Bu çalışma Weihong Lin için araştırma destekleri (NIH / NIDCD 009.269, 012.831 ve ARRA idari ek NIH hibe) tarafından desteklenmiştir. Biz özellikle kamera çekimi ve işleme yaptığı teknik yardım için UMBC de Bay Tim Ford teşekkür ederim. Ayrıca videoya, kendi ekipman yardım için Olympus America Inc Dr Daphne Blumberg, UMBC de Bayan Chere Petty ve Bay Nicholas McCollum teşekkür etmek istiyorum.

1. Fare Burun Hazırlık Bu çalışmada, yetişkin C57BL / 6 fareleri kullanılmıştır plan. Tüm hayvan bakımı ve işlemleri University of Maryland, Baltimore County Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. 1.1 paraformaldahyde sabit fareler burun Edinme <img src="/files/ftp_upload/50538/50538fig1.jpg" alt="Şekil 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50538/50538fig1highres.jpg"/> Şekil 1. Bir fare kafatası kemikleri bir:. Kafatasının dorsal görünüş B:. Kaldırıldı çene ile kafatasının alttan görünüşü. Kafatası 40 günlük bir fareden hazırlandı. Bireysel kemikler daha iyi görünüm için renkli. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50538/50538fig1large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <ol><li> Inci takip bireysel fareler düzeltmek için transcardially serpmekLin ve diğ. e protokolü, (2008) 16. Kısaca, fareler,% 3 paraformaldehit içeren bir fosfat tamponlu sabitleştirici ve ardından 0.1 M fosfat tampon maddesi (PB, 30-50 mL) ile transkardiyal perfüze tribromoethanol (Avertin 250 mcg / g vücut ağırlığı) ile derin bir anestezi uygulanmıştır 19 mM L-Lizin monohidroklorür ve% 0.23 sodyum m-periodat (yaklaşık 35-50 ml) eklenmiştir. Bir de hayvan perfüzyon 35 vallahi makaledeki adımları takip edebilirsiniz. </li><li> Çene kesilmiş (ya da alt çene) ve kafasına cilt kaldırmak için bir makas kullanın. </li><li> Vücudun geri kalanından tüm kafa ayırın. </li><li> Damak çıkarın. Ayrıca, temiz ve Şekiller 1A ve 1B &#39;de gösterilen örnek almak için kafatası yüzeyi üzerinde kalan bağ dokusu ve kas çıkarın. </li><li> Bir diseksiyon mikroskobu altında, beyin ve koku ampuller kapsayan kafatası kemiği kaldırmak. Aşırı doku ve kemikleri keserek. Yokte, beyin ve burun bağlı kalır hangi genişletilmiş doku hazırlanması için, sadece kafatası kemikleri kaldırılır. Immünohistokimyasal deneyler için, doku, 1.5 saat boyunca post-sabit ve gece boyunca% 25 sukroz ile (PBS), 0.1 M fosfat tamponlu salin aktarılmıştır. Burun doku tamponlu sükroz çözeltisi içinde birkaç kez batırarak diseksiyon boyunca nemlendirilmiş tutulmalıdır. </li></ol> 1.2 taze ötenazi fareler burun Kazanılması <ol><li> Bağımsız farenin temiz bir kafes aktarılır ve son nefes sonra servikal dislokasyon 5 dakika izledi CO2 gazı, maruz bırakılmıştır. Burun dokusunda kan azaltmak için, göğüs açık ve kan boşalması için kalp kesmek için bir makas kullanın. </li><li> % 25 sakaroz ile sonrası tespit ve cryoprotection dışında, 1.1.5 için adımları 1.1.2 tekrarlayın. Numune, nemlendirilmiş bir muhafaza ve Tyrode tuz çözeltisi ihtiva eden (mM olarak) ile muhafaza edilmelidir: 140 NaCl, 5 KCI, 1 MgCl2, 1 CaCl2, 10 Na piruvat, 10 D-glikoz, 10 N-2-hydroxyethylpiperazine-N&#39;-2-etansülfonik asit tampon maddesi (HEPES, pH 7.4 &#39;de ayarlandı). Alternatif olarak, Kimwipes bir parça kat diseksiyon sırasında numune altında Tyrode çözümü ve yer ile ıslatın ve bazen hücre ve dokuların canlılığını korumak için nemlendirilmiş tutmak için Tyrode çözüm numune daldırma veya doku üzerine bazı çözüm bırakın . </li></ol> 2. Kesici, Ön Vomer ve Çene Kemik Temizleme <ol><li> Bir ventral bakış açısından başlar. Vomer kemik bulun ve kemik ventral çoğunlukla kırmak için dişli bir rongeur veya forseps kullanarak uzunluğu boyunca vomer kemik kırmak. </li><li> Dişli forseps kullanarak, yavaşça vomeronasal organı (VNO) uzak kemik parçaları dolaşan tarafından vomer kemik kırık parçaları çıkarın. Not,, eski bir aydan az, ya da Çevre Bakanlığı ile ilgilenen yalnızca fareler için bu iki steps atlanabilir. </li><li> Forseps ile sıkıca kafa tutun. Kesici dişler ve iki kesici dişler ve vomer kemik arasında ön maksilla eklemli bölgenin hem ön kısmını kırmaya rongeur kullanın. </li><li> Kadar dorsal elmacık plaka seviyesine elmacık kemer için sadece ön bölgede sağ maksilla ventral kısmı kırın. </li><li> Dorsal bakış açısı için burun ters çevirin. Dorsal elmacık plaka sağ maksilla anterior kırmak için rongeur kullanın. Elmacık plaka tüm sağ maksilla ön gevşek olmalıdır. Yavaşça maksilla altında yatan herhangi bir burun doku ayırmak için ince forseps kullanın ve sonra yavaşça kemik parçası kaldırarak. </li><li> Sol kesici ve sol ön maksilla gevşetin ve burun kemiği çıkarıldıktan sonra bunları kaldırmak için adımları 2.4 ve 2.5 tekrarlayın. </li></ol> 3. Burun kemik ve dorsal Zigomatik Plaka Kaldırma <ol><li> Yeniden dişli forseps veya rongeur kullanınburun kemikleri sadece kaudal frontal kemiklerin kalan taşıyın. Kemik bu parça çıkardıktan sonra, burun kemiğinin kuyruk parçası forseps kullanarak kavradı edilebilir. </li><li> Elmacık plakasına bağlı olan elmacık kemer, ön kısmı kırmak için rongeur kullanın. </li><li> Elmacık plaka dorsal sonu lateral kenarında ince forseps alın ve yavaşça kemik çevirmek ve çıkarın. Kemik gevşek değilse, kaldırılması için gevşetmek için yavaşça kelepçe için rongeur kullanın. </li><li> Sağ ve sol burun kemikleri arasındaki medial dikiş gevşetmek için ince forseps veya bir jilet kullanın. </li><li> Sağ burun kemiğinin kuyruk sonuna kavrama dişli forseps kullanın. Yavaşça doku yatan ayırmak için iki yana kemik hareket ettirin. Bu yan, kemik yana hareket için burun kemiğinin kaudal üçüncü boyunca forseps hareket için yararlıdır. Burun kemiği ayıran olarak, yavaş yavaş kuyruk ucundan kemik kaldırın. </li><li> T iseo burun kemiği hafifçe kaldırdı, ince solunum epitel doku ile kaplı olduğu kemik bir yan yüzeyleyen ortaya çıkarmak için yanal kemik yatırın. Yavaşça burun kemiği bu doku serbest bırakmak için ince forseps kullanın. Burun kemiği kaldırmak için devam edin. Kemik tamamen temel dokusu ayrılır zaman, rostral sonunda burun kemik kesmek için makas kullanın. </li><li> Sol burun kemiğin çıkarılması için adımları 3.1, 3.5 ve 3.6 tekrarlayın. </li><li> Adımlar burun sol tarafı için 3.2 ve 3.3 tekrarlayın. </li></ol> 4. Yanal Zigomatik Plaka Kaldırma <ol><li> Bir anda elmacık plaka bir tarafı çıkarın. Ya elmacık plaka ilk kaldırılabilir. </li><li> Bir ventral bakış açısından, ara zigomatik ark ulaşana kadar zigomatik ark aşağı maksilla kırmak. </li><li> Dorsal bakış açısından, yavaşça zigomatik ark kapmak ve ileri ve yanal kaldırın. Elmacık plaka hala herhangi bir dokuya bağlıysa, ince almakforseps ve hafifçe doku ve kemik arasındaki bağlantıları sever. </li><li> Burun bölgesinin, diğer tarafta elmacık plaka için tekrarlayın. </li></ol> 5. Orbit Kemik Temizleme <ol><li> Bir ventral bakış açısından, burun azı dişleri arasındaki palantine kemik kırmak. </li><li> Burnun her iki tarafında 3 azı dişleri ve maksilla kırmak için rongeur kullanın. </li><li> Burnun her iki tarafında konka için ventral ve posterior kemik kalan kalın parçaları kırmak ve çıkarın. </li></ol> 6. Etmoid kemik Temizleme <ol><li> Konkalar için kuyruk çıkıntılı etmoid kemik herhangi bir bölümünü kırmak. Bu konka kapsayan etmoid kemik ince parçalar