Name: an orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis
Uploaded: 2016-08-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
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Supported by grants from the National Institute of Health grants CA133085, CA182518 and CA185909 (to KL) and VA Merit Review Award BX001962 (to KL).

Tutte le procedure seguono linee guida e protocolli approvati da parte della Georgia Regents dell&#39;Università degli animali e del Comitato Usa Care. 1. Istituzione di ortotopico tumore cancro al seno <ol><li> Un giorno prima dell&#39;esperimento, la cultura di circa 2 x 10 6 cellule tumorali 4T1-Luc in un piatto di coltura di 10 cm in 10 ml RPMI mezzo contenente 10% FBS. Incubare la piastra di coltura in un incubatore CO 2 a 37 ° C e 5% CO 2. </li><li> Il giorno di iniezione delle cellule tumorali, togliere terreno di coltura dalla piastra di coltura con il vuoto, aggiungere 5 ml di fosfato sterile salina tamponata (PBS), pH 7,4 al piatto cultura, e scuotere delicatamente il piatto per lavare la superficie della cultura, rimuovere il PBS sotto vuoto. </li><li> Aggiungere 2 ml di tripsina-EDTA (0,05% tripsina e 0,53 mM EDTA) al piatto di coltura, incubare nell&#39;incubatore CO 2 a 37 ° C per circa 5 min. Controllare cellule su un microscopio invertito per assicurarsi che tutte le cellule sono staccate dal fondo del piatto cultura. &lt;/ Li&gt; <li> Quench tripsina aggiungendo 8 ml medie siero contenenti celle di trasferimento ad un tubo conico da 15 ml e centrifugare le cellule a circa 450 xg per 3 min a RT. </li><li> Rimuovere il surnatante dalle cellule del vuoto e risospendere in 10 ml di PBS. cellule centrifugare a circa 450 xg per 3 min. Rimuovere il surnatante dal vuoto, e risospendere le cellule in 10 ml di PBS. </li><li> Pipettare 10 ml di sospensione cellulare in un emocitometro sotto il vetro di copertura. Contare le cellule per determinare la concentrazione cellulare. Risospendere le cellule in PBS ad una densità di 2 x 10 5 cellule / ml HBSS. Trasferire le cellule ad un 1,5 ml provetta da microcentrifuga sterile e mantenere le cellule in ghiaccio fino al momento dell&#39;uso. </li><li> Utilizzare femmina BALB / c topi di 6-8 settimane per l&#39;iniezione delle cellule tumorali. <ol><li> Radere capelli vicino circostante capezzolo # 3 utilizzando un trimmer capelli elettronica. L&#39;iniezione di cellule 4T1 nel mammaria cuscinetto adiposo ghiandola 3 genera riproducibile metastasi polmonari. Pulire la zona rasata utilizzando il bastoncino di cotone imbevuto nel 70% ethanol. Risospendere le cellule invertendo la provetta 2 - 3 volte. Delicatamente aspirato 50 ml di sospensione cellulare in un ½ CC 27 G 1/2 tubercolina siringa. </li><li> Iniettare le cellule tumorali nel cuscinetto di grasso mammaria sotto # 3 ghiandola mammaria di un topo BALB / c. Posizionare il mouse in una gabbia pulita e riportare la gabbia per impianto di stabulazione degli animali. Attendere circa 21 - 30 giorni per lo sviluppo del tumore. La crescita del tumore deve essere monitorata in maniera regolare secondo le norme dell&#39;istituto per gli studi tumorali. </li></ol></li></ol> 2. vivo mouse bioluminescenza Imaging di crescita tumorale <ol><li> topi immagine ogni 3 giorni dopo i topi di trasferimento di iniezione del tumore alla struttura di imaging. Iniettare 100 luciferina microlitri (30 mg / ml in PBS) per via intraperitoneale (ip) a topi prima imaging. Dopo circa 10 minuti, anestetizzare topi in una camera di induzione con O 2 / flusso isoflurano 2%. Utilizzare le pinze per toccare la gamba del mouse. Nessuna reazione al tatto conferma that il mouse è completamente privo di sensi. <ol><li> Posizionare i topi in camera di imaging con continuo 2% isoflurano e O 2 ad un flusso di 2 L / min. Posizionare il mouse tale che l&#39;area di interesse (cioè, il pad mammaria dell&#39;iniezione tumore iniziale) di