Yazarlar yazının eleştirel okuma için Dumenil laboratuara tüm üyelerini, özellikle Silke Silva teşekkür etmek istiyorum. Hôpital Européen Georges-Pompidou (HEGP), Dr David Maladry de cerrahi bölümü. Michael Hivelin ve Dr Patrick Bruneval, HEGP de Patoloji Anabilim Dalı. Elizabeth Huc başkanlığındaki PARCC at hayvan tesis. Bu çalışma aşağıdaki hibe kuruluşları tarafından desteklenen: Marie Curie İEF dostluk yok. 273223 (KM), İNSERM den ATIP-Avenir Grant, CODDIM ekipman hibe (Ile de France Bölge), FRM ekipman hibe, mükemmellik konsorsiyum IBEID Laboratuvarı (fondation la recherche Médicale dökmek), ANR hibesi &quot;(Agence Nationale la Recherche dökmek) Bugs-in-flow &quot;. Maliyeciler, çalışma tasarımı, veri toplama ve analizi, yayınlamak kararı, ya da yazının hazırlanmasında herhangi bir rolü vardı.

1.. Riskler ve İzinler <ol><li> Yerel etik kurullar, bütün hayvan protokolleri onaylaması gerekir. Bu protokol Fransız ve Avrupa laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için düzenlemeler (Décrets 87-848, 2001-464, 2001-486 ve 2001-131 ve belirlenen esaslar çerçevesinde gerçekleştirilmiştir Avrupa Direktifi 2010/63/UE) ve yerel etik kurul Fransa Comité d&#39;Ethique en matière d&#39;deney Animale, Universite Paris Descartes, Paris, tarafından onaylanmıştır. No: CEEA34.GD.002.11. </li><li> Insan cildi için, yazılı bilgilendirilmiş hasta onam alınmış ve bütün prosedürler uygulandı Fransız ulusal kurallara uygun olarak ve yerel etik kurul, Comité d&#39;Değerlendirme Ethique de l&#39;INSERM KİK 00003888 FWA 00005881, Paris, Fransa Opinion tarafından onaylanan: 11-048 . </li><li> N. meningitidis potansiyel olarak zararlı bir insan patojeni ve organizasyonu tutarken gerekli tüm önlemler alınmalınism. Bu önlemler aşı ve Biyogüvenlik düzeyi 2 şartlar altında çalışan bulunmaktadır. </li></ol> 2. Deri naklinde kullanılan deri parçası <ol><li> Mümkün olduğunca zaman aşılama gibi yakın insan derisi toplayın. Bu çalışmada deri çoğunluğu karın bölgesini kapsayan plastik cerrahi operasyonları gelmektedir. Meme, bacak ve hatta yüz gibi diğer kaynaklar da başarı ile kullanılmıştır. </li><li> % 70 EtOH ile deri yüzeyin temizlenmesi ve tercihen bir akış hunisi altına, iyi temizlenmiş yüzey üzerinde düz olarak uzanarak, insan derisi örnek hazırlayın. </li><li> Önceden belirlenmiş bir kalınlığa sahip bir dermatomal kullanarak deri üstünden 200-400 um dilim dilim. </li><li> Kısa süreli depolama için% 10 serum (3-12 saat ile hemen veya DMEM içinde 4 ° C&#39;de bir aşılama durumunda bütünlüğü için cilt dilimleri kontrol edin ve 2 cm x 2 cm kare içine kesilmiş, daha sonra (iki değerli katyonlar olmadan) PBS içinde yer .) </li><li> Ketamin (100 mg / kg) ve Ksilazin (10 mg / kg) ile inje 6-8 haftalık SCID.bg fareler (yaklaşık olarak 20 g) uyuşturanCTED ip </li><li> Fareler anestezi sonra, bir ayak tutam, ağrı refleks kurmak için standart bir yöntem gerçekleştirerek ağrı yanıtı kontrol edin. Kornea kurumasını önlemek ve greft yerleştirileceği omuz arkasında hayvanın sol tarafını tıraş gözlere jel uygulanır. Prosedür boyunca bir ısı pedi üzerinde fare sıcak tutun. </li><li> Ameliyat için fareyi hazırladığımız sonra,% 70 EtOH ile traş bölgeyi temizleyin. </li><li> Greft sitede (Tronothane) topikal olarak lokal anestezi uygulayın ve dikkatlice kavisli bir makasla fare derisine yüzeysel tabakasını kaldırarak greft sitesi hazırlamak. Altta yatan damarsal bozmak için dikkatli olun. </li><li> Insan derisi dilimin alanı biraz daha küçük bir alanda deri çıkarın. </li><li> PBS (veya DMEM) cilt dilim çıkarın ve greft Yatağın üzerine yerleştirmek, epidermal yüzü yukarı bakacak sağlanması. Adımları 2.8-2.10 greft yatak kurumasına değil sağlanması, mümkün olduğunca çabuk yapılmalıdır. </li><li> Bir köşesini hizalayınveya doku yapıştırıcı ile kenar ve düzeltme. Dikkatle kenarlarında doku yapıştırıcısı küçük miktarlarda yerleştirerek, greft yatağına cilt dilim kalanını uygun. Her zaman boyutuna insan derisini kesmek yerine greft Yatakta daha büyük yapmak. </li><li> Fare cilt çok esnek olduğu gibi aşı yatağın üzerinde çok sıkı cilt çekmeyin. </li><li> Greft her köşesinde doku yapıştırıcı ile sabit olduğundan emin olun. </li><li> Iyot çözeltisi ile bölgeyi temizleyin. </li><li> Greft üzerinde yastık alanı ile Band-Aid uygulayın. Band-Aid sağlam ama sıkı değil ve hayvanın nefes etkilenmez emin olun. </li><li> Pansuman bandı ile Band-Aid Fix. </li><li> Hayvan sıcak bir yüzey üzerinde kurtarmak için izin verin. </li><li> Bir kez uyanık, kendi kafesine hayvan dönün. Hayvanlar 2-3 başına kafes yerleştirilmiştir. </li><li> Ağrı veya sıkıntı belirtileri için kurtarma sırasında düzenli olarak farelerin kontrol. 10-14 gün sonra aşılama, greft bozmak için dikkatli olmak, Band-Aid kaldırın. Bizim tecrübelerimize göre postoperatif ağrı miniMal. Bununla birlikte hayvan işlemini takiben, birkaç gün, özellikle de her gün izlenmelidir. Ağrı veya sıkıntı için kriterler şunlardır. <ul><li> % 10 üzerinde ağırlık kaybı </li><li> Fiziksel görünüm, kürk, kambur pozisyonda, gözler </li><li> Artmış solunum veya kalp hızları </li><li> Azalmış veya olağandışı hareketler. </li><li> Vücut sıcaklığında Rise </li><li> Durumda, ağrı işaretleri tespit edilir parasetamol (300 mg / kg, her 4 saat) oral yoldan tatbik edilir. İnsani uç noktaları kesinlikle ağrı devam ederse yapıştırılır. </li></ul></li><li> Greft esnek cilt tutmak için her 2-3 gün bebek yağı uygulayın kuru görünüyorsa. </li><li> Greft deney 21 gün sonrası greft için hazırdır. </li></ol> 3. Enfeksiyon <ol><li> Enfeksiyondan bir gün önce, uygun antibiyotik ile birlikte agar plakaları üzerine GCB çizgi oluşumu bakteri suşu hazırlar. % 5 CO2 içinde 37 ° C&#39;de gece boyunca büyütün. </li><li> Bakteriler hazırlık <ol&gt; <li> Reinoculate bir OD 600 için 0.05,% 10 serum ile insan endotel SFM ortam 5 ml bakteri. </li><li> OD 600, yaklaşık 0.1 &#39;un bir bakteriyel yoğunluğa kadar kuluçka makinesi içinde 2 saat gevşek kapaklı (% 5 CO2 içinde 37 ° C), boyunca çalkalarken kuluçkalayın. </li><li> 3 dakika için 15,000 rpm bakterileri santrifüjleyin. </li><li> PBS süpernatant ve tekrar süspansiyon kaldırmak, sonra tekrar santrifüj. </li><li> Iki kez yıkama adımı (2.2.4-2.2.5) tekrarlayın. </li><li> PBS bakteriyel pelletini. </li><li> OD 600 ölçün. </li><li> OD 600 0,1 (10 8 CFU / ml) ya da OD 600 1,0 (10 9 CFU / ml) ya da bir kültür yapın. Bu bilinen bir konsantrasyonu, 7 10 CFU / ml &#39;ye seyreltilir. Mümkün olduğunca enjeksiyon zamanına yakın bakterileri hazırlamak için deneyin. </li></ol></li><li> Fareler <ol><li> Fareler tartılır. </li><li> Ketamin (100 mg / kg) ve ksilazin ile farelerin uyuşturan (10 mg / kg) enjekte ip </li><li> Bir kere uykuda, chalt ağrı yanıtı bir ısı pedi sıcak fareler tutmak ve kurumasını önlemek için göz merhemi koymak, bir ayak-tutam tarafından yoktur. </li><li> Her bir fareye salin veya PBS içinde yeniden süspansiyon haline getirilmiş insan transferrin 8 mg, ver, ip enjekte </li><li> Kuyruk kan küçük bir damla alın ve kan enfeksiyonu öncesi steril kontrol etmek için bir agar plakası üzerine yayılmıştır. </li><li> Damardan retro-orbital ya kuyruk damarı yoluyla 100 ul 10 7 CFU / ml bakteri kültürü (10 6 CFU toplam) enjekte edilir. 