çıkarırken konka doku kaybını önlemek için gereklidir. </li><li> Burun sağ taraf için, etmoid kemiğin ön kenarında ince forseps yerleştirin ve yavaşça çıkarın. Kemiğin bir kısmı kalacak, tüm kadar bu işlemi tekrarlayınkonka kapsayan ince kemik kaldırıldı. Konka kemikler hazırlıkları çoğunda kaldırılması gerekmez. Yaşlı farelerde, kribriform plaka kırılgan hale gelir. Nazal doku cryosectioning gerekli ise, kemik kaynaklanan olası hasarı azaltmak için ince forseps ile plakanın küçük parçalar çıkarın. </li><li> Burun sol tarafında için adım 6.2) tekrarlayın. </li><li> Önce kesit için kalan kemik parçaları çıkarın. Not: hayvanlarda daha septum kemik bir yaşındaki, posterodorsal bölge biraz daha kalın ve sert. Güzel bir forseps kullanarak bu bölümünü kaldırabilirsiniz. Septum kemik ve astar epitel doku dorsal kısmını ayırmak için kemiğin her iki tarafına forseps ucu yerleştirin. Kemik kapmak ve örnek tutmak için forseps bir çift kullanın. Septum alt kıkırdak kısmı üst kemik kısmı kırmak ve yavaşça çıkarmak için forseps başka bir çift kullanın. </li></ol><ol><li> Aspiratör vakum pompası ayarlayın. </li><li> Bir gömme kalıp burun yerleştirin. Ekim medyada Batmak burun. </li><li> Burun dokusu içinde hava kabarcığı kaldırmak için bir vakum kullanın. Bu işlem 5 dakika kadar sürer. </li><li> Hava kabarcığı çıkarmadan sonra, istenen yönde doku ayarlayın. </li><li> OCT ve kuru buz kullanarak kalıp doku dondurma. Gömülü doku sonra hemen cryosectioned veya -80 ° C ileride kullanmak üzere saklanabilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Naclerio, R. M., Pinto, J., Assanasen, P., Baroody, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observations+on+the+ability+of+the+nose+to+warm+and+humidify+inspired+air.">Observations on the ability of the nose to warm and humidify inspired air.</a> Rhinology. 45, 102-111 (2007).</li><li>Bjermer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nose+as+an+air+conditioner+for+the+lower+airways.">The nose as an air conditioner for the lower airways.</a> Allergy. 54, 26-30 (1999).</li><li>Firestein, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+the+olfactory+system+makes+sense+of+scents.">How the olfactory system makes sense of scents.</a> Nature. 413, 211-218 (2001).</li><li>Bryant, B., Silver, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chemisthesis: The common chemical sense. , (2000).</li><li>Gross, E. A., Swenberg, J. A., Fields, S., Popp, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+morphometry+of+the+nasal+cavity+in+rats+and+mice.">Comparative morphometry of the nasal cavity in rats and mice.</a> J. Anat. 135, 83-88 (1982).</li><li>Halpern, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+organization+and+function+of+the+vomeronasal+system.">The organization and function of the vomeronasal system.</a> Annu. Rev. Neurosci. 10, 325-362 (1987).</li><li>Rodolfo-Masera, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Su+l'esquoestizenza+di+un+particulare+organo+olfacttivo+nel+setto+nasale+della+cavia+e+di+altri+roditori.">Su l'esquoestizenza di un particulare organo olfacttivo nel setto nasale della cavia e di altri roditori.</a> Arch. Ital. Anat. Embryol. 48, 157-212 (1943).</li><li>Levai, O., Strotmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projection+pattern+of+nerve+fibers+from+the+septal+organ:+DiI-tracing+studies+with+transgenic+OMP+mice.">Projection pattern of nerve fibers from the septal organ: DiI-tracing studies with transgenic OMP mice.</a> Histochemistry and Cell biology. 120, 483-492 (2003).</li><li>Storan, M. J., Key, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Septal+organ+of+Gruneberg+is+part+of+the+olfactory+system.">Septal organ of Gruneberg is part of the olfactory system.</a> J. Comp. Neurol. 494, 834-844 (2006).</li><li>Restrepo, D., Arellano, J., Oliva, A. M., Schaefer, M. L., Lin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+views+on+the+distinct+but+related+roles+of+the+main+and+accessory+olfactory+systems+in+responsiveness+to+chemosensory+signals+in+mice.">Emerging views on the distinct but related roles of the main and accessory olfactory systems in responsiveness to chemosensory signals in mice.</a> Horm. Behav. 46, 247-256 (2004).</li><li>Breer, H., Fleischer, J., Strotmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sense+of+smell:+multiple+olfactory+subsystems.">The sense of smell: multiple olfactory subsystems.</a> Cell Mol. Life Sci. 63, 1465-1475 (2006).</li><li>Munger, S. D., Leinders-Zufall, T., Zufall, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subsystem+organization+of+the+mammalian+sense+of+smell.">Subsystem organization of the mammalian sense of smell.</a> Annu. Rev. Physiol. 71, 115-140 (2009).</li><li>Finger, T. E., St Jeor, V. L., Kinnamon, J. C., Silver, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+of+substance+P-+and+CGRP-immunoreactive+nerve+fibers+in+the+nasal+epithelium+of+rodents.">Ultrastructure of substance P- and CGRP-immunoreactive nerve fibers in the nasal epithelium of rodents.</a> J. Comp. Neurol. 294, 293-305 (1990).</li><li>Papka, R. E., Matulionis, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+substance-P-immunoreactive+nerves+with+the+murine+olfactory+mucosa.">Association of substance-P-immunoreactive nerves with the murine olfactory mucosa.</a> Cell Tissue Res. 230, 517-525 (1983).</li><li>Baraniuk, J. N., Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nasonasal+reflexes,+the+nasal+cycle,+and+sneeze.">Nasonasal reflexes, the nasal cycle, and sneeze.</a> Curr. Allergy Asthma Rep. 7, 105-111 (2007).</li><li>Lin, W., Ogura, T., Margolskee, R. F., Finger, T. E., Restrepo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPM5-expressing+solitary+chemosensory+cells+respond+to+odorous+irritants.">TRPM5-expressing solitary chemosensory cells respond to odorous irritants.</a> J. Neurophysiol. 99, 1451-1460 (2008).</li><li>Ogura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+microvillous+cells+in+the+mouse+main+olfactory+epithelium+and+effect+of+acetylcholine+on+olfactory+sensory+neurons+and+supporting+cells.">Cholinergic microvillous cells in the mouse main olfactory epithelium and effect of acetylcholine on olfactory sensory neurons and supporting cells.</a> J. Neurophysiol. 106, 1274-1287 (2011).</li><li>Finger, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solitary+chemoreceptor+cells+in+the+nasal+cavity+serve+as+sentinels+of+respiration.">Solitary chemoreceptor cells in the nasal cavity serve as sentinels of respiration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100, 8981-8986 (2003).</li><li>Gulbransen, B. D., Clapp, T. R., Finger, T. E., Kinnamon, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nasal+solitary+chemoreceptor+cell+responses+to+bitter+and+trigeminal+stimulants+in+vitro.">Nasal solitary chemoreceptor cell responses to bitter and trigeminal stimulants in vitro.</a> J. Neurophysiol. 99, 2929-2937 (2008).</li><li>Zhao, K., Dalton, P., Yang, G. C., Scherer, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Numerical+modeling+of+turbulent+and+laminar+airflow+and+odorant+transport+during+sniffing+in+the+human+and+rat+nose.">Numerical modeling of turbulent and laminar airflow and odorant transport during sniffing in the human and rat nose.