burun, boğaz ve gırtlak (öksürük minimize) Yeterli lokal anestezi. </td></tr><tr><td> Enfeksiyon </td><td> &lt;Negatif HIV içinde% 0.1, HIV pozitif 14, # 1% </td><td> Standart bronkoskop yıkama prosedürü 1.. Tek lob BAL sadece. # Enfeksiyonun erken tanınması: 1 saat An içinde klinik muayene1-5 gün sonra bronkoskopi d klinik temas. </td></tr><tr><td> Göğüs ağrısı / öksürük </td><td> &lt;0.2% 14, # </td><td> Tek lob BAL sadece. Maksimal BAL koleksiyonu. # </td></tr><tr><td colspan="3"> İlaçların etkileri: lidokain, midazolam </td></tr><tr><td> Aritmi </td><td> * Çok nadir </td><td rowspan="3"> 5 mg / maksimum kullanılan 14 lidokain kg. Telkin ısındı normal tuzlu su. # Pulse oksimetre (oksijen takviyesi ile sats&gt;% 90), işlem boyunca kardiyak izleme. Benzodiazepin antagonisti (flumazenil) hemen kullanılabilir. </td></tr><tr><td> Dezoryantasyon / ajitasyon </td><td> &lt;% 0.1 † # </td></tr><tr><td> Kardiyo solunum depresyonu </td><td> * Çok nadir </td></tr></tbody></table> * 1.500 &#39;den fazla araştırma işlemleri Grubumuzun deneyimli değil. † idiosdaha çok doza bağımlı bir tepki daha yncratic. # 1500 üzerinde araştırma işlemleri Bizim grubun deneyim. Tablo 1. Araştırma için BAL ile ilgili riskler. Bu tehlike ya da risk içeren ve bu anlatılan tekniği kullanarak nasıl azaltılır. Bronkoskopi / BAL ve kullanılan herhangi bir tıbbi ilaçların etkileri etkileri dahildir. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/4345/4345fig1highres.jpg" width="500" /> Şekil 1. BAL makrofaj ve sıra Nötrofiller gösteriliyor Bir Mikroskop Slayt. BAL hücreleri, metanol içinde sabitlendi ve Hemacolor kırmızı (eosin-Y) ve mavi (gök B) ile boyanmış edilmiştir.

Watch this Scientific Journal Video about Bronchoalveolar Lavage BAL for Research; Obtaining Adequate Sample Yield at JoVE.com

Bronchoalveolar Lavage BAL for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

Biz düşük basınçlı emme kullanarak fiberoptik bronkoskopi ve bronkoalveoler lavaj için bir araştırma tekniği açıklar. Bu teknik, akciğer bronkoalveoler yüzeylerinden bağışıklık hücreleri hasat etmek için kullanılır. Lokal anestezik ve hafif bilinçli sedasyon (midazolam) kullanılır. Denekler prosedür iyi ve deneyim minimal yan etkileri tolere.

Araştırma Bronkoalveoler Lavaj (BAL); Yeterli Örnek Verim Alma

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy with bronchoalveolar lavage (BAL) using manual hand held suction in order to remove ...

bronchoalveolar-lavage-bal-for-research-obtaining-adequate-sample

Research

JoVE Journal

Medicine

Bronchoalveolar Lavage (BAL) for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

73.0K Görüntüleme.  National Institute for Health Research.  Biz düşük basınçlı emme kullanarak fiberoptik bronkoskopi ve bronkoalveoler lavaj için bir araştırma tekniği açıklar. Bu teknik, akciğer bronkoalveoler yüzeylerinden bağışıklık hücreleri hasat etmek için kullanılır. Lokal anestezik ve hafif bilinçli sedasyon (midazolam) kullanılır. Denekler prosedür iyi ve deneyim minimal yan etkileri tolere. 

Video: Bronchoalveolar Lavage BAL for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

Generation of Comprehensive Thoracic Oncology Database - Tool for Translational Research

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer specimens and clinical data to be available to researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database also captures a large volume of genomic and proteomic data obtained from various tumor tissue studies. A team of clinical and basic science researchers, a biostatistician, and a bioinformatics expert was convened to design the database. Variables of interest were clearly defined and their descriptions were written within a standard operating manual to ensure consistency of data annotation. Using a protocol for prospective tissue banking and another protocol for retrospective banking, tumor and normal tissue samples from patients consented to these protocols were collected. Clinical information such as demographics, cancer characterization, and treatment plans for these patients were abstracted and entered into an Access database. Proteomic and genomic data have been included in the database and have been linked to clinical information for patients described within the database. The data from each table were linked using the relationships function in Microsoft Access to allow the database manager to connect clinical and laboratory information during a query. The queried data can then be exported for statistical analysis and hypothesis generation.

