Bu çalışma Kanada Doğa Bilimleri ve Mühendislik Araştırma Konseyi tarafından Discovery Grant RGPIN36481-08 tarafından William G. Bendena&#39;ya desteklenmiştir.

1. Deneysel Organizmaların Hazırlanması <ol><li> Test yapılan organizmaların genç erişkin olmasını sağlamak için tahlile başlamadan 24 saat önce 10 L4 safhalı nematod seçin. Test edilen her mutant veya kontrol nematodu için 10 L4s seçin (kontrol için 10, test için 10). <ol><li> L4 organizmalarını standart yöntemler 26 , 27 kullanarak 24 saat süreyle OP50 Escherichia coli ile tohumlanan standart agar plakaları üzerinde muhafaza edin. Organizmalar sonraki yıkama adımlarında kaybolursa, başlangıç ​​örneği boyutunu arttırarak telafi edin ( örn . 10&#39;dan çok 20 solucan alın). Not: Davranış doğuştan değişken fenotiptir. Her bir suş için üç ayrı gün içinde yöntemi üç kez gerçekleştirin. Tartışma bölümünde vurgulandığı gibi, yeni soylar için ek kontrol soyları ve koşulları ekleyin. </li></ol></li><li> Testten hemen önce deneysel orgaBakteri içermeyen bir agar plakasına yerleştirin ve aşırı miktarda bakteri çıkarmak için nematodların 1 dakika boyunca serbestçe hareket etmesine izin verin. <ol><li> Deney organizmaları deneyden 24 saat önce kontaminasyon koşullarına maruz kaldıysa onları atın. </li></ol></li><li> Mikrosantrifüj tüpüne solucanlar yıkamak için bakteri içermeyen plaka üzerine 1 mL M9 pipetle. </li><li> 1 dakika 3,000 xg&#39;de santrifüjleyin. Solucanlar tüpün altına bir pelet oluşturmalıdır. Solucan peletini bozmadan M9 solüsyonunu aspire. Solucan topağına 1 mL M9 ilave edin, solucanları çözeltiyle karıştırmak için tübü tersine çevirin. </li><li> Adımları 1.4 üç kez tekrarlayın. <ol><li> Aşırı bakteri başlangıçta solucanlarla nakledilirse, toplam 5 kez tekrarlayın. Bakır yiyecek yarışı plakalarına hiçbir bakteri aktarılmamalıdır. Gıda, tahlil plakasına aktarılırsa, doğru veri toplanmasını engelleyecektir. </li></ol></li><li> Nihai yıkamadan sonra, yüzer maddeyi 100&#39;e kadar aspire edin81, L of M9 ve solucan peleti kalır. Dikkat: Açlık ile ilgili davranışlar 30 dakika sonra belirginleşti. Sonuç olarak yıkama adımları tamamlandıktan sonra solucanlar çözeltiden hemen aktarılacaktır. </li></ol> 2. Deney Tabakalarının Hazırlanması <ol><li> Testten iki gün önce standart NGM agar plakaları hazırlayın. <ol><li> Plakalar nemli bir ortamda muhafaza edildiyse, deneyden 3 gün önce agar plakaları yapın. Alternatif olarak, düzgün bir kuruluğun sağlanması için (steril bir ortamda ise) 3-6 saat plakanın kapağını çıkarın. </li></ol></li><li> Kalın bir kalıcı işaretleyiciyle, dış kenar boyunca plakanın alt tarafında bir çizgi oluşturun ve bir orta hat bariyeri oluşturmak için bir başka çizgi oluşturun ( Şekil 1 ). Orta hat bariyeri plakanın her kenarından eşit mesafede olmalıdır. Kesin ölçümler yapmak için bir cetvel kullanın. Bu çizgiler, bakteri ve bakır çözeltisini transfer ederken bir rehber görevi görecektir. ŞartıylaE. coli bakır solüsyonundan önce transfer edilir, bu hatlar göstergeler olarak görev yapar. </li><li> Düzgün çim oluşturmak için bakır bariyerin sadece bir tarafında 50 μL OP50 E. coli tohum plakası ( Şekil 2 ). Bakteriyel konsantrasyon deneyler arasında tutarlı olmalıdır; Bununla birlikte, konsantrasyonda hafif farklılıklara yanıt olarak küçük değişkenlik gözlemlenmiştir. <ol><li> Bakterilerin bakır çözeltisiyle temas etmemesini sağlamak için plakanın altındaki işaretli çizgileri kullanın. Bakır solüsyonun plakanın kenarını çizmesi ve orta hat bariyeri oluşturması koşuluyla, bakteri transferini yaparak bakır solüsyonu gıda kaynağı ile temas etmemelidir. </li></ol></li><li> İkinci bir tabak tabakasını işaretleyin ve onlara hiçbir OP50 E. coli aktarmayın ( Şekil 2 ). Bu plakalar negatif kontrolü değerlendirmeye yarayacak. Bu plakaların da birPlakanın yarısına başlangıç ​​transferini bildirmek için işaretleme. </li><li> Bakterilerin kurutulmasına izin verin ve plakaları 37 ° C&#39;de gece boyunca inkübe edin. 37 ° C inkübatör veya odaya transfer ederken bakteri lekelerinin rahatsız edilmemesine dikkat edin. Aşırı rahatsızlık yiyecek yamasının yerini veya şeklini değiştirebilir. </li></ol> 3. Kemotaksis Deneyi <ol><li> Deney başlama saatinden önce 0.5 M bakır (II) sülfat solüsyonu hazırlayın. Tablet başına 125 μL solüsyon kullanılıyorsa, bu hacmi kullanılan tahlil plakalarının sayısına bağlı olarak ölçeklendirin ( örn. 5 deney plakası, 625 μL). </li><li> Bir dış bakır bariyer oluşturmak için agar kenarında bakır (II) sülfat çözeltisi 100 mcL Pipet. Tabağın işaretli alt kısmı bir rehber görevi görmelidir. </li><li> Orta hat bariyeri oluşturmak için 25 μL bakır (II) sülfat solüsyonu pipetleyin. <ol><li> Bakır (II) sülfat çözeltisinin,Bakteriyel yama ile temasa girmez. Çizgi, agara girinti / çiziklerden dolayı hareketleri etkileyebileceğinden lekeli bir teknik kullanın. </li></ol></li><li> Bakır solüsyonunun tabağa kurutulmasına izin verin. Süre plaka ve laboratuvar koşullarına bağlı olarak değişebilir. Aktarımdan sonra her 5 dakikada bir kuruluk olup olmadığını gözle kontrol edin. Not: Bakır çözeltisi mavimsi renk tonunu gösterir ve kolaylıkla teşhis edilebilir. Kuru- luğu ayırt edebilmek için çözeltiyi plakanın kenarına hafifçe vurmak için bir laboratuar dokusu kullanın . </li><li> Tüpün altından tahlil plakasının bakteri içermeyen yarısına 20 mL&#39;lik solucan peleti pipetleyin. <ol><li> Tahlil plakasına 10 solucanın aktarılmasını sağlayın. İlave solucanlar yanlışlıkla içerildiyse, plakaya hiçbir bakteri eklenmediğinden emin olmak için halokarbon yağı ile toplayarak çıkarın. Her tahlil, tahlil sırasında tutarlı bir sayıda nematod içermelidir. NOT: Çok az solucan transferseDenemeler sırasında yanlış olan, başlangıç ​​örneği