</a> Chemical Senses. 31, 107-118 (2006).</li><li>Ressler, K. J., Sullivan, S. L., Buck, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+zonal+organization+of+odorant+receptor+gene+expression+in+the+olfactory+epithelium.">A zonal organization of odorant receptor gene expression in the olfactory epithelium.</a> Cell. 73, 597-609 (1993).</li><li>Vassar, R., Ngai, J., Axel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+segregation+of+odorant+receptor+expression+in+the+mammalian+olfactory+epithelium.">Spatial segregation of odorant receptor expression in the mammalian olfactory epithelium.</a> Cell. 74, 309-318 (1993).</li><li>Fulle, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+receptor+guanylyl+cyclase+expressed+specifically+in+olfactory+sensory+neurons.">A receptor guanylyl cyclase expressed specifically in olfactory sensory neurons.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92, 3571-3575 (1995).</li><li>Juilfs, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+subset+of+olfactory+neurons+that+selectively+express+cGMP-stimulated+phosphodiesterase+(PDE2)+and+guanylyl+cyclase-D+define+a+unique+olfactory+signal+transduction+pathway.">A subset of olfactory neurons that selectively express cGMP-stimulated phosphodiesterase (PDE2) and guanylyl cyclase-D define a unique olfactory signal transduction pathway.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 94, 3388-3395 (1997).</li><li>Lin, W., Arellano, J., Slotnick, B., Restrepo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odors+detected+by+mice+deficient+in+cyclic+nucleotide-gated+channel+subunit+A2+stimulate+the+main+olfactory+system.">Odors detected by mice deficient in cyclic nucleotide-gated channel subunit A2 stimulate the main olfactory system.</a> The Journal of Neuroscience: The Official journal of the Society for Neuroscience. 24, 3703-3710 (2004).</li><li>Ishii, T., Omura, M., Mombaerts, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocols+for+two-+and+three-color+fluorescent+RNA+in+situ+hybridization+of+the+main+and+accessory+olfactory+epithelia+in+mouse.">Protocols for two- and three-color fluorescent RNA in situ hybridization of the main and accessory olfactory epithelia in mouse.</a> J. Neurocyt. 33, 657-669 (2004).</li><li>Lee, A. C., Tian, H., Grosmaitre, X., Ma, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+patterns+of+odorant+receptors+and+response+properties+of+olfactory+sensory+neurons+in+aged+mice.">Expression patterns of odorant receptors and response properties of olfactory sensory neurons in aged mice.</a> Chemical Senses. 34, 695-703 (2009).</li><li>Packard, A., Schnittke, N., Romano, R. A., Sinha, S., Schwob, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DeltaNp63+regulates+stem+cell+dynamics+in+the+mammalian+olfactory+epithelium.">DeltaNp63 regulates stem cell dynamics in the mammalian olfactory epithelium.</a> The Journal of Neuroscience: the official journal of the Society for Neuroscience. 31, 8748-8759 (2011).</li><li>Matthews, J. B., Mason, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+decalcifying+agents+on+immunoreactivity+of+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissue.">Influence of decalcifying agents on immunoreactivity of formalin-fixed, paraffin-embedded tissue.</a> Histochem J. 16, 771-787 (1984).</li><li>Athanasou, N. A., Quinn, J., Heryet, A., Woods, C. G., McGee, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+decalcification+agents+on+immunoreactivity+of+cellular+antigens.">Effect of decalcification agents on immunoreactivity of cellular antigens.</a> J. Clin. Pathol. 40, 874-878 (1987).</li><li>Hegg, C. C., Irwin, M., Lucero, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+store-mediated+signaling+in+sustentacular+cells+of+the+mouse+olfactory+epithelium.">Calcium store-mediated signaling in sustentacular cells of the mouse olfactory epithelium.</a> Glia. 57, 634-644 (2009).</li><li>Spehr, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+role+of+the+main+olfactory+system+in+social+recognition+of+major+histocompatibility+complex+peptide+ligands.">Essential role of the main olfactory system in social recognition of major histocompatibility complex peptide ligands.</a> The Journal of Neuroscience: the official journal of the Society for Neuroscience. 26, 1961-1970 (2006).</li><li>Ma, M., Chen, W. R., Shepherd, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+characterization+of+rat+and+mouse+olfactory+receptor+neurons+from+an+intact+epithelial+preparation.">Electrophysiological characterization of rat and mouse olfactory receptor neurons from an intact epithelial preparation.</a> J. Neurosci. Methods. 92, 31-40 (1999).</li><li>Cygnar, K. D., Stephan, A. B., Zhao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+responses+of+mouse+olfactory+sensory+neurons+using+the+air-phase+electroolfactogram+recording.">Analyzing responses of mouse olfactory sensory neurons using the air-phase electroolfactogram recording.</a> J. Vis. Exp. (37), e1850 (2010).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> J. Vis. Exp. (65), e3564 (2012).</li><li>Lin, W., Margolskee, R., Donnert, G., Hell, S. W., Restrepo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+neurons+expressing+transient+receptor+potential+channel+M5+(TRPM5)+are+involved+in+sensing+semiochemicals.">Olfactory neurons expressing transient receptor potential channel M5 (TRPM5) are involved in sensing semiochemicals.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 2471-2476 (2007).</li><li>Lin, W., Ezekwe, E. A., Zhao, Z., Liman, E. R., Restrepo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPM5-expressing+microvillous+cells+in+the+main+olfactory+epithelium.">TRPM5-expressing microvillous cells in the main olfactory epithelium.</a> BMC Neurosci. 9, 114 (2008).</li><li>Ogura, T., Krosnowski, K., Zhang, L., Bekkerman, M., Lin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemoreception+regulates+chemical+access+to+mouse+vomeronasal+organ:+role+of+solitary+chemosensory+cells.">Chemoreception regulates chemical access to mouse vomeronasal organ: role of solitary chemosensory cells.</a> PLoS One. 5, e11924 (2010).</li><li>Sathyanesan, A., Feijoo, A. A., Mehta, S. T., Nimarko, A. F., Lin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+profile+of+G-protein+&#946;&#947;+subunit+gene+transcripts+in+the+mouse+olfactory+sensory+epithelia.">Expression profile of G-protein &#946;&#947; subunit gene transcripts in the mouse olfactory sensory epithelia.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 7, 84 (2013).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Burada, aşağıdaki doku koruyucu iken sırayla çevreleyen kemik kaldırarak fare burnundan sağlam koku ve solunum doku izole etmek için bir adım-adım prosedürü gösterdi. Dikkatli kemik kaldırma bütün olarak bile en hassas dokuları korumak olduğunu göstermektedir. Biz de sinir bağlantısını korumak için birlikte beyin ve burun dokusu hem izole edildiği bu tekniğin olası değişiklikler, fikir paylaşmak. Bu yeni yöntem, in situ hibridizasyon ile immünohistokimyasal, RNA, daha fazla işle...