5 dakika sonrası enjeksiyon alınan CFU ölçümleri bağımsız enjeksiyon yerinde tutarlıdır. </li><li> Birkaç dakika sonra, kuyruk ucu makasla kesme ve hemen enfeksiyonun ardından kan CFU kurmak için bir 10-kat seyreltme ile, uygun antibiyotik ile birlikte agar plakaları üzerine kan örneği yayıldı. </li><li> Doku yapıştırıcı ile kuyruk Seal. </li><li> Enjeksiyondan sonra, bakteriyel inokulum sulandırarak CFU kurmak için uygun antibiyotik ile birlikte agar plakaları üzerine yayıldı. </li><li> Farelere Verenonlar kadar ve hareketli kadar bir ısı pedi üzerinde kurtarmak için </li><li> 6 saat sonrası enfeksiyondan 6 saatte CFU kurmak sulandırmak ve plaka, kuyruk kan küçük bir miktar çizin. </li><li> CO2 gece boyunca% 5 37 ° C&#39;de tüm agar inkübe edin. </li></ol></li></ol> 4. Kurban <ol><li> Enfeksiyon seçilmiş zamanda, Ketamin (100 mg / kg) ve ksilazin ile farelerin uyuşturan (10 mg / kg) ip enjekte </li><li> Uykuda kez, bir ısı pedi ile fare sıcak tutmak. </li><li> Ağrı refleks (toe-tutam) gitti zaman, kuyruk ucunu makasla kesme ve kan çizin. </li><li> Uygun antibiyotik ile agar plakları üzerine kan yayıldı; 5 ul doğrudan ve 10 ul 1:10 seyreltme CFU kurmak. </li><li> Servikal dislokasyon ile fare Kurban. </li><li> Ilgili tüm kurumsal ve etik kurallara göre fareyi ödün sonra, kalp atışı eksikliği ölümü onaylayın. Göğüs kafesi ile kesmek bir orta hat kesi yapmak ve duymak bir kesi yapmakt. </li><li> Steril tüp içinde, kalp / göğüs boşluğu ve yerden mümkün olduğu kadar fazla kan toplamak. </li><li> Steril bir tabak içine organların (karaciğer, dalak, beyin) sökün. </li><li> Deri grefti ve steril plaka içine fare deri bir bölümü çıkarın. </li><li> Fare vücudun atmayın. </li><li> Toplanan kan, 15 dakika boyunca pıhtılaşmaya bırakılmıştır, sonra, 3000 rpm&#39;de 15 dakika santrifüj o. </li><li> ELISA veya FACS bazlı yöntemler ile sitokin tespiti için, örneğin daha sonraki analizler için -80 ° C&#39;de kan ve plazma depodan çıkartın. </li></ol> 5. Organ CFU Sayımlar <ol><li> Her öncesinde biyopsi örnekleri alınarak PBS 500 ul içeren tüpler homojenize tartılır. </li><li> Bir steril biopsi zımba kullanılarak her dokudan 4 mm biyopsi örnekleri al. </li><li> 500 ul PBS içeren önceden tartılmış homojenize tüplere yer biyopsileri. Diğer organlar için daha küçük boncuklar kullanımı, 2 mm boncuk deri örnekleri homojenize. </li><li> Kalan t yerleştirinmikroskopi için 4 ° C &#39;de% 4 paraformaldehit (PFA) ve mağaza sorunları (aşağıya bakınız). </li><li> (CFU / mg doku daha sonra hesaplanması için) biyopsi ağırlık kurmaya biyopsileri içeren tüpler homojenize tartılır. </li><li> Örnekleri homojenize. <ol><li> 30 saniye boyunca 6000 rpm, karaciğer, dalak ve beyin homojenize. </li><li> 30 saniye boyunca 6,000 rpm&#39;de deri örnekleri homojenize ve gerekirse tekrarlayın. </li></ol></li><li> Agar plakaları üzerine her homojenize tüpten seyreltileri yaymak ve organ CFU sayısını belirlemek için,% 5 CO2 içinde 37 ° C&#39;de gece boyunca büyür. </li></ol> 6. Histoloji / İmmünohistokimya <ol><li> Tespit <ol><li> 4 ° C&#39;de bir gece% 4 PFA içinde dokular tamir Fiksasyon adım daha uzun olabilir, daha uzun süreler için saklanması% 0.25 PFA dokuları koyarsanız. </li><li> PBS ile yıkayın ve daha sonra dokular% 20 sukroz çözeltisi içinde yer ve gece boyunca ya da dokular çözeltide batmış kadar 4 ° C &#39;geri dönün. </li><li> (A doku kalıp içinde ya da bir baz kartına yapıştırılmış olarak) boyutu ve Ekim çözelti içinde yer kesim, PBS içinde dokuları yıkayın. </li><li> Hızla sıvı azot içinde yüzen bir Petri kabı üzerindeki dokuları dondurmak. </li><li> Dondurulduktan sonra, depolama için -80 ° C aktarılmadan önce kuru buz üzerine dokuları koydu. </li></ol></li><li> Dilimleme <ol><li> -80 ° C ila dokuları çıkarın ve kriyostat -20 ° C&#39;de denge sağlaması için izin verir. </li><li> Dilim yaklaşık olarak 10-15 um bir kalınlığa sahip dokular ve kaplanmış mikroskopi slaytlar üzerine yerleştirin. </li><li> Ihtiyaç kadar mağaza -20 ° C&#39;de kayar. </li></ol></li><li> Boyanma <ol><li> Slaytlar oda sıcaklığına izin verir. </li><li> Bir hidrofobik kalem ile slaytta dilim etrafında çizin. 5-10 dakika bekleyin. </li><li> 5 dakika boyunca PBS içinde yıkama / dilim rehidrate, iki kere yineleyin. </li><li> 10 dakika boyunca PBS içinde% 0.1 Triton Permeabilize dilim. </li><li> 5 dakika süre ile PBS 2-3x yıkayın. </li><li> PBS içinde Block10-60 dakika arasında kullanılmak üzere antikor veya leke bağlı olarak,% 0.1 Triton% 1 BSA. </li><li> Bloklama tamponunu çıkarın ve blok tamponu içinde gerektiği gibi seyreltilmiş primer antikor ekleyin. Belirlenmiş bir süre için inkübe edilir. (Çoğu zaman, oda sıcaklığında 1 saat veya gece boyunca 4 ° C de). </li><li> 5 dakika süre ile PBS 2-3x yıkayın. </li><li> Bock tamponu içinde uygun olarak seyreltilmiş sekonder antikor uygulayın; DAPI tipik olarak bu aşamada dahil edilir. Karanlıkta, belirlenmiş bir süre, genellikle 1-2 saat oda sıcaklığında inkübe edin. </li><li> 5 dakika süre ile PBS 2-3x yıkayın. </li><li> Bir cam kapak ile montaj medya korunması solmaya Dağı ve tırnak cilası ile mühür. </li><li> Görüntü lekeli hemen slaytlar veya 4 ° C&#39;de mağaza </li><li> Kullanılan fluoroforlar uygun filtreler / lazerler ile kurulmuş bir konfokal veya floresan mikroskobu ile görüntüleme gerçekleştirin. </li></ol></li><li> Histoloji <ol><li> Histoloji oda sıcaklığına gelmesi için slaytlar kullanılmak üzere izin verin. </li><li> Olarak kullanarak Leke slaytlartandard hematoksilen / eosin boyama protokolü. <ol><li> Slayt rafa slaytlar yerleştirin. </li><li> Aşağıdaki sırayla çözümleri arasında slaytlar ile raf aktarın: </li><li> Akan musluk suyu içine 2 sn. </li><li> Süzüldü hematoksilin çözelti içinde 3 dk. </li><li> Akan su içine 10 sn. </li><li> Damıtılmış su içinde 10 sn. </li><li> Etanol% 100 içine 10 sn. </li><li> Süzülmüş eozin içine 2 sn. </li><li> Akan su içine 10 sn. </li><li> Etanol% 100 içine 10 sn </li><li> 2 dakika ksilen x 3 içine (banyo I, II, III). </li><li> Hemen aktarmak ve, üstüne her slaytlar, yer kapak kayma üzerine tespit tutkal birkaç damla ekleyin hava kabarcıklarını çıkarmak, birkaç saat kurumasını bekleyin. </li><li> Görüntü bir standart beyaz ışık mikroskobu altında kayar. </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Davis, C. E., Arnold, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+meningococcal+endotoxin+in+Meningococcal+purpura.">Role of meningococcal endotoxin in Meningococcal purpura.</a> J. Exp. Med. 140, 159-171 (1974).