boyutunun arttırılması, yıkama ve aktarımlar sırasında ortaya çıkabilecek olası kayıpları azaltacaktır. </li></ol></li><li> Fazla M9&#39;yu bir laboratuar dokusu ile plakadan çıkarın. M9 bakır (II) sülfat solüsyonuyla temas etmemelidir. Dikkat: Bu adımı gerçekleştirirken solucanların ve agar yüzeyinin etkilenmediğinden emin olun. Çok sert kullanıldığında, laboratuar dokusu plakanın agar yüzeyine girinti oluşturabilir ve solucanları kaldırabilir. Yanlışlıkla KimWipe yoluyla ayrılmıştır solucanlar atılmalıdır. </li><li> M9 çözümü kaldırıldıktan ve tüm solucanlar sıvı olmayan lokomotif kalıplara başladıktan sonra, test kronometresini başlatın. <ol><li> Optimum olarak, M9 solüsyonunu bir dakika içinde çıkarın. Temel parametre, sinüzoidal hareketin tanımlanmasıdır. Kurtlar lokomotasyondan farklı, örn. Sinüzoidal olmaktan ziyade, sıvı olduğunda. Deney durdurma saatini deney organının her birine bir kez başlatınIsms parçalanmayı bırakır. </li></ol></li><li> Tahliller plakaları her 30 dakikada bir kontrol edin. <ol><li> Bakteriyel yamalı tahlil plakaları için, 4 saatlik bir süre zarfında yiyecek yamasına ulaşırsa, organizmaları pozitif olarak puanlayın. Negatif kontrol plakaları için, bariyerden geçtiyse organizmaları pozitif olarak puanlayın. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+nervous+system+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 314 (1165), 1-340 (1986).</li><li>Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemosensation+in+C.+elegans+(October+25,+2006).">Chemosensation in C. elegans (October 25, 2006).</a> The C. elegans Research Community, WormBook. , (2006).</li><li>Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant-selective+genes+and+neurons+mediate+olfaction+in+C.+elegans.">Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans.</a> Cell. 74 (3), 515-527 (1993).</li><li>Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotaxis+by+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+identification+of+attractants+and+analysis+of+the+response+by+use+of+mutants.">Chemotaxis by the nematode Caenorhabditis elegans: identification of attractants and analysis of the response by use of mutants.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 70 (3), 817-821 (1973).</li><li>Ramot, D., MacInnis, B. L., Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+temperature-sensing+by+a+single+thermosensory+neuron+in+C.+elegans.">Bidirectional temperature-sensing by a single thermosensory neuron in C. elegans.</a> Nat. Neurosci. 11 (8), 908-915 (2008).</li><li>Russell, J., Vidal-Gadea, A. G., Makay, A., Lanam, C., Pierce-Shimomura, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humidity+sensation+requires+both+mechanosensory+and+thermosensory+pathways+in+Caenorhabditis+elegans.">Humidity sensation requires both mechanosensory and thermosensory pathways in Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 111 (22), 8269-8274 (2014).</li><li>van Campen, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+modulation+disorders+in+childhood+epilepsy.">Sensory modulation disorders in childhood epilepsy.</a> J. Neurodev. Disord. 7 (34), (2015).</li><li>Festa, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neocortical+disconnectivity+disrupts+sensory+integration+in+Alzheimer's+disease.">Neocortical disconnectivity disrupts sensory integration in Alzheimer's disease.</a> Neuropsych. 19 (6), 728-738 (2005).</li><li>Boecker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+processing+in+Parkinson's+and+Huntington's+disease:+investigations+with+3D+H(2)(15)O-PET.">Sensory processing in Parkinson's and Huntington's disease: investigations with 3D H(2)(15)O-PET.</a> Brain. 122 (9), 1651-1665 (1999).</li><li>Markaki, M., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+disease+in+Caenorhabditis+elegans.">Modeling human disease in Caenorhabditis elegans.</a> Biotechnol. J. 5 (12), 1261-1276 (2010).</li><li>O'Reilly, L. P., Luke, C. J., Perlmutter, D. H., Silverman, G. A., Pak, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+in+high-throughput+drug+discovery.">C. elegans in high-throughput drug discovery.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. , 247-253 (2014).</li><li>Thompson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+million+mutation+project:+a+new+approach+to+genetics+in+Caenorhabditis+elegans.">The million mutation project: a new approach to genetics in Caenorhabditis elegans.</a> Genome Res. 23 (10), 1749-1762 (2013).</li><li>Chao, M. Y., Komatsu, H., Fukuto, H. S., Dionne, H. M., Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+status+and+serotonin+rapidly+and+reversibly+modulate+a+Caenorhabditis+elegans+chemosensory+circuit.">Feeding status and serotonin rapidly and reversibly modulate a Caenorhabditis elegans chemosensory circuit.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 101 (43), 15512-15517 (2004).</li><li>Maricq, A. V., Peckol, E., Driscoll, M., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanosensory+signaling+in+C.+elegans+mediated+by+the+GLR-1+glutamate+receptor.">Mechanosensory signaling in C. elegans mediated by the GLR-1 glutamate receptor.</a> Nat. 378 (6552), 78-81 (1995).</li><li>Chalasani, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+a+circuit+for+olfactory+behaviour+in+Caenorhabditis+elegans.">Dissecting a circuit for olfactory behaviour in Caenorhabditis elegans.</a> Nat. 450 (7166), 63-70 (2007).</li><li>Hilliard, M. A., Bargmann, C. I., Bazzicalupo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+responds+to+chemical+repellents+by+integrating+sensory+inputs+from+the+head+and+the+tail.">C. elegans responds to chemical repellents by integrating sensory inputs from the head and the tail.