Memeli burun boşluğu doku ve farklı fonksiyonlara hizmet organların çeşitli türlerini içerir. Burun boşluğuna, akciğerlere ve dışına hava yolculuğu sağlayan, üst solunum yolu, ve giriş kısmını oluşturur. Solunan hava o da temizlik ya da rahatsız edici ve toksik maddeler ve bulaşıcı mikroorganizmaların 2 kaldırmak için filtreleme olarak sıcaklık ve nem klima 1 uğrar burun boşluğu geçer. Her iki tedavi burun epiteli ve bezleri ve damarlar da dahil olmak üzere subepitelial dokular, tarafından yürütülen ve alt solunum yolları ve akciğer korumak için büyük öneme sahiptir. Solunum ve epitel savunma rolüne ek olarak, nazal doku da geçen hava kimyasal maddelerin geniş bir tespit koku ve trigeminal sistemleri, periferal duyu cihazları içerir. Aktif olduğu sistemine bağlı olarak, burun kimyasalların duyusal algılama ya temin edebilirsinizkoku, tahriş, ya da ağrı 3,4 duygusu. Periferik koku alma sistemi karmaşık ve burun boşluğu içinde çeşitli anatomik olarak ayrılmış koku alma duyu organları oluşur olduğunu. Bunlar arasında, ana koku epiteli (MEB) kemirgenler 5 burun epitel yaklaşık 45-52% oluşturur ve arka bölgede bulunduğu, en büyüğüdür. Anteroventral bölgede, burun septum her tarafında oturup vomeronasal organı 6, ​​olarak bilinen boru yapıların bir çift vardır. Masera 7,8 ve Grüneberg ganglion 9 septal organı olarak bilinen koku duyu nöronlarının iki ek küçük gruplar, sırasıyla, ventral septum ve burun boşluğunun dorsal giriş bölgesine birlikte bulunur. Bu çevresel organlar ayırt edici morfolojik özellikleri, hücre belirteci ifade ve fizyolojik fonksiyonu ile nöro-epitel içerir. Birlikte koku binlerce tespitzarif hassasiyeti 10-12 ile moleküller. Koku alma duyu organları ek olarak, burun boşluğunun diğer duyu sistemleri ev sahipliği yapmaktadır. Bu peptiderjik trigeminal sinir lifleri burun epitelinde, özellikle solunum yolu epitel 13,14 mevcut olduğu bilinmektedir. Bu liflerin bazı rahatsız edici ve zehirli kimyasallar tespit etmek ve bu tür öksürük ve 4,15 hapşırma gibi koruyucu refleksleri başlatmak için sorumludur. Rahatsız edici kokulu ve acı bileşikler de birçoğu trigeminal sinir lifleri 16-19 tarafından innerve tek kimyasal-duyusal hücreler (SCC), bir yeni keşfedilen nüfus ile tespit edilebilir. Bu SCC aynı zamanda bir koruyucu fonksiyon 16-18 hizmet olabileceğini ima, burun boşluğu ve vomeronasal giriş kanallarının giriş bölgesinde daha yüksek yoğunluğa sahip bulunmaktadır. Böylece, burun epitel fonksiyonu, morfolojisi önemli ölçüde farklı olabilir, ve hücre kompozisyon kendi bağlı olarakanatomik yerleri. Hatta tek ve özel epitel içinde, bölgesel farklılıklar vardır. MEB böyle bir örnektir. Karmaşık ve yapılar kıvrılmış MEB hatları çeşitli konka,. Böylece onları nedeniyle, farklı MEB deneyimi farklı hava akış oranlarının bölgelere ve farklı difüzyon ve hava koku moleküllerini 20 kota kullanım oranları. Ayrıca, belirli bir koku reseptörü ifade koku duyu nöronlarının (OSNs) MEB 21,22 bölgeleri etrafından dört birinde yer olduğu bilinmektedir. Bu konumu fark nasıl etkilediğini koku bir OSN cevabı büyük ölçüde bilinmemektedir. Buna ek olarak, bazı nüfus OSN bölgesel olarak tercih sergiler. Guanil siklaz-D (GC-D)-ifade OSNs ectoturbinates 23,24 ve cul-de-sac bölgeler lehine bölgeli dağılımları var. Daha yakın zamanlarda, biz (tr geçici reseptör potansiyeli kanal M5 ifade kanonik OSNs bir alt bulunduPm5) ve tercihli olarak, lateral ve ventral bölgeleri 25 bulunur. Bu sonuçlar MEB tekdüze değildir gösterir. Ancak bu bölgesel farklılıklar koku kodlama nasıl etkilediğini anlaşılamamıştır. Ayrıntılı fizyolojik MEB incelenmesi ve burun mevcut yöntemlerle korunmuş anatomik organizasyonu ile sağlam nazal epitel elde zorluğu ile sınırlı olduğundan bu kısmındadır. Burun epitel ağırlıklı olarak burun, maksilla, damak, elmacık ve etmoid kemikler de dahil olmak üzere kafatası ön kemikleri ile çevrilidir. Yetişkin fare ve diğer kemirgen modellerinde, bu kemikler özellikle yakından bağlantılı nazal doku, hassas konka zarar vermeden kaldırmak zordur ve zordur. Genellikle, kimyasal bazlı yumuşatma immünohistokimyasal, morfolojik ve in situ hibridizasyon çalışmalar için nazal dokuların cryosectioning izin kemikleri yumuşatmak için kullanılan, ancak, bağımlıding hayvanın yaşına, yumuşatma işlemi bir gecede en fazla 7 gün 24,26-28 sürebilir. Bu doku fiksatif korunmuş olması gerekir, çünkü bu tedavi de sınırlıdır. Ayrıca, kimyasal yumuşatma sert ve bazı hassas antikor 29,30 ve immün etkileyebilir. Fizyolojik çalışmalar için, canlı doku gereklidir ve bu nedenle, bu deneyler genellikle izole OSNs veya olan kafatası kemikleri ince ve 17,31,32 yumuşak yenidoğan elde MEB dilim yürütülmektedir. Fizyolojik çalışmalar da bölme kafa 25,33,34 tarafından bütün montaj hazırlıkları yararlanabilirler, ancak burun medial yüzeyi genellikle sadece diğer alanlarda fizyolojik kayıtları sınırlayıcı, kolayca erişilebilir. Burada, korunmuş orijinal anatomik organizasyon ve morfolojisi ile sağlam burun dokuları hazırlamak için etkili, el kemik sıyırma yöntem açıklanmaktadır. Biz sırayla ön en önemli kemikleri çıkarınfareler çok eski olmadıkça ince konka kemikleri sağlam tutmak ve cryosectioning ise neredeyse tamamen sağlam burun epitel ortaya çıkarmak için bir diseksiyon mikroskop altında kafatası gereklidir. Ayrıca, böylece çevresel hem de merkezi devrelerinin aynı anda inceleme kolaylığı, nazal doku ve olfaktor arasındaki bağlantı, hem de beynin geri kalanı korumak için yöntem uzanır. Önerilen yöntem, paraformaldehid sabit, hem de taze, canlı nazal doku hazırlamak için de kullanılabilir. Böylece, yöntem solunum, koku alma ve burun hasar ve hastalık, morfolojik immünohistokimyasal ve fizyolojik çalışmalar kolaylaştırmak için bekleniyor.