</li><li>Mairey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+microcirculation+shear+stress+levels+determine+Neisseria+meningitidis+attachment+sites+along+the+blood-brain+barrier.">Cerebral microcirculation shear stress levels determine Neisseria meningitidis attachment sites along the blood-brain barrier.</a> J. Exp. Med. 203, 1939-1950 (2006).</li><li>Brandtzaeg, P., van Deuren, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classification+and+pathogenesis+of+meningococcal+infections.">Classification and pathogenesis of meningococcal infections.</a> Methods Mol. Biol. 799, 21-35 (2012).</li><li>Guarner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+diagnosis+of+human+meningococcal+disease+using+immunohistochemical+and+PCR+assays.">Pathogenesis and diagnosis of human meningococcal disease using immunohistochemical and PCR assays.</a> Am. J. Clin. Pathol. 122, 754-764 (2004).</li><li>Hill, W. R., Kinney, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cutaneous+lesions+in+acute+meningococcemia;+a+clinical+and+pathologic+study.">The cutaneous lesions in acute meningococcemia; a clinical and pathologic study.</a> J. Am. Med. Assoc. 134, 513-518 (1947).</li><li>Capecchi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neisseria+meningitidis+NadA+is+a+new+invasin+which+promotes+bacterial+adhesion+to+and+penetration+into+human+epithelial+cells.">Neisseria meningitidis NadA is a new invasin which promotes bacterial adhesion to and penetration into human epithelial cells.</a> Mol. Microbiol. 55, 687-698 (2005).</li><li>Merz, A. J., Enns, C. A., So, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+IV+pili+of+pathogenic+Neisseriae+elicit+cortical+plaque+formation+in+epithelial+cells.">Type IV pili of pathogenic Neisseriae elicit cortical plaque formation in epithelial cells.</a> Mol. Microbiol. 32, 1316-1332 (1999).</li><li>Morand, P. C., Tattevin, P., Eugene, E., Beretti, J. L., Nassif, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adhesive+property+of+the+type+IV+pilus-associated+component+PilC1+of+pathogenic+Neisseria+is+supported+by+the+conformational+structure+of+the+N-terminal+part+of+the+molecule.">The adhesive property of the type IV pilus-associated component PilC1 of pathogenic Neisseria is supported by the conformational structure of the N-terminal part of the molecule.</a> Mol. Microbiol. 40, 846-856 (2001).</li><li>Taha, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neisseria+meningitidis+induces+the+expression+of+the+TNF-alpha+gene+in+endothelial+cells.">Neisseria meningitidis induces the expression of the TNF-alpha gene in endothelial cells.</a> Cytokine. 12, 21-25 (2000).</li><li>Kirchner, M., Meyer, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+PilC+adhesin+of+the+Neisseria+type+IV+pilus-binding+specificities+and+new+insights+into+the+nature+of+the+host+cell+receptor.">The PilC adhesin of the Neisseria type IV pilus-binding specificities and new insights into the nature of the host cell receptor.</a> Mol. Microbiol. 56, 945-957 (2005).</li><li>Mikaty, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+bacterial+pathogen+induces+host+cell+surface+reorganization+to+resist+shear+stress.">Extracellular bacterial pathogen induces host cell surface reorganization to resist shear stress.</a> PLoS Pathog. 5, (2009).</li><li>Johansson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD46+in+meningococcal+disease.">CD46 in meningococcal disease.</a> Science. 301, 373-375 (2003).</li><li>Kirchner, M., Heuer, D., Meyer, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD46-independent+binding+of+Neisserial+type+IV+pili+and+the+major+pilus+adhesin,+PilC,+to+human+epithelial+cells.">CD46-independent binding of Neisserial type IV pili and the major pilus adhesin, PilC, to human epithelial cells.</a> Infect. Immun. 73, 3072-3082 (2005).</li><li>Noinaj, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+for+iron+piracy+by+pathogenic+Neisseria.">Structural basis for iron piracy by pathogenic Neisseria.</a> Nature. 483, 53-58 (2012).</li><li>Schryvers, A. B., Gonzalez, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptors+for+transferrin+in+pathogenic+bacteria+are+specific+for+the+host's+protein.">Receptors for transferrin in pathogenic bacteria are specific for the host's protein.</a> Can. J. Microbiol. 36, 145-147 (1990).</li><li>Oftung, F., Lovik, M., Andersen, S. R., Froholm, L. O., Bjune, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+utilising+human+transferrin+to+study+protection+against+Neisseria+meningitidis+serogroup+B+induced+by+outer+membrane+vesicle+vaccination.">A mouse model utilising human transferrin to study protection against Neisseria meningitidis serogroup B induced by outer membrane vesicle vaccination.</a> FEMS Immunol. Med. Microbiol. 26, 75-82 (1999).</li><li>Zarantonelli, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+expressing+human+transferrin+as+a+model+for+meningococcal+infection.">Transgenic mice expressing human transferrin as a model for meningococcal infection.</a> Infect. Immun. 75, 5609-5614 (2007).</li><li>Melican, K., Michea Veloso, P., Martin, T., Bruneval, P., Dumenil, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesion+of+Neisseria+meningitidis+to+dermal+vessels+leads+to+local+vascular+damage+and+purpura+in+a+humanized+mouse+model.">Adhesion of Neisseria meningitidis to dermal vessels leads to local vascular damage and purpura in a humanized mouse model.</a> PLoS Pathog. 9, (2013).</li><li>Murray, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+T-cell-mediated+destruction+of+allogeneic+dermal+microvessels+in+a+severe+combined+immunodeficient+mouse.">Human T-cell-mediated destruction of allogeneic dermal microvessels in a severe combined immunodeficient mouse.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91, 9146-9150 (1994).</li><li>Nassif, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigenic+variation+of+pilin+regulates+adhesion+of+Neisseria+meningitidis+to+human+epithelial+cells.">Antigenic variation of pilin regulates adhesion of Neisseria meningitidis to human epithelial cells.</a> Mol. Microbiol. 8, 719-725 (1993).</li><li>Geoffroy, M. C., Floquet, S., Metais, A., Nassif, X., Pelicic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+analysis+of+the+meningococcus+genome+by+gene+disruption:+resistance+to+complement-mediated+lysis.">Large-scale analysis of the meningococcus genome by gene disruption: resistance to complement-mediated lysis.</a> Genome Res. 13, 391-398 (2003).</li><li>Ho, M., Hickey, M. J., Murray, A. G., Andonegui, G., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+Plasmodium+falciparum-endothelium+interactions+in+human+microvasculature:+mimicry+of+leukocyte+recruitment.">Visualization of Plasmodium falciparum-endothelium interactions in human microvasculature: mimicry of leukocyte recruitment.</a> J. Exp. Med. 192, 1205-1211 (2000).</li></ol>