</a> Curr. Biol. 12 (9), 730-734 (2002).</li><li>Hart, A. C., Kass, J., Shapiro, J. E., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+signaling+pathways+mediate+touch+and+osmosensory+responses+in+a+polymodal+sensory+neuron.">Distinct signaling pathways mediate touch and osmosensory responses in a polymodal sensory neuron.</a> J. Neurosci. 19 (6), 1952-1958 (1999).</li><li>Ishihara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HEN-1,+a+secretory+protein+with+an+LDL+receptor+motif,+regulates+sensory+integration+and+learning+in+Caenorhabditis+elegans.">HEN-1, a secretory protein with an LDL receptor motif, regulates sensory integration and learning in Caenorhabditis elegans.</a> Cell. 109 (5), 639-649 (2002).</li><li>Saeki, S., Yamamoto, M., Iino, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+chemotaxis+revealed+by+paired+presentation+of+a+chemoattractant+and+starvation+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Plasticity of chemotaxis revealed by paired presentation of a chemoattractant and starvation in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> J. Exp. Biol. 204 (10), 1757-1764 (2001).</li><li>Chao, M. Y., Komatsu, H., Fukuto, H. S., Dionne, H. M., Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+status+and+serotonin+rapidly+and+reversibly+modulate+a+Caenorhabditis+elegans+chemosensory+circuit.">Feeding status and serotonin rapidly and reversibly modulate a Caenorhabditis elegans chemosensory circuit.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (43), 15512-15517 (2004).</li><li>Campbell, J. C., Polan-Couillard, L. F., Chin-Sang, I. D., Bendena, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NPR-9,+a+Galanin-Like+G-Protein+Coupled+Receptor,+and+GLR-1+Regulate+Interneuronal+Circuitry+Underlying+Multisensory+Integration+of+Environmental+Cues+in+Caenorhabdities+elegans.">NPR-9, a Galanin-Like G-Protein Coupled Receptor, and GLR-1 Regulate Interneuronal Circuitry Underlying Multisensory Integration of Environmental Cues in Caenorhabdities elegans.</a> PLoS Genet. 12 (5), (2016).</li><li>Harris, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+distinct+amine+receptors+operating+at+different+levels+within+the+locomotory+circuit+are+each+essential+for+the+serotonergic+modulation+of+chemosensation+in+Caenorhabditis+elegans.">Three distinct amine receptors operating at different levels within the locomotory circuit are each essential for the serotonergic modulation of chemosensation in Caenorhabditis elegans.</a> J. Neurosci. 29 (5), 1446-1456 (2009).</li><li>Harris, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+the+serotonergic+food+signal+stimulating+sensory-mediated+aversive+behavior+in+C.+elegans.">Dissecting the serotonergic food signal stimulating sensory-mediated aversive behavior in C. elegans.</a> PLoS One. 6 (7), (2011).</li><li>Mitchell, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+differential+role+for+neuropeptides+in+acute+and+chronic+adaptive+responses+to+alcohol:+behavioural+and+genetic+analysis+in+Caenorhabditis+elegans.">A differential role for neuropeptides in acute and chronic adaptive responses to alcohol: behavioural and genetic analysis in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 5 (5), (2010).</li><li>Colbert, H. A., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+signals+modulate+olfactory+acuity,+discrimination,+and+memory+in+Caenorhabditis+elegans.">Environmental signals modulate olfactory acuity, discrimination, and memory in Caenorhabditis elegans.</a> Learn Mem. 4 (2), 179-191 (1997).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genet. 77 (1), 71-71 (1974).</li><li>Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior+(July+3,+2006).">Behavior (July 3, 2006).</a> The C. elegans Research Community, WormBook. , (2006).</li><li>Sambongi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensing+of+cadmium+and+copper+ions+by+externally+exposed+ADL,+ASE,+ASH+neurons+elicits+avoidance+response+in+Caenorhabditis+elegans.">Sensing of cadmium and copper ions by externally exposed ADL, ASE, ASH neurons elicits avoidance response in Caenorhabditis elegans.</a> NeuroReport. 10 (4), 753-757 (1999).</li><li>Gray, J. M., Hill, J. J., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+circuit+for+navigation+in+Caenorhabditis+elegans.">A circuit for navigation in Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 102 (9), 3184-3191 (2004).</li><li>Rechavi, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Starvation-Induced+Transgenerational+Inheritance+of+Small+RNAs+in+C.+elegans.">Starvation-Induced Transgenerational Inheritance of Small RNAs in C. elegans.</a> Cell. 158 (2), 277-287 (2014).</li><li>Gloria-Soria, A., Azevedo, R. B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=npr-1+Regulates+Foraging+and+Dispersal+Strategies+in+Caenorhabditis+elegans.">npr-1 Regulates Foraging and Dispersal Strategies in Caenorhabditis elegans.</a> Cell. 18 (21), 1694-1699 (2008).</li><li>Beron, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burrowing+behavior+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+A+new+assay+for+the+study+of+neuromuscular+disorders.">The burrowing behavior of the nematode Caenorhabditis elegans: A new assay for the study of neuromuscular disorders.</a> Genes Brain Behav. 14 (4), 357-368 (2015).</li><li>Wang, S. J., Wang, Z. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Track-A-Worm,+An+Open-Source+System+for+Quantitative+Assessment+of+C.+elegans+Locomotory+and+Bending+Behavior.">Track-A-Worm, An Open-Source System for Quantitative Assessment of C. elegans Locomotory and Bending Behavior.</a> PLoS One. 8 (7), (2013).</li></ol>