<table border="1">
 <tr>
 <td>Name</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments </td>
 </tr>
 <tr>
 	<td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Dissection</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Rongeur, 1.0 mm Jaw width</td>
 <td>World Precision Instruments (WPI)</td>
 <td>501333</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fine forceps, Dumont 3 </td>
 <td>WPI</td>
 <td>503235 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fine forceps, Dumont 55</td>
 <td>WPI</td>
 <td>14099</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fine forceps, Dumont AA</td>
 <td>Fine Science Tools (FST)</td>
 <td>11210-20</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Specimen forceps, Serrated</td>
 <td>VWR</td>
 <td>82027-440</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Operating scissors</td>
 <td>WPI</td>
 <td>501753</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Iris scissors, Straight</td>
 <td>Miltex</td>
 <td>V95-304</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dissection microscope</td>
 <td>Olympus</td>
 <td>SZ40</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>[header]</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Tissue embedding</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Optimum cutting temperature (OCT) compound</td>
 <td>Sakura Finetek</td>
 <td>4583</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Plastic embedding mold</td>
 <td>VWR</td>
 <td>15160-215 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Aspirator vacuum pump</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>09-960-2</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>[header]</td>
 </tr>
 <tr>
 	 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Section staining </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Neutral red</td>
 <td>ACROS Organic</td>
 <td>CAS 553-24-2</td>
 <td>Nuclei staining</td>
 </tr>
</table>