Yazarlar herhangi bir mali çıkarlarını beyan.

Hayvan modelleri bakteriyel patogenez araştırma önem taşımaktadır. Bu, tam olarak, hücre kültüründe in vivo ortamı taklit etmek mümkün değildir ve konukçu-patojen etkileşimi çok dinamik faktörlerden etkilenir açık hale gelmektedir. Böyle N. gibi bazı klinik olarak önemli patojenlerin, insan özgüllüğü meningitidis, HIV, HCV, Plasmodium falciparum, Listeria monocytogenes ve Salmonella typhi, bu enfeksiyonların in vivo modellerin kullanımı sınırlıdır. Biz bulaşıcı adımlar özgüllüğü katılan hangi anlamaya başlar Ancak, beşerileştirilmiş modelleri geliştirilmektedir. Burada açıklanan protokol N ile in vivo enfeksiyon geniş sağlayan, farelere insan mikrokapların tanıtımı ile bir örneğidir meningitidis, damar hasarı ve bazen purpura döküntüleri gelişimi ile sonuçlanır. Bu modeli kullanarak,Biz TFP yapışkan özellikleri bakteri mutantlar kullanılarak ve vasküler hasar yapışma 18 yokluğunda azalır bu in vivo vasküler kolonizasyonu dahil olduğunu tanımlamak mümkün olmuştur. Daha önce, dolaşımdaki bakteriyel ürünler bu zararlardan sorumlu olmuştur ama bizim sonuçlarımız yerel yapışma ve damar kolonizasyon için belirleyici bir rol oynadığını düşündürmektedir. Bu yeni tedavi hedeflerinin geliştirilmesi için yeni olanaklar açar. Patojenik bakterilerin yapışması farmasötik bloke olabilir eğer muhtemelen dermal lezyonların gelişimini önlemek ve doku nekrozu, debridman ve amputasyon açısından meningokok mağdurları için daha iyi sonuçlara yol açabilir. Bu çalışma ayrıca, enfeksiyonun karmaşıklığı ve bağışıklık yanıtı ve pıhtılaşma kaskadı katılımını göstermiştir. Bu mevcut insan endotel 18 nispeten az miktarda rağmen enfekte edilmiş farelerin serumlarında insan sitokin sinyal tespit edilmiştir.Bu bölgeye fare bağışıklık hücresi popülasyonlarının infiltrasyonu ile birlikte, önemli bir sitokin tepkisi gösterdi. Hayvan modelleri tabii ki tamamen insan hastalığı çoğaltmak asla ve tüm sonuçları bu düşünce ile ele alınmalıdır onlardan aldı. Örneğin, bu modelde, kan ve dolaşan hücreleri fare kökenlidir ve insan hücrelerine farklı davranabilirler bu indirim olamaz. Bunun bir avantajı, bununla birlikte, yakın yayın 18 de gösterildiği gibi, dolaşan fare hücrelerinkinden insan endotel gelen sinyalleri ayırt menşeli yeteneğidir. Bu modelde kullanılan farelerin immün plan aynı zamanda bir başka &quot;insanlaştırılmasıdır&quot; yönü ekleme, insan immün hücre popülasyonlarının allojenik transferini sağlayacak. Farelerin immün plan ancak tüm eksik ya da, bu modelde, kusurlu NK, T ya da B-hücreleri için bir rol maskeleyebilir. Nispeten shorBu modelde kullanılan t zaman aralığı (24 saat) esas doğuştan yanıtı ilgilidir, ancak uzun vadeli enfeksiyonları ve bağışıklık diğer seçeneklerin geliştirilmesi için keşfedilmeyi gerekebilir. Cilt N. için önemli bir enfeksiyon sitesi meningitidis değil, insan damar nispeten küçük bir miktarına sahip olan, aynı zamanda çok sayıda organları etkileyen sistemik bir enfeksiyon için veri ekstrapolasyon zor olduğu anlamına gelir. Bu modeli dermal lezyon geliştirme çalışması için izin verir iken, bu gibi epitelyal ve kan-beyin çaprazlama olarak menengokok enfeksiyonu önemli adımlar dahil değildir. Bu insanlaştırılmış modellerin geliştirilmesi ile enfeksiyon bu yönlerini ele için gereklidir. Ancak bu model çok sayıda insan özel patojenlere, kan damarlarını hedefleyen özellikle olanlar için büyük bir potansiyel sunuyor.