Açıklayacak bir şeyimiz yok.

Bu tahlil tasarımı, gıda yarış tahlilini 24 , nefis bir orta hat bariyeri oluşturmak için bir bakır solüsyonu ve nematodların kaybını önlemek için plakanın kenarı etrafında değiştirir. Canlılar, caydırıcı bariyerden geçme ve 4 saatlik bir sürede bir yemeğe erişme yetenekleri açısından test edilir. Npr-9 (GF) bağlamında, açlığın aversive yanıtları nasıl etkilediğini ve gıdanın tespitini değerlendirmek için bu tahlilden yararlandık. Daha önce <...

Caenorhabditis elegans , sadece 302 nöron 1&#39;den oluşan bir sinir sisteminin devresini analiz etmede göreli kolaylık nedeniyle onlarca yıldır nörobiyolojinin çalışması için bir model olarak kullanılmıştır. Organizmanın çevresel ipuçlarına tepki vermeye güvenmesi koşuluyla, sinir sisteminin büyük bir kısmı çevresel sinyallere entegrasyonu düzenlemekle yükümlüdür 2 . Sinir sisteminin sadeliğine rağmen, C. elegans , kovucular 3 , cezbediciler 4 , sıcaklık 5 ve hatta nem 6 da dahil olmak üzere çeşitli çevresel sinyaller algılar ve bunlara cevap verebilir. Doğru çevreye sinyalleri entegre bir başarısızlık memeli model sistemlerinde 7 9 davranışsal bozukluklar ve nörodejeneratif hastalıklardan bir dizi ile bağlantılı olmuştur. Bir dizi mevcut nevral hastalık modeli ile<html> 10 C. elegans&#39;da ve nematod farmasötik eleklerinin 11 gelişiminde, bu organizmanın nörobiyolojinin çalışması için yararlı bir sistem olduğu kanıtlanmıştır. Nematod genomu 12&#39;de eşlenen bir nematod bağlantı 1 ve mutasyonların neredeyse her bir geninin varlığı göz önüne alındığında, nematod sinir sistemini ve kendi uzantımızı anlayışımız kısmen yaratıcı uygun tahliller tasarlamakla sınırlıdır. Çeşitli caydırıcı uyaranlara nematod tepkilerini değerlendirmek için son 40 yılda bir dizi kemotaks testi geliştirildi 3 , 4 , 13 , 14 , 15 . İlk deneme, akut bir çevresel uyaranın ortaya çıkmasına neden olurken, tek bir solucan bir agar plakasında gezindi= &quot;Xref&quot;&gt; 3 , 14 , 16 . Lokomotif cevaplardaki ani değişiklikler kaydedildi. Örneğin, uçucu koku oktanol bir saç teline uygulanabilir ve yabani tip solucanlarda geriye doğru hareket hareketini başlatmak için bir nematodun burnunun önüne fırlayabilir 17 . Daha karmaşık tahlilleri de davranışsal seçim 18 değerlendiren bir araç olarak birden çok değişkeni birleştirmek için geliştirilmiştir. Bu tahlilin bir varyasyonu, caydırıcı bir orta hat bariyeri 4 oluşturmak için bir bakır solüsyonunun kullanılmasını gerektirir. Bir çekici, yani diasetil, kimyasal bariyerin bir tarafına kondu ve solucanlar diasetil kaynağından uzaklaştırıldı. Kurşunsuz yanıt için arızalı solucanlar hemen diasetil ulaşmak için engel geçti, vahşi tip solucanlar başlangıçta bariyer tarafından itildi. Solucanlar ilk önce bakır bariyere yaklaştığında tepkiler alındıUzun süreli gözlem olmadan. Açlık koşullarından sonra solucanlar değerlendirildiğinde çevresel uyaranlara olan duyarlılığı azaltılır 19 . Caner oktanol, nematod burununun önüne savurulduğunda, yabani tip organizmalar gıdaya çıktığında 3-5 saniye içinde geriye doğru harekete neden olurlar. Bu organizmalar 10 dakika süreyle gıdalardan çıkarıldıktan sonra 8-10 s&#39;lik bir gecikmeli yanıt veriyorlar 20 . Böylece, açlıktan arttıkça, nematodlar zararlı çevresel sinyallere karşı azaltılmış aversive bir yanıt sergilemektedir; çünkü gıda araması hayatta kalmak için daha önemli hale gelir. Tersine, nöropeptid reseptör 9&#39;u ( npr-9) aşırı miktarda eksprese eden nematodlar, gıda üzerindeki veya dışı oktanol üzerine cevap vermez ve birtakım aversif uyaranlara cevap vermede yetersizlik sergiler 21 . Bu npr-9 (GF) organizmaları aynı zamanda, gıda varlığında reversal frekanslarını modüle etmezler, ancakSert dokunuş uyarılarına karşılık olarak geriye doğru hareket etme yeteneğine sahip olduklarını gösterir 21 . Ayrıca npr-9 (LF) mutantlar, gıda 21 varlığında davranışlarını modüle edebilir ancak gıda dışı bir anormal seviyede azalmış ters frekans sergileyen verilen değerlendirilmiştir. Akut dış uyaranların tanıtımıyla solucanının beslenme durumunu bağlanması, bir gıda ile ilgili yol genel olarak duyu sinyallemesini modüle hangi mekanizma ile açıklık destekli olan 23, 22 geçiş yolu. Nematod ortamında gıdaların varlığı da etanol geri çekilme yanıtlarını değerlendirmek için kullanılmıştır 24 . Bu deneyde, solucanlar çeşitli konsantrasyonlarda etanol içinde kuluçkalanır ve daha sonra bir &quot;gıda yarış tahlili&quot; olarak bilinen bir gıda yamasına sahip bir agar plakası üzerine yerleştirilir. Yemek yaması plakanın bir kenarına yerleştirilirken nematodlar wYiyecek kaynağından uzak durdu. Etanol çekimi, solucanların yiyecek yamasına ulaşmaları için gereken süreyi ölçerek değerlendirildi. Bu beslenme esasına dayanan bakır kaçınma analizi, zaman içindeki davranış değişikliklerini değerlendirirken ek çevre değişkenlerini (gıda ve bakır) entegre etmek için gıda yarış testine dayanıyor. Bu C. elegans topluluğu genelinde yaygın olarak kullanılan bir protokolün uyarlanmasıdır 4 . Bu protokol, caydırıcı tepkiler ve dört saatlik bir süre üzerinde 21 gıda saptanmasını değerlendirmek için kullanılmıştır. Solucan, 30 dakika gıda yoksunluğundan 25 sonra açlık davranışları sergilediğinden, beslenme durumundaki değişikliklerin çevresel cevapları nasıl etkileyebileceğini de değerlendirebiliyoruz. Bu deneyin koşulları, deneysel organizmaların zaman içinde aversive uyaranlara yanıt verme şeklini ölçer, bu nedenle davranış değişiklikleri şu şekilde değerlendirilir:Organizmalar açlık durumuna doğru ilerledikçe (ve uzun süren açlık ölçümlerine devam ederler). Npr-9 (GF) hayvanları, besin ya da birçok caydırıcı ipucu karşısında davranışlarını değiştirmediğinden, bu davranış açıklarının açlık bağlamında devam edip etmeyeceğini tespit etmeye çalıştık. Sonuçta, bu tahlil tasarımı npr-9 (GF) mutantlarını spesifik olarak değerlendirmek üzere formüle edilmiştir, ancak yeni suşları karakterize etmek için daha da uyarlanabilir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="689">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="71">
			<td height="71" style="height:71px;width:332px;">M9 Solution [3 g KH2PO4, 6 g Na2HPO4, 5 g NaCl, 1 ml 1 M MgSO4, H2O to 1 litre. Autoclave to sterilize before use.]</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Produced in lab</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:332px;">Cupric Sulfate</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">C-1297</td>
			<td style="width:167px;">Use water to appropriately suspend to a concentration of 0.5M</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a caenorhabditis elegans nutritional-status based copper aversion assay