an effective manual deboning method to prepare intact mouse nasal tissue with preserved anatomical organization

Memeli burun karmaşık iç yapıları ile çok fonksiyonlu bir organdır. Burun boşluğu gibi anatomik yerleri, morfolojisi ve fonksiyonlarında belirgin farklılık, koku solunum ve skuamöz epitel gibi çeşitli epitel ile kaplı olduğu. Erişkin farelerde, burun özellikle iç yapıları, ana koku epiteli (MEB) olarak posterior bu olanlara deneysel erişimi sınırlayarak, çeşitli kafatası kemikleri ile kaplıdır. Burada korunmuş anatomik organizasyonu ile neredeyse tüm ve sağlam burun dokuları elde etmek için etkili bir yöntem tarif. Bir mikroskop altında cerrahi aletler kullanarak, sırayla burun doku çevreleyen kafatası kemikleri çıkarın. Bu işlem hem paraformaldehid-sabit ve taze disseke, tenli fare başlarına yapılabilir. Tüm kemik sıyırma işlemi geleneksel kimyasal bazlı de için gerekli deneysel zaman çok daha kısadır 20-30 dk, alırkalsifikasyon. Ayrıca, burun doku hazırlık sağlam ince yatay ya da koronal veya sagittal kesitler elde etmek için önemlidir konka, arasında sıkışan hava kabarcıklarını çıkarmak için kolay bir yöntem mevcut. Bizim yöntem kullanılarak hazırlanabilir burun doku özellikle bölgeye özgü inceleme ve karşılaştırma ilgilendiren çalışmalarda, bütün montaj tüm epitel gözlenmesi, hem morfolojik, immünositokimyasal, RNA in situ hibridizasyon ve fizyolojik çalışmalar için kullanılabilir.

Bu yöntemi kullanarak, biz güvenilir neredeyse tamamen sağlam burun dokusu elde edebilirsiniz. Şekil 2A bir paraformaldehid sabit kafasından yetişkin burun örnek bir görüntü gösterir. Bu örnek olarak, MEB, septal organı, Grüneberg ganglion ve VNO dahil olmak üzere dört alt-koku alma duyu organları, bozulmamış. Ayrıca, solunum epitel ve bu bezleri ve damarlar gibi subepitelial dokular, korunur. Biz başarıyla biz morfolojisi, dağılımı, sinir innervasyon ve çeşitli özel duyusal...

Watch this Scientific Journal Video about An Effective Manual Deboning Method To Prepare Intact Mouse Nasal Tissue With Preserved Anatomical Organization at JoVE.com

An Effective Manual Deboning Method To Prepare Intact Mouse Nasal Tissue With Preserved Anatomical Organization

Korunan Anatomik Örgütü ile bozulmamış Fare Burun Doku hazırlamak için etkili bir Manuel kemik sıyırma Yöntemi

The mammalian nose is a multi-functional organ with intricate internal structures.  The nasal cavity is lined with various epithelia such as olfactory, ...

an-effective-manual-deboning-method-to-prepare-intact-mouse-nasal

Research

JoVE Journal

Biology

34.9K Görüntüleme.  University of Maryland Baltimore County. 

Video: An Effective Manual Deboning Method To Prepare Intact Mouse Nasal Tissue With Preserved Anatomical Organization

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates tension and helps maintains cellular shape.  Although the actin cytoskeleton is a rigid structure, it is a dynamic structure that is constantly remodeling.  A number of proteins can bind to the actin cytoskeleton.  The binding of a particular protein to F-actin is often desired to support cell biological observations or to further understand dynamic processes due to remodeling of the actin cytoskeleton. The actin co-sedimentation assay is an in vitro assay routinely used to analyze the binding of specific proteins or protein domains with F-actin.  The basic principles of the assay involve an incubation of the protein of interest (full length or domain of) with F-actin, ultracentrifugation step to pellet F-actin and analysis of the protein co-sedimenting with F-actin.  Actin co-sedimentation assays can be designed accordingly to measure actin binding affinities and in competition assays.

Proteins bind to filamentous actin (F-actin) through distinct actin binding modules. In this video we demonstrate the procedure of actin co-sedimentation, which is an in vitro assay routinely used to analyze proteins or specific domains that bind F-actin.

Aktin Co-Sedimantasyon Testi; F-Aktin Bağlayıcı Protein Analizi

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Biyoloji

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Combined Immunofluorescence and DNA FISH on 3D-preserved Interphase Nuclei to Study Changes in 3D Nuclear Organization

Fluorescent in situ hybridization using DNA probes on 3-dimensionally preserved nuclei followed by 3D confocal microscopy (3D DNA FISH) represents the most direct way to visualize the location of gene loci, chromosomal sub-regions or entire territories in individual cells. This type of analysis provides insight into the global architecture of the nucleus as well as the behavior of specific genomic loci and regions within the nuclear space. Immunofluorescence, on the other hand, permits the detection of nuclear proteins (modified histones, histone variants and modifiers, transcription machinery and factors, nuclear sub-compartments, etc). The major challenge in combining immunofluorescence and 3D DNA FISH is, on the one hand to preserve the epitope detected by the antibody as well as the 3D architecture of the nucleus, and on the other hand, to allow the penetration of the DNA probe to detect gene loci or chromosome territories 1-5. Here we provide a protocol that combines visualization of chromatin modifications with genomic loci in 3D preserved nuclei.