fronte alla telecamera del sistema di imaging. Assicurarsi che il naso e la bocca del mouse sono saldamente fissato all&#39;interno del tubo di anestetico. Gli animali devono essere anestetizzati per norme veterinarie presso l&#39;istituto. </li></ol></li><li> Acquisire l&#39;imaging bioluminescenza con una serie di vari tempi di esposizione. Ad esempio, impostare l&#39;esposizione a 30, campo visivo (FOV) a 25, altezza dell&#39;oggetto da 1,5 cm, e di ottenere immagini fotografiche luminescenti con i raggi X a bassa potenza. Impostare le unità di misura per &quot;splendore&quot;. <ol><li> Utilizzare una gamma colore automatica lineare con un massimo di circa 2,4 unità x 10 7 radianza. Dopo aver acquisito le immagini iniziali, regolare le impostazioni e ottenere un immagine ottimizzata (Figuras 3 e 4). </li></ol></li><li> topi per pulire le gabbie e assicurano topi riacquistano coscienza con la deambulazione, prima di tornare gli animali alla struttura alloggiativa tornare. </li><li> Analizzare i dati con il software di imaging di vita associata allo strumento di imaging. Utilizzando un programma di imaging, tracciare una linea chiusa intorno alla regione di interesse (ROI). Utilizzare il software di imaging per determinare l&#39;intensità splendore del ROI. Registrare le intensità relative di ogni ROI per ogni mouse. NOTA: elevate intensità di radianza indicano maggiori livelli di cellule luminescenti, e così una maggiore crescita del tumore. </li><li> Esaminare visivamente il mouse ogni 3 giorni per gli effetti avversi. NOTA: I topi saranno pesati una volta alla settimana. Una perdita di peso del peso corporeo del 15% sarà considerato effetto negativo e topi portatori di tumore sarà eutanasia come descritto nella fase saranno sacrificati 5. I topi con tumori ulcerate. </li></ol> 3. La rimozione chirurgica dei tumori primari NOTE: forbici Autoclave, pinze e le clip ferita e ferita clip di applicatore (Figura 1). <ol><li> Eseguire l&#39;intervento in una cappa sterile per mantenere una condizione sterile per ridurre il rischio di infezione. Un giorno prima dell&#39;intervento chirurgico, radere l&#39;area che circonda i tumori dei topi portatori di tumore con un trimmer capelli elettrici. </li><li> Circa 2 - 4 ore prima dell&#39;intervento chirurgico, alimentare i topi compresse masticabili carprofen formulati per topi ad una dose di 5 mg / kg di peso corporeo. </li><li> Mettere i topi in una camera contenente 2% isoflurano in ossigeno per circa 30 sec. Continuamente anestetizzare il mouse utilizzando un&#39;apparecchiatura anestesia durante l&#39;intero periodo chirurgica. </li><li> Usare un bastoncino di cotone sterile per applicare veterinario unguento per gli occhi del mouse per prevenire la secchezza mentre sotto anestesia. Utilizzare le pinze per toccare la gamba del mouse. Nessuna reazione al tatto conferma che il mouse è completamente privo di sensi. </li><li> Disinfettare l&#39;area pelle intorno al sito del tumore con tre alternatasalviette di uno scrub sapone disinfettante. Pulire l&#39;area chirurgica con un alcool al 70% pulire. </li><li> Utilizzare un bisturi sterilizzato (Figura 1) per tagliare una piccola incisione vicino al tumore. </li><li> Inserire la punta di un paio di forbici sterilizzati per l&#39;incisione per tagliare la pelle attorno al tumore per esporre il nodulo tumorale (Figura 2A). Tenere il tumore con pinze sterili e utilizzare le forbici per separare il tumore della pelle (Figura 2B). Salvare il campione del tumore congelando in un -80 ° C congelatore o fissando in formalina al 10% per un uso futuro. </li><li> Chiudere il sito chirurgico con clip ferita da 9 mm utilizzando l&#39;applicatore automatico-clip (Figura 1). Ritorna il mouse in una gabbia pulita con biancheria da letto in autoclave. Gli animali devono essere monitorati secondo le linee guida istituzionali. NOTA: Il mouse di solito riprende