Canlılığı sağlamak için organizmalar, tutarlı bir gıda kaynağı temin ederken, olumsuz habitatlardan kaçınabilmelidir. Caenorhabditis elegans , çeşitli çevresel uyarıların saptanması üzerine lokomotif kalıplarını değiştirir ve açlık koşullarına cevaben davranışsal tepkiler setini modüle edebilir. Nematodlar tipik olarak, bir gıda kaynağından 30 dakika boyunca çıkarıldığında azaltılmış aversive yanıtı sergiler. Değişen bir beslenme durumuna yanıt olarak davranış değişikliklerinin gözlenmesi, iyi beslenmiş bir durumdan aç bırakılan bir duruma geçişi düzenleyen mekanizmalara dair bilgiler sağlayabilir. Nematodun caydırıcı bir bariyerden ( mesela bakır) geçme yeteneğini ölçen bir deney geliştirdik ve daha sonra uzunca bir süre bir gıda kaynağına ulaştık. Bu protokol, önceki çalışmalara, organizmaların bir aya doğru kaymasıyla devam eden veri toplamanın yapılmasına izin verecek şekilde çoklu değişkenleri entegre ederek oluşturmaktadırGiderek açlık çeken durum. Dahası, bu tahlil, daha büyük popülasyon nematodların eşzamanlı olarak değerlendirilebilmesi için, numune sayısının arttırılmasına izin verir. Bakır tespit etme veya tepki verme yeteneğine sahip olmayan organizmalar, kimyasal bariyerden geçerler, vahşi tip nematodlar başlangıçta itilir. Vahşi tip solucanlar giderek açlığa kavuştuğundan bariyerini aşmaya ve besin kaynağına ulaşmaya başlarlar. Bu tahlil, gıda sansasyonu veya caydırıcı kimyasalların saptanması da dahil olmak üzere çeşitli çevresel ipuçlarına cevap veremeyen bir mutantı değerlendirmek üzere tasarlandı. Bu protokol aracılığıyla değerlendirildiğinde, kusurlu organizmalar hemen engelden geçtiler, ancak bir gıda kaynağını bulamıyorlardı. Dolayısıyla, bu mutantlar geçici olarak bir besin kaynağına ulaşmalarına rağmen kimyasal bariyerini tekrar tekrar aşar. Bu tahlil, kaçınma ve açlık ile ilgili potansiyel yol hatalarını değerlendirmek için solucan popülasyonlarını basitçe test edebilir.