A thoracic oncology database was developed to serve as a comprehensive repository for clinical and laboratory data for the purposes of translational research. The database will serve translational cancer researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database is adaptable to other cancer models, as well as other human diseases.

Kapsamlı Göğüs Onkoloji Veritabanı Üretimi - Translasyonel Araştırma Aracı

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer ...

Tıp

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

Odak Serebral İskemi Erken İskemik Tolerans tetikleyebilecek bir Yeterli Önkoşullama Uyarıcı olarak bilateral Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a valuable tool for understanding ovarian cancer, their use has many limitations. These include the lack of heterogeneity and the plethora of genetic alterations associated with extended in vitro passaging.&#160;Here we describe a method that allows for rapid establishment of primary ovarian cancer cells form solid clinical specimens collected at the time of surgery. The method consists of subjecting clinical specimens to enzymatic digestion for 30 min. The isolated cell suspension is allowed to grow and can be used for downstream application including drug screening. The advantage of primary ovarian cancer cell lines over established ovarian cancer cell lines is that they are representative of the original specific clinical specimens they are derived from and can be derived from different sites whether primary or metastatic ovarian cancer.

This study describes a detailed method for isolation and characterization of primary ovarian cancer cells from solid clinical specimens. Ovarian cancer clinical specimens are subjected to enzymatic digestion to obtain viable, fibroblast-free epithelial ovarian cancer (EOC) cells highly suitable for downstream applications.

Katı Örneklerinin From İlköğretim Yumurtalık Kanseri Hücreleri alma için yöntem

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human specimens, precious samples must be handled with the greatest care in order to ensure integrity of organs, tissues, and cells to the highest degree. Unfortunately, tissue processing by definition requires extraction of tissues from the host, a change which can cause great cellular stress and have major repercussions on subsequent analyses. These stresses could result in the specimen being no longer representative of the site from which it was retrieved. Therefore, a strict protocol must be adhered to while processing these specimens to ensure representativeness. The desired assay(s) must also be taken into consideration in order to ensure that an optimal technique is used for sample processing. Outlined here is a protocol for tissue retrieval, processing and various analyses which may be performed on processed tissue in order to maximize downstream production from limited tissue samples.

Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.

Translational Kanser Araştırma İnsan Doku ile Çalışma

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

Lavage-induced Surfactant Depletion in Pigs As a Model of the Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS)

Various animal models of lung injury exist to study the complex pathomechanisms of human acute respiratory distress syndrome (ARDS) and evaluate future therapies. Severe lung injury with a reproducible deterioration of pulmonary gas exchange and hemodynamics can be induced in anesthetized pigs using repeated lung lavages with warmed 0.9% saline (50 ml/kg body weight). Including standard respiratory and hemodynamic monitoring with clinically applied devices in this model allows the evaluation of novel therapeutic strategies (drugs, modern ventilators, extracorporeal membrane oxygenators, ECMO), and bridges the gap between bench and bedside. Furthermore, induction of lung injury with lung lavages does not require the injection of pathogens/endotoxins that impact on measurements of pro- and anti-inflammatory cytokines. A disadvantage of the model is the high recruitability of atelectatic lung tissue. Standardization of the model helps to avoid pitfalls, to ensure comparability between experiments, and to reduce the number of animals needed.

Lavage-induced Surfactant Depletion in Pigs As a Model of the Acute Respiratory Distress Syndrome ARDS

Repeated pulmonary lavages in anesthetized pigs induce lung injury resembling major aspects of human acute respiratory distress syndrome (ARDS). For this purpose the lungs are repeatedly lavaged with 0.9% saline at 37 &#176;C. The goal of the protocol is a reproducible mitigation of gas exchange and hemodynamics for research in ARDS.

Akut Solunum Sıkıntısı Sendromu Modeli itibariyle Domuzların lavaj kaynaklı Surfaktan tükenmesi (ARDS)

Various animal models of lung injury exist to study the complex pathomechanisms of human acute respiratory distress syndrome (ARDS) and evaluate future ...

Sample Preparation for Computed Tomography-based Three-dimensional Visualization of Murine Hind-limb Vessels

Blood vessels are complex networks with tree-like structures, and vascular networks are essential for maintaining both circulation and maintaining organ function. Clarifying the mechanism of blood vessel formation is therefore extremely useful for elucidating developmental processes and pathological mechanisms. Murine hind-limb vessels are often used as a model for physiological and pathological angiogenesis. Evaluation is mainly performed via a two-dimensional method using tissue sections. However, methods for evaluating three-dimensional (3D) vascular morphology are particularly limited. This paper introduces a method for visualizing murine hind-limbs using computed tomography (CT). Radiation-opaque resin is injected through the descending aorta, and whole vessels are filled with dye. By adjusting the time of dye injection, arterial-specific filling is also possible, and samples can be obtained with any micro-X-ray CT device. This contrast method provides a basic technique for the 3D evaluation of murine blood vessels in the lower extremities. Furthermore, this method can be used to visualize all blood vessels below the diaphragm and evaluate blood vessels in the abdominal organs.

