Bu araştırma NIH / NIDDK hibe 1K01DK079019A2 (PT) tarafından desteklenmiştir.

1. Fare Aşılama için bakteri Hazırlık Aşağıdaki aseptik koşullar altında yapılmalıdır. <ol><li> Kapakları biri 17 x 100 mm polipropilen tüpler atın ve taze Luria broth (LB) medya 3 ml ekleyin. Otoklavlanmış ipuçlarını kullanarak, gerginlik CP1 2 bazı dondurulmuş bakteri gliserol stok almak ve LB ortamı içeren tüpe kültürünün küçük bir miktar transfer. Oksijen yine tüp girebilir, böylece tüp kapak değiştirin - kültür aerobik koşullar altında büyüyebilir gerekmektedir. 37 Sıra tüp ° gecede 220 rpm&#39;de bir sallayarak inkübatör C. </li><li> Ertesi gün, 3 ml LB ortamı ile yeni bir tüp vermek üzere gece boyunca kültür 5 ul aktarmak ve 37 ° C &#39;de bir gece boyunca kuluçka makinesi içinde statik koşullar altında büyüyebilir </li><li> Günde aa 50 ml tüp içinde 3 taşıma kültürün 40 ul, 40 ml LB ortamı her içeren. 37 ° C sabit inkübatör gecede yerleştirin. </li><li> Açın ve 4 ° C&#39;ye santrifüj ayarlayınBir kez santrifüj son sıcaklığa ulaştığını, 40 ml Nalgene santrifüj tüpüne her 40 ml kültürü aktarmak. </li><li> Gerektiğinde LB medya ile ses seviyesini ayarlamak - santrifüj dengelemek için tüpleri tartılır. 20 dakika boyunca 6000 rpm&#39;de tüpler Spin. </li><li> Dikkatlice süpernatant kaldırmak ve yavaşça 40 ml steril PBS bakteriyel pelet askıya. </li><li> PBS ile adım 1.5 tekrarlayın. </li><li> Süpernatantı kapalı aspire ve 500 ul steril PBS içinde bakteri askıya. 1.5 ml mikrofuge&#39;de tüpüne çözümü aktarın. Süspansiyonu 10 ul alın ve buz gibi soğuk PBS 990 ul seyreltin. Aşılama için gerekli hacim belirlemek için OD 420 nm okumak için bir spektrofotometre kullanın. Uygun miktarda belirlemek için buz gibi soğuk PBS içinde pelet askıya: OD 420 nm sayısı (ml) alın ve bakteriyel pelet [ex tahmini hacmi çıkarın. OD 420 nm = 0.545, pelet yaklaşık 0.075 ml. 0,545-0,075 = 0,470]. </li><li> 10. Bakteriyel süspansiyon ul ve di kaldırma990 ul buz gibi soğuk PBS içinde ud. OD 420 nm okuyun. Hedefi 1.000 seyreltilmiş süspansiyonu ± .010 bir OD 420 nm değeri elde etmektir. Sizin seyreltme sayısı bu hedefin üzerinde ise, süspansiyon daha fazla hacim kazandırmak ve başka bir okuma almak. Numarası altında ise 0,990 ardından istediğiniz okuma elde edilinceye kadar erteleme ve tekrar OD 420 nm okuma aşağı spin. </li></ol> 2. Hayvan Enfeksiyon Fareler (5-7 haftalık, her grupta on) Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME) &#39;den satın alındı. <ol><li> Fare bir pleksiglas odasında izofluran% 1-4 solunması ile anestezi ve yatık kadar izlenir. </li><li> Bir seferde bir fare bir cam Hamilton şırınga (1.5-2.0 cm uzunluğunda) değiştirilmiş 30 G iğne takılı bir polietilen (PE10) kateter ile kateterizasyon ile bakterilerin instilasyonu için alınır. Kateter iğne merkeze yerleştirilir. Fare Plac olduğunued anestezi altında dorsal yüzeyi üzerinde bir burun konisi kullanılarak yapılmaktadır. </li><li> Fare penis penil üretra girişinde yağlanması için kullanılan hafif basınç ve pamuklu çubuk üzerine yağ bolca tarafından çekilmektedir. </li><li> 10 ul fosfat-tamponlu 1 x 10 8 bakteri içeren tuzlu kateterizasyon anestetize farelerin üretra içine katılmaktadır. </li><li> Bakteri bağlanma sağlamak için acil idrara çıkma ve önlemek için bakteri giriş sonra fareler pleksiglas bölme içinde 15 dakika süreyle bir anestezi altındaki bir durumda muhafaza edilir. </li><li> Fare onların tekrar kafeslerine yerleştirildi ve sonraki 24 saat boyunca izlenir. </li></ol> 3. Davranış Testi Fare öncesinde enfeksiyon (bazal) ve gün 3, 7, 14, 21 ve enfeksiyon sonrası 28 üzerinde test edildi. Referans hiperaljezi ve dokunsal allodini karın 11,12 ve plantar r uygulanan von Frey filamentleri kullanılarak test edildiarka pençe 13 egion. Test-saati günlük sabit bir de perfomed edildi, standart metodoloji ve tüm hayvanların tek deneyci testi kullanılmıştır. Grupların Kör test hayvan modellerinde davranış bazlı test ağrı ile ilgili sınırlamalar ile mücadele için kullanılmıştır. 0.04 arasında kuvvetler, 0.16, 0.4, 1.0 ve 4.0 g (Stoelting, ABD) ile beş ayrı von Frey filamentlerin çekilme yanıtların karın ve frekans uygulanmıştır hesaplanmıştır. <ol><li> Alışma sürecinden bir 30 dakika süre sonra, fareler bir paslanmaz çelik tel ızgara taban ile evde yapılan bireysel pleksiglas odacığı (6 x 10 x12 cm) yerleştirilmiştir. </li><li> Referans hiperaljezi ve dokunsal allodini beş von Frey filamentleri kullanılarak test edildi. Her filament toplam 10 kez 5 sn bir uyarıcılar arası süre ile 1-2 saniye uygulandı ve tüyleri kuvvet artan düzende test edildi. </li><li> Her bir fılaman, prostat Genel çevresinde alt karın bölgesine uygulanır vebakım duyarsızlaştırma önlemek veya etkilerini &quot;rüzgar&quot; Bu bölgedeki farklı alanlarda teşvik götürüldü. Filamentler 10 kez toplam uyarımlar arasında en az 5 saniye aralıklarla 1-2 saniye için kuvvet artan sırada uygulanmıştır. </li><li> Davranış üç tip filament stimülasyon olumlu bir yanıt olarak kabul edilir: karın 1) keskin retraksiyonu; 2) hemen yalama veya filament stimülasyon alan kazıma; 3) atlama. </li><li> Tepki frekansı olumlu yanıt yüzdesi (10 üzerinden, 10 =% 50 örneğin 5 karşılıklar) olarak hesaplandı ve data cevabı frekans ortalama yüzdesi ± SE olarak rapor edildi </li><li> 25&#39;den fazla pozitif toplam taban yanıtları Hayvanlar çalışmanın dışında tutulmuştur. </li><li> Dokunsal allodini 0.04 güçleri, 0.16, 0.4, 1.0 ve 4.0 g ile von Frey filamentleri kullanılarak arka pençenin plantar bölgeye üzerinde test edildi. Medyan% 50 geri çekme eşiği (5) yukarı-aşağı tuşlarını kullanarak değerlendirildifilaman hafif bir açı kadar test 0.04 g filaman ile başlatılan yöntem arka pençenin plantar yüzeye dik olarak uygulanır. Filament olumlu bir yanıt gözlenmiştir kadar artan sırayla test edildi. Filament pozitif tepki testi pençe pençe ya yalama keskin bir geri çekilme ya olarak tanımlandı. Olumlu bir yanıt kaydedildi zaman bir sonraki daha zayıf filaman uygulandı, ve bir negatif cevap gözlendi, sonra bir sonraki daha güçlü bir filaman uygulanmıştır. </li><li> Açıklanan deneyler ve metodoloji incelenen ve onaylanan Northwestern Üniversitesi hayvan bakımı ile ve komite kullanabilirsiniz edilmiştir. </li></ol>