conoscenza sufficiente e inizia a muoversi nella gabbia di circa 10 - 30 min dopo l&#39;intervento chirurgico. </li><li> Somministrare Carprofen atopi nuovamente 24 ore dopo l&#39;intervento chirurgico. Carprofen è per post-operatorio analgesia e la prescrizione di post-operatorio analgesia vanno verificate mediante consultazione diretta con il personale veterinario dell&#39;istituzione. Rimuovere clip ferita dopo la ferita guarisce (di solito entro 5 - 7 giorni dopo l&#39;intervento). Rimuovere clip ferita utilizzando il dispositivo di rimozione auto-clip. </li></ol> 4. vivo mouse bioluminescenza Imaging di tumore metastasi <ol><li> topi Immagine ogni 3 giorni dopo l&#39;intervento, come descritto al punto 2. </li></ol> 5. La convalida del polmone metastasi Utilizzando inflazione India inchiostro di polmoni tumore-cuscinetto NOTA: Per convalidare i luciferasi in tempo reale risultati di imaging del tumore, eseguire l&#39;India l&#39;inflazione inchiostro dei polmoni del mouse tumore-cuscinetto per quantificare noduli tumorali. Cellule 4T1 metastatizzano anche ad altri organi e tessuti (Figura 5) e che, quindi, l&#39;esame istologico di tali organi per convalidare metastasi tumorali dovrebbe essere eseguita se necessario. Questo uso del protocollo lung metastasi come un esempio. <ol><li> Mantenere i topi nella loro gabbia casa esistente per l&#39;eutanasia. Quando ospitato con altri animali, spostare quei topi non sottoposti a eutanasia di una gabbia diversa. </li><li> Togliere la parte superiore del filtro gabbia e sostituirlo con la parte superiore del filtro di CO 2. Accendere cilindro compresso gas CO 2 (100%) che è collegato alla parte superiore del filtro CO 2. Impostare la velocità di flusso a 2 L / min e mantenere CO 2 per almeno 10 min. Se i topi sono respiravano ancora alla fine di 10 min, lasciare la CO 2 fino almeno 1 min dopo topi interrompere la respirazione. Spegnere CO 2 di controllo del cilindro e il misuratore di portata. Attendere altri 3 minuti e rimuovere la parte superiore del filtro. </li><li> Posizionare il mouse sacrificato sulla sua schiena su una tavola di polistirolo. Pin le gambe per garantire l&#39;accesso senza ostacoli alla trachea. Spruzzare i topi con il 70% di etanolo. </li><li> Utilizzando un paio di forbici, tagliare lungo la linea mediana della metà addome del mouse attraverso la gabbia toracica e verso il salivariare ghiandole. Osservare la trachea. Usare pinze per rimuovere tessuti circostanti la trachea per esporre la trachea. </li><li> Infilare un puntale sotto la trachea. Tenendo la punta con una mano, sollevare delicatamente la trachea alto e lontano dal corpo. </li><li> Ruotare la piattaforma tenendo premuto il mouse 180 °. Utilizzare un ½ CC 27 G 1/2 tubercolina siringa per iniettare l&#39;India inchiostro (10% inchiostro di china e lo 0,1% di idrossido di ammonio) nei polmoni attraverso la trachea. Completamente gonfiare i polmoni con inchiostro finché non si avverte una forte resistenza. </li><li> Utilizzare un paio di forbici per tagliare la trachea. Utilizzare pinze per tenere il mouse e inserire un altro set di pinze sotto i polmoni e tirare i lobi polmonari fuori dal mouse. Risciacquare brevemente i polmoni in un bicchiere contenente acqua. </li><li> In cappa, trasferire i polmoni in una fiala di vetro scintillazione contenente 3 ml di soluzione di Fekete (50% etanolo, 6% formaldeide e 3% di acido acetico glaciale). Chiudere la fiala per evitare che la soluzione evaporazione. NOTA: I tessuti possono essere conservati in soluzione di Fekete indefinitamente. </li><li> Dopo alcuni minuti, osservare noduli tumorali come punti bianchi sui polmoni neri (Figura 5). Il nodulo tumorale bianco è visibile agli occhi. Trasferire i polmoni di un piatto in una cappa aspirante e contare il numero di punti bianchi. Ogni macchia bianca rappresenta un singolo nodulo tumorale metastatico. </li></ol>