Biz vahşi tip (N2), npr-9 (tm1652) ve bir npr-9 aşırı sentezleme soy, yani npr-9 (GF) (IC836- npr-9 :: npr-9; sur-5 :: gfp; odr -1 :: rfp), açlık ve bakır kaçınma yanıtlarını değerlendirmek için. Vahşi tipli organizmalar aversive bakır bariyerini algılama ve yanıt verme yeteneğine sahiptirler, buna karşın npr-9 (GF) mutantları, 4 saatlik test 21 üzerinden bakırdan aversive tepki başlatm...

Watch this Scientific Journal Video about A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay at JoVE.com

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

bir<emCaenorhabditis elegans</emBeslenme Durumuna Dayalı Bakır Kaçınma Deneyi

Burada, organizmanın iyi beslenmiş bir beslenme durumundan aç kalmış beslenme durumuna geçmesiyle bakırdan kaçınma davranışındaki ve ortak bir besin kaynağını bulma yeteneğini değerlendirmek için tasarlanmış Caenorhabditis elegans spesifik bir analiz sunuyoruz.

To ensure survival, organisms must be capable of avoiding unfavorable habitats while ensuring a consistent food source. Caenorhabditis elegans alter their ...

a-caenorhabditis-elegans-nutritional-status-based-copper-aversion

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

6.4K Görüntüleme.  Queen's University.  Burada, organizmanın iyi beslenmiş bir beslenme durumundan aç kalmış beslenme durumuna geçmesiyle bakırdan kaçınma davranışındaki ve ortak bir besin kaynağını bulma yeteneğini değerlendirmek için tasarlanmış Caenorhabditis elegans spesifik bir analiz sunuyoruz. 

Video: A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

Synapse strength refers to the amplitude of postsynaptic responses to presynaptic neurotransmitter release events, and has a major impact on overall neural circuit function. Synapse strength critically depends on the abundance of neurotransmitter receptors clustered at synaptic sites on the postsynaptic membrane. Receptor levels are established developmentally, and can be altered by receptor trafficking between surface-localized, subsynaptic, and intracellular pools, representing important mechanisms of synaptic plasticity and neuromodulation. Rigorous methods to quantify synaptically-localized neurotransmitter receptor abundance are essential to study synaptic development and plasticity. Fluorescence microscopy is an optimal approach because it preserves spatial information, distinguishing synaptic from non-synaptic pools, and discriminating among receptor populations localized to different types of synapses. The genetic model organism Caenorhabditis elegans is particularly well suited for these studies due to the small size and relative simplicity of its nervous system, its transparency, and the availability of powerful genetic techniques, allowing examination of native synapses in intact animals.
Here we present a method for quantifying fluorescently-labeled synaptic neurotransmitter receptors in C. elegans. Its key feature is the automated identification and analysis of individual synapses in three dimensions in multi-plane confocal microscope output files, tabulating position, volume, fluorescence intensity, and total fluorescence for each synapse. This approach has two principal advantages over manual analysis of z-plane projections of confocal data. First, because every plane of the confocal data set is included, no data are lost through z-plane projection, typically based on pixel intensity averages or maxima. Second, identification of synapses is automated, but can be inspected by the experimenter as the data analysis proceeds, allowing fast and accurate extraction of data from large numbers of synapses. Hundreds to thousands of synapses per sample can easily be obtained, producing large data sets to maximize statistical power. Considerations for preparing C. elegans for analysis, and performing confocal imaging to minimize variability between animals within treatment groups are also discussed. Although developed to analyze C. elegans postsynaptic receptors, this method is generally useful for any type of synaptically-localized protein, or indeed, any fluorescence signal that is localized to discrete clusters, puncta, or organelles.
The procedure is performed in three steps: 1) preparation of samples, 2) confocal imaging, and 3) image analysis. Steps 1 and 2 are specific to C. elegans, while step 3 is generally applicable to any punctate fluorescence signal in confocal micrographs.

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

The abundance of neurotransmitter receptors clustered at synapses strongly influences synaptic strength. This method quantifies fluorescently-labeled neurotransmitter receptors in three dimensions with single-synapse resolution in C. elegans, allowing hundreds of synapses to be rapidly characterized within a single sample without distortions introduced by z-plane projection.

Içinde Synaptic florasan Otomatik Sayısallaştırma<em&gt; C. elegans</em

Synapse strength refers to the amplitude of postsynaptic responses to presynaptic neurotransmitter release events, and has a major impact on overall ...

Nörobilim

A Caenorhabditis elegans Model System for Amylopathy Study

Amylopathy is a term that describes abnormal synthesis and accumulation of amyloid beta (A&beta;) in tissues with time. A&beta; is a hallmark of Alzheimer's disease (AD) and is found in Lewy body dementia, inclusion body myositis and cerebral amyloid angiopathy 1-4. Amylopathies progressively develop with time. For this reason simple organisms with short lifespans may help to elucidate molecular aspects of these conditions. Here, we describe experimental protocols to study A&beta;-mediated neurodegeneration using the worm Caenorhabditis elegans. Thus, we construct transgenic worms by injecting DNA encoding human A&beta;42 into the syncytial gonads of adult hermaphrodites. Transformant lines are stabilized by a mutagenesis-induced integration. Nematodes are age synchronized by collecting and seeding their eggs. The function of neurons expressing A&beta;42 is tested in opportune behavioral assays (chemotaxis assays). Primary neuronal cultures obtained from embryos are used to complement behavioral data and to test the neuroprotective effects of anti-apoptotic compounds.

A Caenorhabditis elegans Model System for Amylopathy Study

We describe methods to study aspects of amylopathies in the worm C. elegans. We show how to construct worms expressing human A&beta;42 in neurons and how to test their function in behavioral assays. We further show how to obtain primary neuronal cultures that can be used for pharmacological testing.