Here we describe a protocol for simultaneous detection of histone modifications by immunofluorescence and DNA sequences by DNA FISH followed by 3D microscopy and analyses (3D immuno-DNA FISH).

3D Nükleer teşkilatında değişiklikler Eğitim için 3D-korunmuş Tane Çekirdekle ilgili Kombine İmmünofloresan ve DNA FISH

Fluorescent in situ hybridization using DNA probes  on 3-dimensionally preserved nuclei followed by 3D confocal microscopy (3D DNA  FISH) represents the ...

Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some plant cells have rigid cell walls, tough fibers and crystals (calcium oxalate, silica, etc.), and high water content that often disrupt tissue integrity during plant tissue sectioning.
This study establishes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method. This protocol modifies a paraffin-based sectioning technique and improves the integrity of tissue sections from different plants. Plant tissues were embedded in paraffin before sectioning in a cryostat at -16 &#176;C. Sectioning under low temperature hardened the paraffin blocks, reduced tearing and scratching, and improved tissue integrity significantly. This protocol was successfully applied to calcium oxalate-rich Phalaenopsis orchid tissues as well as recalcitrant tissues such as reproductive organs and leaves of rice, maize, and wheat. In addition, the high quality of tissue sections from Hybrid-Cut could be used in combination with in situ hybridization (ISH) to provide spatial expression patterns of genes of interest. In conclusion, this protocol is particularly useful for recalcitrant plant tissue containing high crystal or silica content. Good quality tissue sections enable morphological and other biological studies.

This protocol describes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method that is useful for recalcitrant plant tissues. Good quality tissue sections enable anatomical studies and other biological studies including in situ hybridization (ISH).

Hibrid-Cut: Dirençli Bir Bitki Doku Örnekleri Bir Geliştirilmiş Kesit Yöntemi

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current blastocyst injection protocol. Here we report that a simple rotation of the embryo, and injection through Trans-Inner cell mass (TICM) increased the percentage of chimeric mice from 31% to 50%, with no additional equipment or further specialized training. 26 different inbred clones, and 35 total clones were injected over a period of 9 months. There was no significant difference in either pregnancy rate or recovery rate of embryos between traditional injection techniques and TICM. Therefore, without any major alteration in the injection process and a simple positioning of the blastocyst and injecting through the ICM, releasing the ES cells into the blastocoel cavity can potentially improve the quantity of chimeric production and subsequent germline transmission.

Here we present a protocol to increase chimera production without the use of new equipment. A simple orientation change of the embryo for injection can increase the number of embryos produced, and potentially reduce the timeline to germline transmission.

Trans-iç hücre embriyonik kök hücrelerin kitle enjeksiyon daha yüksek Chimerism oranları için yol açar.

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

Nasal Potential Difference to Quantify Trans-epithelial Ion Transport in Mice

The nasal potential difference test has been used for almost three decades to assist in the diagnosis of cystic fibrosis (CF). It has proven to be helpful in cases of attenuated, oligo- or mono-symptomatic forms of CF usually diagnosed later in life, and of CF-related disorders such as congenital bilateral absence of vas deferens, idiopathic chronic pancreatitis, allergic bronchopulmonary aspergillosis, and bronchiectasis. In both clinical and preclinical settings, the test has been used as a biomarker to quantify responses to targeted therapeutic strategies for CF. Adapting the test to a mouse is challenging and can entail an associated mortality. This paper describes the adequate depth of anesthesia required to maintain a nasal catheter in situ for continuous perfusion. It lists measures to avoid broncho-aspiration of solutions perfused in the nose. It also describes the animal care at the end of the test, including administration of a combination of antidotes of the anesthetic drugs, leading to rapidly reversing the anesthesia with full recovery of the animals. Representative data obtained from a CF and a wild-type mouse show that the test discriminates between CF and non-CF. Altogether, the protocol described here allows reliable measurements of the functional status of trans-epithelial chloride and sodium transporters in spontaneously breathing mice, as well as multiple tests in the same animal while reducing test-related mortality.

Here, we present a protocol to measure nasal potential difference in mice. The test quantifies the function of transmembrane ion transporters such as the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator and the epithelial sodium channel. It is valuable to evaluate the efficacy of novel therapies for cystic fibrosis.

Trans-epitel iyon taşıma farelerde ölçmek için burun potansiyel fark

The nasal potential difference test has been used for almost three decades to assist in the diagnosis of cystic fibrosis (CF). It has proven to be helpful ...

Isolation of Intact Eyeball to Obtain Integral Ocular Surface Tissue for Histological Examination and Immunohistochemistry

Ocular surface (OS) consists of an epithelial sheet with three connected parts: palpebral conjunctiva, bulbar conjunctiva and corneal epithelium. Disruption of OS would lead to keratitis, conjunctivitis or both (keratoconjunctivitis). In experimental animal models with certain genetic modifications or artificial operations, it is useful to examine all parts of the OS epithelial sheet to evaluate relative pathogenetic changes of each part in parallel. However, dissection of OS tissue as a whole without distortion or damage has been challenging, primarily due to the softness and thinness of the OS affixed to physically separate yet movable eyelids and eyeball. Additionally, the deep eye socket formed by the hard skull/orbital bones is fully occupied by the eyeball leaving limited space for operating dissections. As a result, direct dissection of the eyeball with associated OS tissues from the facial side would often lead to tissue damages, especially the palpebral and bulbar conjunctiva. In this protocol, we described a method to remove the skull and orbital bones sequentially from a bisected mouse head, leaving eyelids, ocular surface, lens and retina altogether in one piece. The integrity of the OS sheet was well preserved and could be examined by histology or immunostaining in a single section.

This protocol describes a method for the isolation of the mouse eyeball with eyelid, ocular surface, anterior and posterior segments in relatively intact position.