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Mice were purchased from the Jackson Laboratory and housed in the Georgia Regents University animal facility. Experiments and care/welfare were in agreement with federal regulations and an approved protocol by the Georgia Regents University IACUC committee. The authors have nothing to disclose.

Sono stati sviluppati molti tipi di modelli di topi transgenici di metastasi del cancro al seno. 1 Questi topi transgenici hanno un&#39;alta incidenza di tumore che vanno da 60 a 100%. Tuttavia, l&#39;incidenza di metastasi di questi topi transgenici è molto inferiore rispetto all&#39;incidenza del tumore (14 - 100%). Le cellule tumorali metastatizzano a LN e polmoni nella maggior parte di questi modelli di topi transgenici di metastasi del cancro al seno. La latenza metastasi varia da modello a modello e va...

Secondo l&#39;American Cancer Society, il cancro al seno è la forma più frequentemente diagnosticata di cancro nelle donne negli Stati Uniti. La diagnosi precoce in combinazione con terapie mirate recentemente sviluppati ha ridotto significativamente la mortalità di cancro al seno negli ultimi due decenni. Tuttavia, il cancro al seno è ancora la seconda causa di morte per cancro nelle donne negli Stati Uniti 1. La maggior parte dei decessi di pazienti affetti da cancro al seno sono dovute a metastasi delle cellule tumorali. Purtroppo, la maggior cancro al seno è invasivo e spesso metastatizza al linfonodo e successivamente in organi distanti, tra cui ossa, polmoni, fegato e cervello. 1,2 al momento non c&#39;è una terapia efficace per il carcinoma mammario metastatico. Pertanto, lo sviluppo di agenti chemioterapici e immunoterapia per sopprimere carcinoma mammario metastatico è di grande importanza. modelli di metastasi spontanea del mouse Vari cancro al seno abbiano ieen sviluppato per studiare i meccanismi molecolari alla base la progressione delle cellule tumorali della mammella e metastasi e da utilizzare come modelli per lo sviluppo di agenti terapeutici. 1,3-5 Tuttavia, la maggior parte di questi modelli di topo sono modelli tumorali genetiche che, mentre gli ottimi modelli per meccanicistica studi, non sono adatti per testare agenti terapeutici in quanto la metastasi vogliono mesi per sviluppare in questi modelli genetici, richiedendo in tal modo l&#39;amministrazione costosi a lungo termine degli agenti anti-cancro. 6,7 di monitoraggio progressione del tumore nei topi dal vivo è anche tecnicamente impegnativo. Al contrario, un seno modello di metastasi del cancro trapiantato ha i vantaggi della progressione tumorale termine breve e facile il monitoraggio della progressione del tumore nei topi vivi. Il modello murino di metastasi spontanea 4T1 ortotopico tumore al seno è un tale modello di tumore trapiantato. 8 In questo modello, le cellule del tumore al seno sono trapiantate nel cuscinetto di grasso mammaria per stabilire noduli tumorali primarie. Il tumore primariopossono poi essere rimosso chirurgicamente come nei pazienti con cancro mammario umano. 4T1 cellule tumorali sono altamente invasiva. 8,9, 3,10 Quasi tutti i tumori-cuscinetto topi sviluppano metastasi in 30 giorni dopo il trapianto del tumore nel cuscinetto adiposo mammario. Tuttavia, i tumori 4T1 crescono in modo aggressivo nei siti primari e le dimensioni del tumore spesso superano i limiti a cui è consentito nella maggior parte dei protocolli di animali. In questa fase, le metastasi sono spesso micrometastasi. Pertanto, è essenziale per rimuovere i tumori primari di consentire il progresso metastasi per testare agenti terapeutici. Qui, si segnala l&#39;istituzione di una procedura semplice e tuttavia sensibile del trapianto di tumore primario, la rimozione chirurgica del tumore primario e bioluminescenza quantificazione di imaging-based della crescita tumorale 4T1 e la progressione in vivo.