Bir<em&gt; Caenorhabditis elegans</emAmylopathy Çalışmaları&gt; Model Sistemi

Amylopathy is a term that describes abnormal synthesis and accumulation of amyloid beta (A&beta;) in tissues with time. A&beta; is a hallmark of ...

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans is a simple genetic organism amenable to large-scale forward and reverse genetic screens and chemical genetic screens. The C. elegans genome includes potential antipsychotic drug (APD) targets conserved in humans, including genes encoding proteins required for neurotransmitter synthesis and for synaptic structure and function. APD exposure produces developmental delay and/or lethality in nematodes in a concentration-dependent manner. These phenotypes are caused, in part, by APD-induced inhibition of pharyngeal pumping1,2. Thus, the developmental phenotype has a neuromuscular basis, making it useful for pharmacogenetic studies of neuroleptics. Here we demonstrate detailed procedures for testing APD effects on nematode development and pharyngeal pumping. For the developmental assay, synchronized embryos are placed on nematode growth medium (NGM) plates containing APDs, and the stages of developing animals are then scored daily. For the pharyngeal pumping rate assay, staged young adult animals are tested on NGM plates containing APDs. The number of pharyngeal pumps per unit time is recorded, and the pumping rate is calculated. These assays can be used for studying many other types of small molecules or even large molecules.

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

Approaches for testing the effects of antipsychotic drugs (APDs) in Caenorhabditis elegans are demonstrated. Assays are described for testing drug effects on development and viability and on pharyngeal pumping rate. These methods are also applicable for pharmacogenetic experiments with drug classes other than APDs.

Antipsikotik İlaçların Etki Mekanizmaları incelenmesi için Yöntemleri<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is a simple genetic organism amenable to  large-scale forward and reverse genetic screens and chemical genetic screens. The C.  ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the development of more effective treatments is the relative lack of understanding of the molecular underpinnings of the effects of ethanol on behavior. The nematode, Caenorhabditis elegans (C.&#160;elegans), provides a useful model in which to generate and test hypotheses about the molecular effects of ethanol. Here, we describe an assay that has been developed and used to examine the roles of particular genes and environmental factors in behavioral responses to ethanol, in which locomotion is the behavioral output. Ethanol dose-dependently causes an acute depression of crawling on an agar surface. The effects are dynamic; animals exposed to a high concentration demonstrate an initial strong depression of crawling, referred to here as initial sensitivity, and then partially recover locomotion speed despite the continued presence of the drug. This ethanol-induced behavioral plasticity is referred to here as the development of acute functional tolerance. This assay has been used to demonstrate that these two phenotypes are distinct and genetically separable. The straightforward locomotion assay described here is suitable for examining the effects of both genetic and environmental manipulations on these acute behavioral responses to ethanol in C.&#160;elegans.

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

C. elegans is a useful model for studying the effects of ethanol on behavior. We present a behavioral assay that quantifies the effects of ethanol on the locomotion speed of crawling worms; both initial sensitivity and the development of acute functional tolerance to ethanol can be measured with this assay.

Locomotion Speed ​​Etanol Etkilerinin Ölçülmesi için bir Testi<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

Agarose Microchambers for Long-term Calcium Imaging of Caenorhabditis elegans

Behavior is controlled by the nervous system. Calcium imaging is a straightforward method in the transparent nematode Caenorhabditis elegans to measure the activity of neurons during various behaviors. To correlate neural activity with behavior, the animal should not be immobilized but should be able to move. Many behavioral changes occur during long time scales and require recording over many hours of behavior. This also makes it necessary to culture the worms in the presence of food. How can worms be cultured and their neural activity imaged over long time scales? Agarose Microchamber Imaging (AMI) was previously developed to culture and observe small larvae and has now been adapted to study all life stages from early L1 until the adult stage of C. elegans. AMI can be performed on various life stages of C. elegans. Long-term calcium imaging is achieved without immobilizing the animals by using short externally triggered exposures combined with an electron multiplying charge-coupled device (EMCCD) camera recording. Zooming out or scanning can scale up this method to image up to 40 worms in parallel. Thus, a method is described to image behavior and neural activity over long time scales in all life stages of C. elegans.

Agarose Microchambers for Long-term Calcium Imaging of Caenorhabditis elegans

Imaging behavior and neural activity over long time scales without immobilization of the animal is a prerequisite to understand behavior. Agarose microfluidic chambers imaging (AMI) can be used to image neural activity and behavior for all life stages of Caenorhabditis elegans.

Uzun süreli Kalsiyum Görüntüleme için Agaroz microchambers<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Behavior is controlled by the nervous system. Calcium imaging is a straightforward method in the transparent nematode Caenorhabditis elegans to measure ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

Arasında Mechanosensation için bir davranış tahlilinde klonlarda MARCM tabanlı<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Novel Metrics to Characterize Embryonic Elongation of the Nematode Caenorhabditis elegans

Dissecting the signaling pathways that control the alteration of morphogenic processes during embryonic development requires robust and sensitive metrics. Embryonic elongation of the nematode Caenorhabditis elegans is a late developmental stage consisting of the elongation of the embryo along its longitudinal axis. This developmental stage is controlled by intercellular communication between hypodermal cells and underlying body-wall muscles. These signaling mechanisms control the morphology of hypodermal cells by remodeling the cytoskeleton and the cell-cell junctions. Measurement of embryonic lethality and developmental arrest at larval stages as well as alteration of cytoskeleton and cell-cell adhesion structures in hypodermal and muscle cells are classical phenotypes that have been used for more than 25 years to dissect these signaling pathways. Recent studies required the development of novel metrics specifically targeting either early or late elongation and characterizing morphogenic defects along the antero-posterior axis of the embryo. Here, we provide detailed protocols enabling the accurate measurement of the length and the width of the elongating embryos as well as the length of synchronized larvae. These methods constitute useful tools to identify genes controlling elongation, to assess whether these genes control both early and late phases of this stage and are required evenly along the antero-posterior axis of the embryo.