Meningococcal sepsis, bakteriyel patojen Neisseria meningitidis tarafından neden olunan bir sıklıkla ölümcül bir kanla enfeksiyondur. Meningokok sepsis hastalar sıklıkla önceden dolaşan bakteriler ve bakteriyel ürünler 1 neden vasküler yıkım ile ilişkili olduğu kendi cilt üzerinde bir peteşiyal veya purpurik döküntü ile mevcut. Klinik hastalardan alınan deri biyopsileri genellikle damarlarına 2 dolgu, kılcal damarlarla ilişkili bakterileri göstermektedir. Yanı sıra, bakteriler, geniş tromboz, pıhtılaşma, tıkanıklık ve vasküler sızıntı purpurik bölgelerde 3-5 görülür. Bu vasküler hasar meningokok kurtulan debridman ve hatta amputasyon sonuçlanan, deri ve çevreleyen dokuların geniş nekrozu yol açabilir. Enfeksiyon, bu vasküler hasara neden nasıl anlamak önleme ve tedavi stratejilerini optimize etmek için önemlidir. Meningokok sepsis araştırma çoğunluğu üzerine in vitro yapılmıştırN. insan özellikten dolayı insan hücre çizgileri meningitidis. Enfeksiyon birçok yönleri bakteriyel yapışma, konakçı hücre yanıtı hem de sitokin tepkisi 6-9 de dahil olmak üzere, in vitro incelenmiştir. Tip IV pili (TFP) N. için önemli yapışma organel gibi emplikedir meningitidis epitelyal ve endotelyal hücreler 10 hem de. Ayrıca, N. bu yapışma gösterilmiştir konukçu hücrelere meningitidis kesme stresi bağımlıdır ve bu nedenle, mikrovasküler 11 kan akış hızları ile ilişkili olduğu düşünülmektedir. Bu bakteri in vivo yüz dinamik gerilmeler patogenezinde çok önemli olduğunu düşündürmektedir. Bu, in vitro olarak, küçük damarların mikro modellemek için ancak çok zordur. Neisseria TFP için yapışma reseptörü hala bilinmemektedir ve bu nedenle, bir hayvan modelinde bakteriyel yapışmayı elde etmek için knock-in stratejileri bu anda öngörülen edilemez. CD46 TFP reseptör ve transgenik hayvanlar fare modelleri olarak hareket etmek üretildi olduğu öne sürüldü. Bununla birlikte, bu hayvanlarda enfeksiyon geniş enfeksiyona yol değildir ya da geliştirme 12,13 döküntü. Neisseria enfeksiyonun bakteremi yönü için tarif edilmiş olan diğer hayvan modelleri dikkate bir demir kaynağı 14,15 insan transferin için bakteriyel tercih alır. Insan transferin tamamlayan ya da uzun bir süre içinde kan akışında bir artış bakteri yükünde bir transgen sonuçlardan bu ifade, ancak bu model no bakteriyel yapışmayı veya döküntü gelişimini gösterir 16,17 ya. Bu protokol, dermal mikrovasküler de dahil olmak üzere, insan derisi, farelerde bağışıklığı 18,19 üzerine transplante edildiği bir insanlaştırılmış fare modeli açıklar. Bu, fare dolaşımı ile perfüze fonksiyonel insan damarları, ile sonuçlanır. Insan transferin takviyesi ile birlikte, bu mOdel N. insan özel yönlerinden en az ikisi için hesaplar meningitidis, bir in vivo ortamda, insan endotel ve insan transferin, yani. N. meningitidis vasküler hasar ve purpurik döküntü gelişme 18 de dahil olmak üzere hastaların klinik, rapor ne benzer bir patoloji üreten, insan endotele özellikle uygun bu model damardan tanıttı.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="693">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">DMEM</td>
			<td style="width:161px;">Gibco Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">31885-023</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:161px;">Gibco Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">10010-056</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Ketamine 500</td>
			<td style="width:161px;">Virbac France&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">LOT N&#176;VAL4243</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Xylazine</td>
			<td rowspan="2" style="width:161px;">Bayer Healthcare</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">AMM N&#176; FR/8146715 2/1980</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;">LOT N&#176; KPO809S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">(Rompun 2%)</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:247px;">Optigel&#160;&#160;&#160;</td>
			<td rowspan="2" style="width:161px;">Europhta</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">Medicament autoris&#233; N&#176;3400933521134</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Lacrigel&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Tronothane</td>
			<td style="width:161px;">Lisa Pharma</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="40" rowspan="2" style="height:40px;width:247px;">GC agar Base</td>
			<td rowspan="2" style="width:161px;">Conda</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">1106</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Human endothelium SFM media</td>
			<td style="width:161px;">Gibco Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">11111</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:161px;">P A A</td>
			<td style="width:119px;">A15-101</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Human transferrin</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T3309</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">UEA lectin - rhodamine</td>
			<td style="width:161px;">Vector Labs</td>
			<td style="width:119px;">RL-1062</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Hematoxylin</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H9627</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Eosin</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E4009&#160;</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Xylene</td>
			<td style="width:161px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">534056</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;"></td>
			<td style="width:161px;">Humeca BV, Holland</td>
			<td style="width:119px;">4.SB01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">Equiptment Name</td>
			<td style="width:161px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalogue Number</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Sober Hand Dermatome</td>
			<td style="width:161px;">Humeca BV, Holland</td>
			<td style="width:119px;">4.SB01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Animal housing</td>
			<td style="width:161px;">Innovive</td>
			<td style="width:119px;">M-BTM-C8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Biopsy punch (4 mm)</td>
			<td style="width:161px;">Dominic Dutscher</td>
			<td style="width:119px;">30737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Fast-Prep lysing matrix M tubes</td>
			<td style="width:161px;">MP Bio</td>
			<td style="width:119px;">116923050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">MagNA Lyzer Green Beads</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:119px;">3358941001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">MagNA Lyzer</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:119px;">3358976001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Vectashield mounting media</td>
			<td style="width:161px;">Vector Labs</td>
			<td style="width:119px;">H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Vetbond</td>
			<td style="width:161px;">3M</td>
			<td style="width:119px;">1469SB</td>
			<td>Tissue Glue</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">OCT tissue tek</td>
			<td style="width:161px;">Sakura</td>
			<td style="width:119px;">4583</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

humanized mouse model to study bacterial infections targeting the microvasculature

Bu insan kan dolaşımına girdiğinde Neisseria meningitidis ağır, sık sık öldürücü sepsis neden olur. Enfeksiyon vasküler sızıntı, purpura döküntü ve nihai doku nekrozu geliştirilmesi ile sonuçlanan kan damarlarının geniş bir hasara yol açar. Bu enfeksiyonun patogenezinin incelenmesi, daha önce in vivo modellerde zorlaştırır bakterilerin insan özgüllük ile sınırlıydı. Bu protokol, insan derisi, dermal mikrodamarlar ihtiva eden, bağışıklık sistemi üzerine aşılanmış farelerde edildiği bu enfeksiyon için bir insanlaştırılmış modeli açıklar. Insan özelliklerini korurken bu gemiler fare dolaşımı ile anastomoz. Bir kez bu model, N. içine tanıttı meningitidis geniş vasküler hasar, enflamasyon ve purpurik döküntü bazı durumlarda gelişimi ile sonuçlanan insan gemiler için özel olarak uygun. Bu protokol conte bu modelin aşılama, enfeksiyon ve değerlendirme aşamalarını açıklarN. xt meningitidis enfeksiyonu. Bu teknik, kan akışı enfekte çok sayıda insana özgü patojenlere uygulanabilir.