<ol>
	<li>Yamamoto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+epidemiology+of+uropathogenic+Escherichia+coli.">Molecular epidemiology of uropathogenic Escherichia coli.</a> Journal of infection and chemotherapy official journal of the Japan Society of Chemotherapy. 13, 68-73 (2007).</li><li>Rudick, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uropathogenic+Escherichia+coli+induces+chronic+pelvic+pain.">Uropathogenic Escherichia coli induces chronic pelvic pain.</a> Infect. Immun. 79, 628-635 (2011).</li><li>Pontari, M. A., Ruggieri, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+in+prostatitis/chronic+pelvic+pain+syndrome.">Mechanisms in prostatitis/chronic pelvic pain syndrome.</a> The Journal of urology. 172, 839-845 (2004).</li><li>Schaeffer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+practice.+Chronic+prostatitis+and+the+chronic+pelvic+pain+syndrome.">Clinical practice. Chronic prostatitis and the chronic pelvic pain syndrome.</a> The New England journal of medicine. 355, 1690-1698 (2006).</li><li>Rudick, C. N., Schaeffer, A. J., Thumbikat, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+prostatitis+induces+chronic+pelvic+pain.+American+journal+of+physiology.">Experimental autoimmune prostatitis induces chronic pelvic pain. American journal of physiology.</a> Regulatory, integrative and comparative physiology. 294, R1268-R1275 (2008).</li><li>Elkahwaji, J. E., Ott, C. J., Janda, L. M., Hopkins, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+for+acute+bacterial+prostatitis+in+genetically+distinct+inbred+strains.">Mouse model for acute bacterial prostatitis in genetically distinct inbred strains.</a> Urology. 66, 883-887 (2005).</li><li>Hultgren, S. J., Porter, T. N., Schaeffer, A. J., Duncan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+type+1+pili+and+effects+of+phase+variation+on+lower+urinary+tract+infections+produced+by+Escherichia+coli.">Role of type 1 pili and effects of phase variation on lower urinary tract infections produced by Escherichia coli.</a> Infect. Immun. 50, 370-377 (1985).</li><li>Jarrell, J., Giamberardino, M. A., Robert, M., Nasr-Esfahani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bedside+testing+for+chronic+pelvic+pain:+discriminating+visceral+from+somatic+pain.">Bedside testing for chronic pelvic pain: discriminating visceral from somatic pain.</a> Pain research and treatment. 2011, 692102 (2011).</li><li>Jarrell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demonstration+of+Cutaneous+Allodynia+in+Association+with+Chronic+Pelvic+Pain.">Demonstration of Cutaneous Allodynia in Association with Chronic Pelvic Pain.</a> J. Vis. Exp. (28), e1232 (2009).</li><li>Giamberardino, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viscero-visceral+hyperalgesia:+characterization+in+different+clinical+models.">Viscero-visceral hyperalgesia: characterization in different clinical models.</a> Pain. 151, 307-322 (2010).</li><li>Laird, J. M., Martinez-Caro, L., Garcia-Nicas, E., Cervero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+visceral+pain+and+referred+hyperalgesia+in+the+mouse.">A new model of visceral pain and referred hyperalgesia in the mouse.</a> Pain. 92, 335-342 (2001).</li><li>Laird, J. M., Souslova, V., Wood, J. N., Cervero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficits+in+visceral+pain+and+referred+hyperalgesia+in+Nav1.8+(SNS/PN3)-null+mice.">Deficits in visceral pain and referred hyperalgesia in Nav1.8 (SNS/PN3)-null mice.</a> J. Neurosci. 22, 8352-8356 (2002).</li><li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw.">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of neuroscience. 53, 55-63 (1994).</li><li>Schaeffer, A. J., Schwan, W. R., Hultgren, S. J., Duncan, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+type+1+pilus+expression+in+Escherichia+coli+to+ascending+urinary+tract+infections+in+mice.">Relationship of type 1 pilus expression in Escherichia coli to ascending urinary tract infections in mice.</a> Infect. Immun. 55, 373-380 (1987).</li><li>Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+bacterial+inflammation+of+the+mouse+prostate.">Acute bacterial inflammation of the mouse prostate.</a> The Prostate. 72, 307-317 (2012).</li><li>Rivero, V. E., Cailleau, C., Depiante-Depaoli, M., Riera, C. M., Carnaud, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-obese+diabetic+(NOD)+mice+are+genetically+susceptible+to+experimental+autoimmune+prostatitis+(EAP).">Non-obese diabetic (NOD) mice are genetically susceptible to experimental autoimmune prostatitis (EAP).</a> Journal of autoimmunity. 11, 603-610 (1998).</li><li>Pakarainen, T., Zhang, F. P., Makela, S., Poutanen, M., Huhtaniemi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testosterone+replacement+therapy+induces+spermatogenesis+and+partially+restores+fertility+in+luteinizing+hormone+receptor+knockout+mice.">Testosterone replacement therapy induces spermatogenesis and partially restores fertility in luteinizing hormone receptor knockout mice.</a> Endocrinology. 146, 596-606 (2005).</li><li>Taguchi, O., Kojima, A., Nishizuka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+prostatitis+after+neonatal+thymectomy+in+the+mouse.">Experimental autoimmune prostatitis after neonatal thymectomy in the mouse.</a> Clinical and experimental immunology. 60, 123-129 (1985).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