Novel Metrics to Characterize Embryonic Elongation of the Nematode Caenorhabditis elegans

Here we detail protocols specifically designed to monitor morphogenic defects that occur during early and late phases of embryonic elongation of the nematode Caenorhabditis elegans. Ultimately, these protocols are designed to identify genes that regulate these phases and to characterize their differential requirements along the antero-posterior axis of the embryo.

Roman Metrik Nematodu Embriyonik Uzama karakterize etmek<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Dissecting the signaling pathways that control the alteration of morphogenic processes during embryonic development requires robust and sensitive metrics. ...

Assay Development for High Content Quantification of Sod1 Mutant Protein Aggregate Formation in Living Cells

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc superoxide dismutase 1 (SOD1). The structural instability of SOD1 and the detection of SOD1-positive inclusions in familial-ALS patients supports a potential causal role for misfolded and/or aggregated SOD1 in ALS pathology. In this study, we describe the development of a cell-based assay designed to quantify the dynamics of SOD1 aggregation in living cells by high content screening approaches. Using lentiviral vectors, we generated stable cell lines expressing wild-type and mutant A4V SOD1 tagged with yellow fluorescent protein and found that both proteins were expressed in the cytosol without any sign of aggregation. Interestingly, only SOD1 A4V stably expressed in HEK-293, but not in U2OS or SH-SY5Y cell lines, formed aggregates upon proteasome inhibitor treatment. We show that it is possible to quantify aggregation based on dose-response analysis of various proteasome inhibitors, and to track aggregate-formation kinetics by time-lapse microscopy. Our approach introduces the possibility of quantifying the effect of ALS mutations on the role of SOD1 in aggregate formation as well as screening for small molecules that prevent SOD1 A4V aggregation.

We describe a method to quantify the aggregation of misfolded proteins. Our protocol details lentiviral induced stable cell line generation, automated confocal imaging, and image analysis of protein aggregates. As an illustrative application, we studied the effect of small molecules in promoting SOD1 aggregation in a time- and dose-dependent manner.

Yüksek içerik miktar Sod1 canlı hücreler Mutant Protein toplama oluşumu için tahlil geliştirme

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc ...

Ratiometric Calcium Imaging of Individual Neurons in Behaving Caenorhabditis Elegans

It has become increasingly clear that neural circuit activity in behaving animals differs substantially from that seen in anesthetized or immobilized animals. Highly sensitive, genetically encoded fluorescent reporters of Ca2+ have revolutionized the recording of cell and synaptic activity using non-invasive optical approaches in behaving animals. When combined with genetic and optogenetic techniques, the molecular mechanisms that modulate cell and circuit activity during different behavior states can be identified.
Here we describe methods for ratiometric Ca2+ imaging of single neurons in freely behaving Caenorhabditis elegans worms. We demonstrate a simple mounting technique that gently overlays worms growing on a standard Nematode Growth Media (NGM) agar block with a glass coverslip, permitting animals to be recorded at high-resolution during unrestricted movement and behavior. With this technique, we use the sensitive Ca2+ reporter GCaMP5 to record changes in intracellular Ca2+ in the serotonergic Hermaphrodite Specific Neurons (HSNs) as they drive egg-laying behavior. By co-expressing mCherry, a Ca2+-insensitive fluorescent protein, we can track the position of the HSN within ~ 1 &#181;m and correct for fluctuations in fluorescence caused by changes in focus or movement. Simultaneous, infrared brightfield imaging allows for behavior recording and animal tracking using a motorized stage. By integrating these microscopic techniques and data streams, we can record Ca2+ activity in the C. elegans egg-laying circuit as it progresses between inactive and active behavior states over tens of minutes.

Ratiometric Calcium Imaging of Individual Neurons in Behaving Caenorhabditis Elegans

This protocol describes the use of genetically encoded Ca2+ reporters to record changes in neural activity in behaving Caenorhabditis elegans worms. &#8195;

Ratiometric kalsiyum görüntüleme Caenorhabditis Elegans davranışlar içinde bireysel nöronların

It has become increasingly clear that neural circuit activity in behaving animals differs substantially from that seen in anesthetized or immobilized ...

Imaging Dendritic Spines in Caenorhabditis elegans

Dendritic spines are specialized sites of synaptic innervation modulated by activity and serve as substrates for learning and memory. Recently, dendritic spines have been described for DD GABAergic neurons as the input sites from presynaptic cholinergic neurons in the motor circuit of Caenorhabditis elegans. This synaptic circuit can now serve as a powerful new in vivo model of spine morphogenesis and function that exploits the facile genetics and ready accessibility of C. elegans to live-cell imaging. 
This protocol describes experimental strategies for assessing DD spine structure and function. In this approach, a super-resolution imaging strategy is used to visualize the intricate shapes of actin-rich dendritic spines. To evaluate the DD spine function, the light-activated opsin, Chrimson, stimulates the presynaptic cholinergic neurons, and the calcium indicator, GCaMP, reports the evoked calcium transients in postsynaptic DD spines. Together, these methods comprise powerful approaches for identifying genetic determinants of dendritic spines in C. elegans that could also direct spine morphogenesis and function in the brain.

Imaging Dendritic Spines in Caenorhabditis elegans

Dendritic spines are important cellular features of the nervous system. Here live imaging methods are described for assessing the structure and function of dendritic spines in C. elegans.&#160;These approaches support the development of mutant screens for genes that define dendritic spine shape or function.

Caenorhabditis elegans'ta Dendritik Dikenleri Görüntüleme

Dendritic spines are specialized sites of synaptic innervation modulated by activity and serve as substrates for learning and memory. Recently, dendritic ...