CFU sayımları N. Bu temsili sonuçlarda kullanılan meningitidis soyu N olduğu , Opc - - PilC1 + / PilC2 + 20 meningitidis 8013 klon 12, bir serogrup C klinik izolat, ben SB pilin için Opa bir sınıf ifade. Suş bir kromozom ekleme 18 yeşil floresan protein (GFP) ifade etmek için edilmiştir. Bakteri kolonisi oluşturan birim sayısı agar plakaları üzerinde koloni sayısının sayılması ve kan CFU / ml veya kaplama, bilinen miktarlar doku CFU / mg ya da hesaplanarak belirlenir. Kan sayımları, 5 dakika 10 6 CFU bakteri iv enjeksiyonundan sonra kanda dolaşan 1.5 x 10 5 CFU / ml &#39;lik bir ortalama (Şekil 1A) var olduğunu gösterdi. 6 saat sonra sayısı 4.8 x 10 4 CFU / ml ortalama. 24 saat ile Ortalama sayılar 4 CFU / ml x 10 2,4 ama 10 farelerin bu grubunda, 5 vardısaptanabilir bir diğer 5 nispeten yüksek sayıları (Şekil 1A) vardı bakteri dolaşan. Deri örnekleri alınan CFU sayısı farenin 2.1 x 10 4 CFU 6 saat sonra doku / mg ve 24 saat sonra doku 4.4 x 10 2 CFU / mg (Şekil 1B), ortalama insan derisinde önemli bir sayısını olan çoğunluğunu göstermek . Kontralateral fare deri numuneleri N. için güçlü bir tercih gösteren, 24 saat ve 6 saat sonra, sadece çok az sayıda hiçbir bakteri miktarını göstermiştir Aşılanmış deri (Şekil 1 B) insan gemilere meningitidis. Genel olarak, bakteri sayısı 2 hayvanları, yüksek bakteri sayısını (Şekil 1C) dolaşan ile ilişkili olarak, kandan kirlenme atfedilebilir göstermek sayılarını, her ne kadar örnek, diğer organlarda bulgulanabilir olmayan çok düşüktü. Bu model aynı zamanda tip IV pi, örneğin, in vivo olarak hastalık oluşturma faktörlerinin rolü belirlemek için kullanılabilirli. Tanımlanan TFP yoksun bir suş ile sonuçlanan pilD genindeki mutasyonlar 21, hem de önerilen TFP &#39;adezini&#39; eksik pilC1 geni 8 ile Bakteriyel suşlar modeli tanıtıldı. Bu mutasyonlar TFP vivo (Şekil 1D) adezyonun oynadığı önemli rol onaylayan, insan deri grefti hiçbir bakteriyel yapışma sonuçlandı. İmmünohistokimya / Histoloji Bu deneylerde kullanılan N. İkinci boyanması için gerek kalmadan floresan tespit edilebilmesi için, yeşil floresan protein (GFP) ifade meningitidis suş. İnsan kaplar, insan endotel için bir marker ile ya da CD31 (PECAM-1) veya lektin Ulex europaeus agglutinin (UEA) 18,22 boyandı. UEA tek aşamalı bir boyama (Şekil 2A-C) izin rodamin konjüge edildi. Hücre çekirdekleri leke olabilirDAPI ile ed doku yapıları (Şekil 2A-B) belirlemenize yardımcı olması için. Histoloji standart hematoksilin / eozin lekeleme kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Cildin epidermal / dermal sınır açıkça tanımlanabilir oldu. Enflamasyon, tromboz ve damar sızıntısı enfeksiyonu (Şekil 2D) sonra bu sınır, 24 saat yakın kaplara konsantre edildi. Tromboz genellikle tıkanıklığı ve iltihabı eşlik birkaç küçük dermal damarları, görülebildi. Dokuların içine kırmızı kan hücrelerinin damar sızıntısı hasar geniş bir düzeyini belirten görülebilir. Enfekte olmamış aşılanmış farelerde deri histopatolojisi ayırt edilebilir bir inflamasyon 18, normal görünüyordu. Enfeksiyonlarının yaklaşık% 30 olarak, deri bakteriyel yapışma makroskopik olarak tespit purpura (Şekil 2E ve 2F) gelişmesine yol açar. <img alt="Şekil 1" fo:content-width=<html> Src = &quot;/ files/ftp_upload/51134/51134fig1highres.jpg&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/51134/51134fig1.jpg&quot; /&gt;: fo &quot;5in&quot; Şekil 1. CFU sayımları. (A), 5 dakika, 6 saat ve 24 saatlik enfeksiyondan kan ml başına Bakteri CFU sayımları. (B) Bakteriyel CFU 6 saat ve 24 saat sonrası enfeksiyon hem de insan cildi (HS) ve fare derisi (MS) karşılaştırarak deri örneklerinden sayar. (C) Bakteriyel CFU diğer organlar 24 saat sonrası enfeksiyon alınan sayar. Vahşi tip N. ile enfekte olan fareler 24 saat enfeksiyondan alındığı, insan ve fare derisi örneklerinden Bakteri CFU sayımları karşılaştırma (D) meningitidis 2C43 leke (WT), pilD geni (pilD) ya da pilC1 geni (pilC1) içinde bir mutasyona sahip bir suş içerisinde bir mutasyon içeren bir suş. Tüm grafikler medyan ile ham veri olarak gösterilmiştir. Şekil Melican et al. 18 değiştirildiğinde&quot;_blank&quot;&gt; Büyük resmi görebilmek için buraya tıklayın. <img alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51134/51134fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51134/51134fig2.jpg" /> Şekil 2. Dermal (d) epidermal (e) sınır yakınında UEA lektinle (kırmızı) ile boyanmış bir insan mikrodamar gösteren bir konfokal yığının mikroskopi. (A) Projeksiyon. Damar N. ile enfekte meningitidis (yeşil) 2 saat sonrası enfeksiyon. (B) bir optik dilim ve N. gösteren bir dilim projeksiyon (C) meningitidis mikrokoloniler (yeşil) enfeksiyonu insan kap (UEA - kırmızı) bir deri grefti 2 saat sonrası enfeksiyon içinde. Insan derisi greft (D) Hematoksilen / eozin lekeleme N ile 24 saat için enfekte meningitidis. Epidermal (e), dermal (d) sınır açıkça görülebilir ve kapsamlı tromboz ve microvess tıkanıklığı olanels (oklar) dermis görülür. Enflamasyon ve bazı vasküler sızıntı (ok başı) da tespit edilebilir. (E) enfeksiyon öncesinde Insan derisi grefti. (F) N. ile (E) 24 saat sonrası enfeksiyon gibi aynı deri grefti Purpurik bölgeleri (oklar) gösteren meningitidis. 2B, 2D, 2E, 2F ve Melican vd. 18. modifiye edilmiştir Rakamlar <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51134/51134fig2highres.jpg" target="_blank">büyük resmi görebilmek için buraya tıklayın</a> .

Watch this Scientific Journal Video about Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature at JoVE.com

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

Neisseria meningitidis kan damarları bulaşan bir insan özgü patojendir. Bu protokolde insan mikrodamarlar bağışıklığı fare üzerine insan cildi aşılama yaparak bir fare sokulur. Bakteriler genellikle insan durumda gözlenen purpurik döküntü vasküler hasar ve gelişimine yol açan, insan gemilere yoğun yapışır.

Insanlaşmış Fare Modeli mikrovaskülatürde Hedefleme Bakteriyel Enfeksiyonlar Eğitim için

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

humanized-mouse-model-to-study-bacterial-infections-targeting

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

14.7K Görüntüleme.  Paris Cardiovascular Research Centre.  Neisseria meningitidis kan damarları bulaşan bir insan özgü patojendir. Bu protokolde insan mikrodamarlar bağışıklığı fare üzerine insan cildi aşılama yaparak bir fare sokulur. Bakteriler genellikle insan durumda gözlenen purpurik döküntü vasküler hasar ve gelişimine yol açan, insan gemilere yoğun yapışır. 

Video: Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes. In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific immune cell types, viral pathogens, parasites and bacteria can be followed in real-time within living animals 1-2. Application of bioluminescence imaging to the study of pathogens has advantages as compared to conventional strategies for analysis of infections in animal models3-4. Infections can be visualized within individual animals over time, without requiring euthanasia to determine the location and quantity of the pathogen. Optical imaging allows comprehensive examination of all tissues and organs, rather than sampling of sites previously known to be infected. In addition, the accuracy of inoculation into specific tissues can be directly determined prior to carrying forward animals that were unsuccessfully inoculated throughout the entire experiment. Variability between animals can be controlled for, since imaging allows each animal to be followed individually. Imaging has the potential to greatly reduce animal numbers needed because of the ability to obtain data from numerous time points without having to sample tissues to determine pathogen load3-4.
This protocol describes methods to visualize infections in live animals using bioluminescence imaging for recombinant strains of bacteria expressing luciferase. The click beetle (CBRLuc) and firefly luciferases (FFluc) utilize luciferin as a substrate5-6. The light produced by both CBRluc and FFluc has a broad wavelength from 500 nm to 700 nm, making these luciferases excellent reporters for the optical imaging in living animal models7-9. This is primarily because wavelengths of light greater than 600 nm are required to avoid absorption by hemoglobin and, thus, travel through mammalian tissue efficiently. Luciferase is genetically introduced into the bacteria to produce light signal10. Mice are pulmonary inoculated with bioluminescent bacteria intratracheally to allow monitoring of infections in real time. After luciferin injection, images are acquired using the IVIS Imaging System. During imaging, mice are anesthetized with isoflurane using an XGI-8 Gas Anethesia System. Images can be analyzed to localize and quantify the signal source, which represents the bacterial infection site(s) and number, respectively. After imaging, CFU determination is carried out on homogenized tissue to confirm the presence of bacteria. Several doses of bacteria are used to correlate bacterial numbers with luminescence. Imaging can be applied to study of pathogenesis and evaluation of the efficacy of antibacterial compounds and vaccines.

Methods for bioluminescence imaging of bacterial infections in living animals are decribed. Pathogens are modified to express luciferase allowing optical whole body imaging of infections in live animals. Animal models can be infected with luciferase expressing pathogens and the resulting course of disease visualized in real-time by bioluminescence imaging.