Here, we describe a visualization and quantification method for murine hind-limb vessels using micro-X-ray computed tomography.

Murine Hind-limb Damarlarının Bilgisayarlı Tomografi Tabanlı Üç Boyutlu Görselleştirilmesi için Örnek Hazırlık

Blood vessels are complex networks with tree-like structures, and vascular networks are essential for maintaining both circulation and maintaining organ ...

Technique for Obtaining Mesenchymal Stem Cell from Adipose Tissue and Stromal Vascular Fraction Characterization in Long-Term Cryopreservation

Human mesenchymal stem cells derived from adipose tissue have become increasingly attractive as they show appropriate features and are an accessible source for regenerative clinical applications. Different protocols have been used to obtain adipose-derived stem cells. This article describes different steps of an improved time-saving protocol to obtain a more significant amount of ADSC, showing how to cryopreserve and thaw ADSC to obtain viable cells for culture expansion. One hundred milliliters of lipoaspirate were collected, using a 26 cm three-hole and 3 mm caliber syringe liposuction, from the abdominal area of nine patients who subsequently underwent elective abdominoplasty. The stem cells isolation was carried out with a series of washes with Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline (DPBS) solution supplemented with calcium and the use of collagenase. Stromal Vascular Fraction (SVF) cells were cryopreserved, and their viability was checked by immunophenotyping. The SVF cellular yield was 15.7 x 105 cells/mL, ranging between 6.1-26.2 cells/mL. Adherent SVF cells reached confluence after an average of 7.5 (&#177;4.5) days, with an average cellular yield of 12.3 (&#177; 5.7) x 105 cells/mL. The viability of thawed SVF after 8 months, 1 year, and 2 years ranged between 23.06%-72.34% with an average of 47.7% (&#177;24.64) with the lowest viability correlating with cases of two-year freezing. The use of DPBS solution supplemented with calcium and bag resting times for fat precipitation with a shorter time of collagenase digestion resulted in an increased stem cell final cellular yield. The detailed procedure for obtaining high yields of viable stem cells was more efficient regarding time and cellular yield than the techniques from previous studies. Even after a long period of cryopreservation, viable ADSC cells were found in the SVF.

The present protocol describes an improved methodology for ADSC isolation resulting in a tremendous cellular yield with time gain compared to the literature. This study also provides a straightforward method for obtaining a relatively large number of viable cells after long-term cryopreservation.

Uzun Süreli Kriyoprezervasyonda Yağ Dokusundan Mezenkimal Kök Hücre Elde Etme Tekniği ve Stromal Vasküler Fraksiyon Karakterizasyonu

Human mesenchymal stem cells derived from adipose tissue have become increasingly attractive as they show appropriate features and are an accessible ...

Isolation of Murine Intestinal Mesenchyme Resulting in a High Yield of Telocytes

The murine small intestine, or colon mesenchyme, is highly heterogenous, containing distinct cell types including blood and lymphatic endothelium, nerves, fibroblasts, myofibroblasts, smooth muscle cells, immune cells, and the recently identified cell type, telocytes. Telocytes are unique mesenchymal cells with long cytoplasmic processes, reaching a distance of tens to hundreds of microns from the cell body. Telocytes have recently emerged as an important intestinal stem cell niche component, providing Wnt proteins that are essential for stem and progenitor cell proliferation.
Although protocols on how to isolate mesenchyme from the mouse intestine are available, it is not clear whether these procedures allow the efficient isolation of telocytes. Isolating telocytes efficiently requires special protocol adjustments that would allow dissociation of the strong cell-cell contact between telocytes and neighboring cells without affecting their viability. Here, available intestinal mesenchyme isolation protocols were adjusted to support the successful isolation and culture of mesenchyme containing a relatively high yield of viable single-cell telocytes.
The obtained single-cell suspension can be analyzed by several techniques, such as immunostaining, cell sorting, imaging, and mRNA experiments. This protocol yields mesenchyme with sufficiently conserved antigenic and functional properties of telocytes, and can be used for several applications. For example, they can be used for co-culture with mouse- or human-derived organoids to support organoid growth with no growth factor supplementation, to better reflect the situation in the original tissue.