UPEC ile fare prostat enfeksiyonu bakteriyel prostatit, CP / CPPS patogenezinde veya kronik inflamasyon bir predispozan olay olarak dahil olabilir olayların in vivo modelleme için sağlar. Yöntemler kadın idrar yolu enfeksiyonu 7,14 in UPEC modellerde edebiyat büyük bir gövde üzerine bakteriyel hazırlanması ve instillasyon beraberlik için nitelendirdi. Modeli potansiyel aşı adayları ve immün modülasyon mekanizmalarının test patogenezinde çalışmak için geniş uygulanabilirliği v...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Kültür tüpleri </td><td> BD Falcon </td><td> 352059 </td></tr><tr><td> LB Broth Miller </td><td> EMD </td><td> EM1.10285.0500 </td></tr><tr><td> Nalgene Santrifüj Tüpleri </td><td> Thermo </td><td> 3118-0050 </td></tr><tr><td> İzofluran </td><td> Butler Schein </td><td> NDC 11695-6776-1 </td></tr><tr><td> Kateter iğne 30G </td><td> Hamilton </td><td> 91030 </td></tr><tr><td> PE10 boru </td><td> BD intramedic </td><td> 427400 </td></tr><tr><td> Von Frey filamentler </td><td> Stoelting </td><td> 58025-31 </td></tr></tbody></table>