Histolojik Muayene ve İmmünohistokimya için İntegral Göz Yüzey Dokusu Elde Etmek Için Bozulmamış Göz Küresinin İzolasyon

Ocular surface (OS) consists of an epithelial sheet with three connected parts: palpebral conjunctiva, bulbar conjunctiva and corneal epithelium. ...

The CryoAPEX Method for Electron Microscopy Analysis of Membrane Protein Localization Within Ultrastructurally-Preserved Cells

Key cellular events like signal transduction and membrane trafficking rely on proper protein location within cellular compartments. Understanding precise subcellular localization of proteins is thus important for answering many biological questions. The quest for a robust label to identify protein localization combined with adequate cellular preservation and staining has been historically challenging. Recent advances in electron microscopy (EM) imaging have led to the development of many methods and strategies to increase cellular preservation and label target proteins. A relatively new peroxidase-based genetic tag, APEX2, is a promising leader in cloneable EM-active tags. Sample preparation for transmission electron microscopy (TEM) has also advanced in recent years with the advent of cryofixation by high pressure freezing (HPF) and low-temperature dehydration and staining via freeze substitution (FS). HPF and FS provide excellent preservation of cellular ultrastructure for TEM imaging, second only to direct cryo-imaging of vitreous samples. Here we present a protocol for the cryoAPEX method, which combines the use of the APEX2 tag with HPF and FS. In this protocol, a protein of interest is tagged with APEX2, followed by chemical fixation and the peroxidase reaction. In place of traditional staining and alcohol dehydration at room temperature, the sample is cryofixed and undergoes dehydration and staining at low temperature via FS. Using cryoAPEX, not only can a protein of interest be identified within subcellular compartments, but also additional information can be resolved with respect to its topology within a structurally preserved membrane. We show that this method can provide high enough resolution to decipher protein distribution patterns within an organelle lumen, and to distinguish the compartmentalization of a protein within one organelle in close proximity to other unlabeled organelles. Further, cryoAPEX is procedurally straightforward and amenable to cells grown in tissue culture. It is no more technically challenging than typical cryofixation and freeze substitution methods. CryoAPEX is widely applicable for TEM analysis of any membrane protein that can be genetically tagged.

This protocol describes the cryoAPEX method, in which an APEX2-tagged membrane protein can be localized by transmission electron microscopy within optimally-preserved cell ultrastructure.

Ultrayapısal Olarak Korunmuş Hücrelerde Membran Protein Lokalizasyonunun Elektron Mikroskobu Analizi için CryoAPEX Yöntemi

Key cellular events like signal transduction and membrane trafficking rely on proper protein location within cellular compartments. Understanding precise ...

Application of Passive Head Motion to Generate Defined Accelerations at the Heads of Rodents

Exercise is widely recognized as effective for various diseases and physical disorders, including those related to brain dysfunction. However, molecular mechanisms behind the beneficial effects of exercise are poorly understood. Many physical workouts, particularly those classified as aerobic exercises such as jogging and walking, produce impulsive forces at the time of foot contact with the ground. Therefore, it was speculated that mechanical impact might be implicated in how exercise contributes to organismal homeostasis. For testing this hypothesis on the brain, a custom-designed ''passive head motion'' (hereafter referred to as PHM) system was developed that can generate vertical accelerations with controlled and defined magnitudes and modes and reproduce mechanical stimulation that might be applied to the heads of rodents during treadmill running at moderate velocities, a typical intervention to test the effects of exercise in animals. By using this system, it was demonstrated that PHM recapitulates the serotonin (5-hydroxytryptamine, hereafter referred to as 5-HT) receptor subtype 2A (5-HT2A) signaling in the prefrontal cortex (PFC) neurons of mice. This work provides detailed protocols for applying PHM and measuring its resultant mechanical accelerations at rodents' heads.

The present protocol describes a custom-designed ''passive head motion'' system, which reproduces mechanical accelerations at rodents' heads generated during their treadmill running at moderate velocities. It allows dissecting mechanical factors/elements from the beneficial effects of physical exercise.

Kemirgenlerin Kafalarında Tanımlanmış İvmelenmeler Oluşturmak için Pasif Kafa Hareketinin Uygulanması

Exercise is widely recognized as effective for various diseases and physical disorders, including those related to brain dysfunction. However, molecular ...

An Electroporation Method to Transform Rickettsia spp. with a Fluorescent Protein-Expressing Shuttle Vector in Tick Cell Lines

Rickettsioses are caused by a broad range of obligate intracellular bacteria belonging to the genus Rickettsia that can be transmitted to vertebrate hosts through the bite of infected arthropod vectors. To date, emerging or re-emerging epidemic rickettsioses remain a public health risk due to the difficulty in diagnosis, as diagnostic methods are limited and not standardized or universally accessible. Misdiagnosis resulting from a lack of recognition of the signs and symptoms may result in delayed antibiotic treatment and poor health outcomes. A comprehensive understanding of Rickettsia characteristics would ultimately improve clinical diagnosis, assessment, and treatment with improved control and prevention of the disease. 
Functional studies of rickettsial genes are crucial for understanding their role in pathogenesis. This paper describes a procedure for the electroporation of the Rickettsia parkeri strain Tate's Hell with the shuttle vector pRAM18dSFA and the selection of transformed R. parkeri in tick cell culture with antibiotics (spectinomycin and streptomycin). A method is also described for the localization of transformed R. parkeri in tick cells using confocal immunofluorescence microscopy, a useful technique for checking transformation in vector cell lines. Similar approaches are also suitable for the transformation of other rickettsiae.

An Electroporation Method to Transform Rickettsia spp. with a Fluorescent Protein-Expressing Shuttle Vector in Tick Cell Lines

Electroporation is a rapid, broadly adopted method for introducing exogenous DNA into the genus Rickettsia. This protocol provides a useful electroporation method for the transformation of obligate intracellular bacteria in the genus Rickettsia.

Kene Hücre Hatlarında Floresan Protein İfade Eden Mekik Vektörü ile Rickettsia spp.'yi Dönüştürmek için Bir Elektroporasyon Yöntemi

Rickettsioses are caused by a broad range of obligate intracellular bacteria belonging to the genus Rickettsia that can be transmitted to vertebrate hosts ...