Here, we present a protocol to isolate murine intestinal mesenchyme, including telocytes. These can be used for several applications, such as co-culture with mouse or human-derived organoids, to support growth and better reflect the situation in the original tissue.

Murin bağırsak mezenkiminin izolasyonu yüksek telosit verimi ile sonuçlanır

The murine small intestine, or colon mesenchyme, is highly heterogenous, containing distinct cell types including blood and lymphatic endothelium, nerves, ...

Preparing Zanba-Stir-Fried Tiebangchui (TBC) Sample for Processing Technology Optimization

To begin a single factor experiment to compare Tiebangchui, or TBC slice thickness, for processing technology optimization, prepare five test groups each having 30 grams of TBC, but different slice thickness. Then weigh 90 grams of Zanba, which is three times as much as that of the TBC in each group. Set the temperature and the time of the automatic stir fry machine to 140 degrees Celsius and 40 minutes respectively.After the machine has heated up to the set temperature, add the weighed amounts of TBC and Zanba into the machine. Then using a high speed smashing machine, grind the Zanba stir-fried TBC into powder. Next, weigh two grams of Zanba stir-fried TBC powder in a conical flask.To the sample in the flask, add three milliliters of ammonia solution followed by 50 milliliters of a mixture of isopropyl alcohol and ethyl acetate, having a volume ratio of one is to one. After recording the weight of the conical flask with the contents, ultrasonicate the TBC sample for 30 minutes at 220 volts and 40 kilohertz maintaining a temperature below 25 degrees Celsius. Weigh the conical flask with the sample once again after the ultrasonic extraction.Make up for the lost weight by adding the isopropyl alcohol and ethyl acetate mixture mentioned previously, and filter the sample solution. Evaporate 25 milliliters of the filtrate to dryness using a rotary evaporator at 40 degrees Celsius. Then dissolve the residue in five milliliters of a solution of 0.05 hydrochloric acid in methanol.Filter the solution through a 0.2 micron syringe filter, and analyze it by performing high performance liquid chromatography, or HPLC. Calculate the contents of the MDA and DDAs in different processing products according to the standard curve. Calculate the comprehensive score based on the results via the critic method.Following the method demonstrated above, compare the amounts of Zanba, processing temperatures, and times for processing technology optimization. The results of the single factor tests revealed that the comprehensive scores of Zanba stir-fried TBC were highest when the sliced thickness is two centimeters, the amount of Zanba is three times, the processing temperature is 120 degrees Celsius, and the processing time is 60 minutes. The results revealed the range of slicing thickness, amount of Zanba, processing temperature, and processing time to be used for future experiments.

İşleme Teknolojisi Optimizasyonu için Zanba-Stir-Fried Tiebangchui (TBC) Numunesinin Hazırlanması

LC-MS Kullanarak Gözyaşı Proteomikleri için İnvaziv Olmayan Biyobelirteç Keşfi

A Protein Suspension-Trapping Sample Preparation for Tear Proteomics by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

Tear fluid is one of the easily accessible biofluids that can be collected non-invasively. Tear proteomics has the potential to discover biomarkers for several ocular diseases and conditions. The suspension trapping column has been reported to be an efficient and user-friendly sample preparation workflow for the broad application of downstream proteomic analysis. Yet, this strategy has not been well-studied in the analysis of human tear proteome. The present protocol describes an integrated workflow from clinical human tear samples to purified peptides for non-invasive tear protein biomarker research using mass spectrometry, which provides insights into disease biomarkers and monitoring when combined with bioinformatics analysis. A protein suspension trapping sample preparation was applied and demonstrated the discovery of tear proteome with fast, reproducible, and user-friendly procedures, as a universal, optimized sample preparation for human tear fluid analysis. In particular, the suspension trapping procedure outperformed in-solution sample preparation in terms of peptide recovery, protein identification, and shorter sample preparation time.

Yazar Spotlight: Proteomik Araştırma için Standartlaştırılmış Bir Protokol Kullanarak Gözyaşı Sıvısı Analizini Geliştirme 

This protocol describes a method for collecting tear samples using Schirmer strips and an integrated quantitative workflow for discovering non-invasive tear protein biomarkers. The suspension trapping sample preparation workflow enables fast and robust tear sample preparation and mass spectrometric analysis, resulting in higher peptide recovery yields and protein identification than standard in-solution procedures.

Sıvı Kromatografisi-Tandem Kütle Spektrometrisi ile Gözyaşı Proteomiği için Bir Protein Süspansiyonu-Tutucu Numune Hazırlama

Tear fluid is one of the easily accessible biofluids that can be collected non-invasively. Tear proteomics has the potential to discover biomarkers for ...