Farelerde Görüntü Bakteriyel Enfeksiyonlar Lusiferaz Kullanımı

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the initial and determining step of the pathogenesis. Although experimentally adhesion is mostly studied in static conditions adhesion actually takes place in the presence of flowing liquid. First encounters between bacteria and their host often occur at the mucosal level, mouth, lung, gut, eye, etc. where mucus flows along the surface of epithelial cells. Later in infection, pathogens occasionally access the blood circulation causing life-threatening illnesses such as septicemia, sepsis and meningitis. A defining feature of these infections is the ability of these pathogens to interact with endothelial cells in presence of circulating blood. The presence of flowing liquid, mucus or blood for instance, determines adhesion because it generates a mechanical force on the pathogen. To characterize the effect of flowing liquid one usually refers to the notion of shear stress, which is the tangential force exerted per unit area by a fluid moving near a stationary wall, expressed in dynes/cm2. Intensities of shear stress vary widely according to the different vessels type, size, organ, location etc. (0-100 dynes/cm2). Circulation in capillaries can reach very low shear stress values and even temporarily stop during periods ranging between a few seconds to several minutes 1. On the other end of the spectrum shear stress in arterioles can reach 100 dynes/cm2 2. The impact of shear stress on different biological processes has been clearly demonstrated as for instance during the interaction of leukocytes with the endothelium 3. To take into account this mechanical parameter in the process of bacterial adhesion we took advantage of an experimental procedure based on the use of a disposable flow chamber 4. Host cells are grown in the flow chamber and fluorescent bacteria are introduced in the flow controlled by a syringe pump. We initially focused our investigations on the bacterial pathogen Neisseria meningitidis, a Gram-negative bacterium responsible for septicemia and meningitis. The procedure described here allowed us to study the impact of shear stress on the ability of the bacteria to: adhere to cells 1, to proliferate on the cell surface 5and to detach to colonize new sites 6 (Figure 1). Complementary technical information can be found in reference 7. Shear stress values presented here were chosen based on our previous experience1 and to represent values found in the literature. The protocol should be applicable to a wide range of pathogens with specific adjustments depending on the objectives of the study.

During the infection process, a key step is the adhesion of pathogens with host cells. In most instances this adhesion step occurs in the presence of mechanical stress generated by flowing liquid. We describe a technique that introduces shear stress as an important parameter in the study of bacterial adhesion.

Bakteriyel Yapışma Çalışma Kesme Stres Tanıtımı

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

Small animal models such as mice have been extensively used to study human disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of information gained from these studies, the unique characteristics of mouse immunity as well as the species specificity of viral diseases such as human immunodeficiency virus (HIV) infection led to the development of humanized mouse models. The earlier models involved the use of C. B 17 scid/scid mice and the transplantation of human fetal thymus and fetal liver termed thy/liv (SCID-hu) 1, 2 or the adoptive transfer of human peripheral blood leukocytes (SCID-huPBL) 3. Both models were mainly utilized for the study of HIV infection.
One of the main limitations of both of these models was the lack of stable reconstitution of human immune cells in the periphery to make them a more physiologically relevant model to study HIV disease. To this end, the BLT humanized mouse model was developed. BLT stands for bone marrow/liver/thymus. In this model, 6 to 8 week old NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) immunocompromised mice receive the thy/liv implant as in the SCID-hu mouse model only to be followed by a second human hematopoietic stem cell transplant 4. The advantage of this system is the full reconstitution of the human immune system in the periphery. This model has been used to study HIV infection and latency 5-8.
We have generated a modified version of this model in which we use genetically modified human hematopoietic stem cells (hHSC) to construct the thy/liv implant followed by injection of transduced autologous hHSC 7, 9. This approach results in the generation of genetically modified lineages. More importantly, we adapted this system to examine the potential of generating functional cytotoxic T cells (CTL) expressing a melanoma specific T cell receptor. Using this model we were able to assess the functionality of our transgenic CTL utilizing live positron emission tomography (PET) imaging to determine tumor regression (9).
The goal of this protocol is to describe the process of generating these transgenic mice and assessing in vivo efficacy using live PET imaging. As a note, since we use human tissues and lentiviral vectors, our facilities conform to CDC NIH guidelines for Biosafety Level 2 (BSL2) with special precautions (BSL2+). In addition, the NSG mice are severely immunocompromised thus, their housing and maintenance must conform to the highest health standards (<a href="http://jaxmice.jax.org/research/immunology/005557-housing.html" target="_blank">http://jaxmice.jax.org/research/immunology/005557-housing.html</a>).

The generation and characterization of tumor specific T cells using humanized mice is described here. Human thymic tissue and genetically modified human hematopoietic stem cells are transplanted into immunocompromised mice. This results in the reconstitution of an engineered human immune system allowing for in vivo examination of anti-tumor immune responses.

Bir Kök Hücre tabanlı Gen Terapisi Tümör Modeli olarak BLT Insanlaşmış Fare Kullanma

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of insects as infection models provides a valuable alternative. Compared to other non-vertebrate model hosts such as nematodes, insects have a relatively advanced system of antimicrobial defenses and are thus more likely to produce information relevant to the mammalian infection process. Like mammals, insects possess a complex innate immune system1. Cells in the hemolymph are capable of phagocytosing or encapsulating microbial invaders, and humoral responses include the inducible production of lysozyme and small antibacterial peptides2,3. In addition, analogies are found between the epithelial cells of insect larval midguts and intestinal cells of mammalian digestive systems. Finally, several basic components essential for the bacterial infection process such as cell adhesion, resistance to antimicrobial peptides, tissue degradation and adaptation to oxidative stress are likely to be important in both insects and mammals1. Thus, insects are polyvalent tools for the identification and characterization of microbial virulence factors involved in mammalian infections.
Larvae of the greater wax moth Galleria mellonella have been shown to provide a useful insight into the pathogenesis of a wide range of microbial infections including mammalian fungal (Fusarium oxysporum, Aspergillus fumigatus, Candida albicans) and bacterial pathogens, such as Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Serratia marcescens Pseudomonas aeruginosa, Listeria monocytogenes or Enterococcus faecalis4-7. Regardless of the bacterial species, results obtained with Galleria larvae infected by direct injection through the cuticle consistently correlate with those of similar mammalian studies: bacterial strains that are attenuated in mammalian models demonstrate lower virulence in Galleria, and strains causing severe human infections are also highly virulent in the Galleria model8-11. Oral infection of Galleria is much less used and additional compounds, like specific toxins, are needed to reach mortality.
G. mellonella larvae present several technical advantages: they are relatively large (last instar larvae before pupation are about 2 cm long and weight 250 mg), thus enabling the injection of defined doses of bacteria; they can be reared at various temperatures (20 &deg;C to 30 &deg;C) and infection studies can be conducted between 15 &deg;C to above 37 &deg;C12,13, allowing experiments that mimic a mammalian environment. In addition, insect rearing is easy and relatively cheap. Infection of the larvae allows monitoring bacterial virulence by several means, including calculation of LD5014, measurement of bacterial survival15,16 and examination of the infection process17. Here, we describe the rearing of the insects, covering all life stages of G. mellonella. We provide a detailed protocol of infection by two routes of inoculation: oral and intra haemocoelic. The bacterial model used in this protocol is Bacillus cereus, a Gram positive pathogen implicated in gastrointestinal as well as in other severe local or systemic opportunistic infections18,19.

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

Oral and intra haemocolic infection of larvae of the greater wax moth Galleria mellonella is described. This insect can be used to study virulence factors of entomopathogenic as well as mammalian opportunistic bacteria. Rearing of the insects, methods of infection and examples of in vivo analysis are described.

Böcek<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Bakteriyel Patogenez İnceleyecek Güçlü Enfeksiyon Model olarak

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the respective immune response to each single pathogen and may thereby affect pathogenesis and disease outcome. Coinfected patients may also respond differentially to anti-infective interventions. Coinfection between tuberculosis as caused by mycobacteria and the malaria parasite Plasmodium, both of which are coendemic in many parts of sub-Saharan Africa, has not been studied in detail. In order to approach the challenging but scientifically and clinically highly relevant question how malaria-tuberculosis coinfection modulate host immunity and the course of each disease, we established an experimental mouse model that allows us to dissect the elicited immune responses to both pathogens in the coinfected host. Of note, in order to most precisely mimic naturally acquired human infections, we perform experimental infections of mice with both pathogens by their natural routes of infection, i.e. aerosol and mosquito bite, respectively.