measurement of tactile allodynia in a murine model of bacterial prostatitis

Üropatojenik Escherichia coli (UPEC) idrar yolu enfeksiyonları ve bakteriyel prostatit 1 önemli bir rol oynamaktadır patojenlerdir. Biz son zamanlarda UPEC kronik pelvik ağrı 2, Kronik prostatit / kronik pelvik ağrı sendromu (CP / CPPS) 3,4 bir özelliği başlatılmasında önemli bir role sahip olduğunu göstermiştir. Klinik UPEC ile prostat enfeksiyonu doku hasarı ve otoimmünite 5 mekanizmalarının başlatılması içerebilir mekanizmalar yoluyla kronik ağrı başlatmak ve kurabilir. Prostat UPEC patogenezini anlamak için bir meydan okuma manipülasyon prostat bezinin nispi erişilememesi olduğunu. Böylece de prostat bir artan enfeksiyon oluşturma erkek farelere UPEC bir klinik suşu vermek üzere, daha önce anlatılan intraüretral enfeksiyon yöntemiyle 6 kullanılmıştır. Burada, biz ba standartlaştırılması için protokoller tarifgibi bakteri perfüze anestetize erkek fareler catheterizing için işlem olarak cterial inokulum 7. CP / CPPS öncelikle dokunsal allodini 4 varlığı ile karakterizedir. Davranış testleri ifade viseral ağrı 8-10 kaynaklanan kutanöz hiperaljezi kavramına dayanmaktadır. Visseral dokularda bir irritabl odak normal olmayan ağrılı uyaranlar (allodini) için abartılı bir tepki veren Kutanöz ağrı eşikleri azaltır. Yatan visseral ağrının şiddeti ile artış eğilimindedir anormal yanıtları cilt sonucu normal kuvvet uygulanması. Bu UPEC bakteri ile bir tek enfeksiyonuna yanıt olarak zaman içinde dokunsal allodini ölçmek için von Frey lifler kullanmak NOD / ShiLtJ farelerde yöntemi açıklanmaktadır.

<html> Biz bakteriyel enfeksiyon üzerine kronik ağrı varlığı için NOD / ShiLtj ve C57BL/6J erkek farelerde incelenmiştir. Erkek fareler (5-7 haftalık) üretra (Şekil 1) içine salin ya da bakteri ile damlatıldı edildi. Salin-coşturup C57BL/6J fareler ve UPEC ile enfekte C57BL/6J farelerin von Frey filamentleri ile pelvik bölgeye mekanik uyarılması deney 28 günlük kurs (Şekil 1) sırasında değişmedi bir tepki frekansı sonuçlandı. Buna karşılık, UPEC-enfekte NOD...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis at JoVE.com

Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

Prostat enfeksiyonu kronik prostatit pelvik ağrı arabuluculuk katkıda bulunan bir faktör olabilir. Biz standardize edilmiş bakteriyel inokulum, zamanla farelerde dokunsal allodini ölçmek için erkek farelerde ve metodoloji üretra içine bakteri instilasyon hazırlama prosedürü açıklanmaktadır.

Bakteriyel Prostatit bir fare modelinde Dokunsal allodini Ölçümü

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently ...

measurement-tactile-allodynia-murine-model-bacterial

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

15.7K Görüntüleme.  Northwestern University Feinberg School of Medicine. Prostat enfeksiyonu kronik prostatit pelvik ağrı arabuluculuk katkıda bulunan bir faktör olabilir. Biz standardize edilmiş bakteriyel inokulum, zamanla farelerde dokunsal allodini ölçmek için erkek farelerde ve metodoloji üretra içine bakteri instilasyon hazırlama prosedürü açıklanmaktadır.