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

Tuberculosis and malaria are two of the most prevalent infections in humans and major causes of morbidity and mortality in impoverished populations in the tropics. We established an experimental model system to study outcome of malaria-tuberculosis coinfection in mice after challenge with both pathogens via their natural route of infection.

Doğal İletim üzerine Tüberküloz-Sıtma Koenfeksiyonu Çalışması için Deneysel Bir Model Mycobacterium tuberculosis Ve Plasmodium berghei</i

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence factors, which can subvert and manipulate key host functions. The study of host/pathogen interactions is therefore extremely important to understand bacterial infections and develop alternative strategies to counter infectious diseases. This approach however, requires the development of new high-throughput assays for the unbiased, automated identification and characterization of bacterial virulence determinants. Here, we describe a method for the generation of a GFP-tagged mutant library by transposon mutagenesis and the development of high-content screening approaches for the simultaneous identification of multiple transposon-associated phenotypes. Our working model is the intracellular bacterial pathogen Coxiellaburnetii, the etiological agent of the zoonosis Q fever, which is associated with severe outbreaks with a consequent health and economic burden. The obligate intracellular nature of this pathogen has, until recently, severely hampered the identification of bacterial factors involved in host pathogen interactions, making of Coxiella the ideal model for the implementation of high-throughput/high-content approaches.

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Coxiella burnetii is an obligate intracellular Gram-negative bacterium responsible for the zoonotic disease Q fever. Here we describe methods for the generation of Coxiella fluorescent transposon mutants as well as the automated identification and analysis of the resulting internalization, replication and cytotoxic phenotypes.

Üretim ve Çok fenotipik Yüksek içerik Eleme<em&gt; Coxiella burnetii</em&gt; Transposon Mutantlar

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the shear stress of flowing blood.
To identify the bacterial and host factors that contribute to vascular adhesion of microorganisms, appropriate models that study these interactions under physiological shear conditions are needed. Here, we describe an in vitro flow chamber model that allows to investigate bacterial adhesion to different components of the extracellular matrix or to endothelial cells, and an intravital microscopy model that was developed to directly visualize the initial adhesion of bacteria to the splanchnic circulation in vivo. These methods can be used to identify the bacterial and host factors required for the adhesion of bacteria under flow. We illustrate the relevance of shear stress and the role of von Willebrand factor for the adhesion of Staphylococcus aureus using both the in vitro and in vivo model.

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

To study the interaction of bacteria with the blood vessels under shear stress, a flow chamber and an in vivo mesenteric intravital microscopy model are described that allow to dissect the bacterial and host factors contributing to vascular adhesion.

In Vitro ve İn Vivo Modeli Gemi Duvar Altında Akış Koşulları Bakteriyel Yapışma Eğitim için

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the ...

Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is imperative to design experiments using human cells and tissues. An advantage of organ culture is maintenance of three-dimensional (3D) structural organization and extracellular matrix. The goal of the method described here is successful establishment of ex vivo human gestational tissue organ cultures and their healthy culture maintenance for 72-96 hr. The protocol details the immediate processing of research-consented, placental and decidual specimens fresh from the operating suite. These are abundant specimens that would otherwise be discarded. Detailed instructions on the sterile collection of these samples, including morphologic details on how to select appropriate tissues to establish 3D organ cultures, is provided. Placental villous and decidual tissues are microdissected into 2-3 mm3 pieces and placed separately on matrix-lined transwell filters and cultured for several days. Villous and decidual organ cultures are well suited for the study of human host-pathogen interaction. As compared to other model organisms, these human cultures are particularly advantageous to examine mechanism of infection for pathogens that demonstrate variable patterns of host specificity. As an example, we demonstrate infection of placental and decidual organ cultures with the clinically relevant, facultative intracellular bacterial pathogen Listeria monocytogenes.

A simple method to establish primary human placental (villous) and decidual organ cultures is described. Villous and decidual organ cultures are invaluable tools for studying pathogenesis at the human maternal-fetal interface. Infection with the facultative intracellular bacterium Listeria monocytogenes is demonstrated.

İnsan Plasental ve Desidual Organ Kültürleri Maternal-Fetal Arayüz de Enfeksiyonlar Eğitim için

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is ...

Methods to Study Lipid Alterations in Neutrophils and the Subsequent Formation of Neutrophil Extracellular Traps

Lipid analysis performed by high performance thin layer chromatography (HPTLC) is a relatively simple, cost-effective method of analyzing a broad range of lipids. The function of lipids (e.g., in host-pathogen interactions or host entry) has been reported to play a crucial role in cellular processes. Here, we show a method to determine lipid composition, with a focus on the cholesterol level of primary blood-derived neutrophils, by HPTLC in comparison to high performance liquid chromatography (HPLC). The aim was to investigate the role of lipid/cholesterol alterations in the formation of neutrophil extracellular traps (NETs). NET release is known as a host defense mechanism to prevent pathogens from spreading within the host. Therefore, blood-derived human neutrophils were treated with methyl-&#946;-cyclodextrin (M&#946;CD) to induce lipid alterations in the cells. Using HPTLC and HPLC, we have shown that M&#946;CD treatment of the cells leads to lipid alterations associated with a significant reduction in the cholesterol content of the cell. At the same time, M&#946;CD treatment of the neutrophils led to the formation of NETs, as shown by immunofluorescence microscopy. In summary, here we present a detailed method to study lipid alterations in neutrophils and the formation of NETs.

Lipids are known to play an important role in cellular functions. Here, we describe a method to determine the lipid composition of neutrophils, with emphasis on the cholesterol level, by using both HPTLC and HPLC to gain a better understanding of the underlying mechanisms of neutrophil extracellular trap formation.

Yöntemler lipid Nötrofiller değişiklikler ve Nötrofil Ekstrasellüler Tuzaklar sonraki oluşumunu incelemek

Lipid analysis performed by high performance thin layer chromatography (HPTLC) is a relatively simple, cost-effective method of analyzing a broad range of ...

The WinCF Model - An Inexpensive and Tractable Microcosm of a Mucus Plugged Bronchiole to Study the Microbiology of Lung Infections

Many chronic airway diseases result in mucus plugging of the airways. Lungs of an individual with cystic fibrosis are an exemplary case where their mucus-plugged bronchioles create a favorable habitat for microbial colonization. Various pathogens thrive in this environment interacting with each other and driving many of the symptoms associated with CF disease. Like any microbial community, the chemical conditions of their habitat have a significant impact on the community structure and dynamics. For example, different microorganisms thrive in differing levels of oxygen or other solute concentrations. This is also true in the CF lung, where oxygen concentrations are believed to drive community physiology and structure. The methods described here are designed to mimic the lung environment and grow pathogens in a manner more similar to that from which they cause disease. Manipulation of the chemical surroundings of these microbes is then used to study how the chemistry of lung infections governs its microbial ecology. The method, called the WinCF system, is based on artificial sputum medium and narrow capillary tubes meant to provide an oxygen gradient similar to that which exists in mucus-plugged bronchioles. Manipulating chemical conditions, such as the media pH of the sputum or antibiotics pressure, allows for visualization of the microbiological differences in those samples using colored indicators, watching for gas or biofilm production, or extracting and sequencing the nucleic acid contents of each sample.

The mucus plugged airways of cystic fibrosis (CF) patients are an ideal environment for microbial pathogens to thrive. The manuscript describes a novel method for studying the CF lung microbiome in an environment that mimics where they cause disease and how alterations of chemical conditions can drive microbial dynamics.

WinCF Modeli - Bir Mukus bir Ucuz ve Çekilebilir Microcosm Akciğer İnfeksiyonları Mikrobiyoloji Eğitim için bronşiole Takıldı

Many chronic airway diseases result in mucus plugging of the airways. Lungs of an individual with cystic fibrosis are an exemplary case where their ...