<table><tbody><tr><td>Ami-X Imaging System&amp;nbsp;</td><td>Spectral Instruments Imaging Inc. Tucson, AZ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IsoTec SurgiVet</td><td>Anesthesia Service &amp;amp; Equipment , Inc., Atlanta, GA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AutoClip Physicians Kit</td><td>Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td><td>427638</td><td></td></tr><tr><td>9 mm AutoClip Applier&amp;nbsp;</td><td>Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td><td>427630</td><td></td></tr><tr><td>9 mm AutoClip Remover</td><td>Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td><td>427637</td><td></td></tr><tr><td>9 mm AutoClip Wound Clip</td><td>Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td><td>427631</td><td></td></tr><tr><td>Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td><td>Fisher</td><td>8940</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting Fine-Pointed Forceps</td><td>Fisher</td><td>8875</td><td></td></tr><tr><td>1/2 CC 27&amp;nbsp;G&amp;nbsp;1/2 tuberculin syringe</td><td>Becton Dickinson and Co. NJ&amp;nbsp;</td><td>305620</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium</td><td>Mediatech Inc</td><td>10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Mediatech Inc</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td>Ultrapure-usa.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Mediatech Inc</td><td>25-040-CI</td><td></td></tr></tbody></table>

an orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis

Metastasi è la prima causa di mortalità dei pazienti affetti da cancro al seno. Il meccanismo alla base di metastasi delle cellule tumorali, tra cui metastasi del cancro al seno, è in gran parte sconosciuto e è un focus nella ricerca sul cancro. Vari modelli di cancro al seno spontanei metastasi di topo sono state stabilite. Qui, riportiamo una procedura semplificata per stabilire ortotopico trapiantato tumore primario cancro al seno e conseguente metastasi spontanea che imitano metastasi del cancro al seno umano. In combinazione con l&#39;immagine del tumore dal vivo bioluminescenza, questo modello di topo permette la crescita del tumore e la cinetica di progressione di essere monitorati e quantificati. In questo modello, una dose bassa (1 x 10 4 cellule) delle cellule del cancro al seno 4T1-Luc è stato iniettato in / c cuscinetto di grasso del mouse mammaria BALB utilizzando una siringa da tubercolina. I topi sono stati iniettati con luciferina e ripreso in vari momenti che utilizzano un sistema di imaging bioluminescente. Quando i tumori primari sono cresciuti per il limite di dimensione, come nel protocollo IACUC approvato (approximately 30 giorni), i topi sono stati anestetizzati sotto costante flusso di 2% isoflurano e ossigeno. L&#39;area del tumore è stata sterilizzata con il 70% di etanolo. La pelle del mouse attorno al tumore è stato asportato per esporre il tumore che è stato rimosso con un paio di forbici sterili. La rimozione del tumore primario prolunga la sopravvivenza dei topi 4T-1 tumorale portante per un mese. I topi sono stati poi più volte ripreso per tumore metastatico diffusione agli organi distanti. agenti terapeutici possono essere somministrati per sopprimere la metastasi tumorale a questo punto. Questo modello è semplice e tuttavia sensibile per quantificare la crescita delle cellule del cancro al seno nel sito primario e la cinetica di progressione in organi distanti, e quindi è un ottimo modello per studiare la crescita del cancro al seno e la progressione, e per testare agenti anti-metastasi terapeutici e di immunoterapia in vivo .

Istituzione di ortotopico seno modello di cancro del mouse 4T1 è una linea di cellule di carcinoma mammario aggressivo. L&#39;iniezione di un minimo di 1 x 10 4 cellule nel cuscinetto di grasso mammaria può portare alla creazione di un singolo nodulo tumorale nel sito di iniezione (Figura 2A). Pertanto, il tumore imita carcinoma mammario primario umana. Quasi 100 i topi% sviluppano il tumore ortotopico. La dimensione del tumore può e...

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An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis

Un modello di tumore primario del cancro al seno ortotopica e la rimozione chirurgica del tumore primario di estendere la vita del mouse per generare metastasi spontanee sono descritti. La crescita del tumore e la progressione sono monitorati e quantificati mediante imaging di fluorescenza luciferasi.

Un modello murino ortotopico di spontanea Breast Cancer metastasi

Metastasis is the primary cause of mortality of breast cancer patients. The mechanism underlying cancer cell metastasis, including breast cancer ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

30.7K Views.  Augusta University.  Un modello di tumore primario del cancro al seno ortotopica e la rimozione chirurgica del tumore primario di estendere la vita del mouse per generare metastasi spontanee sono descritti. La crescita del tumore e la progressione sono monitorati e quantificati mediante imaging di fluorescenza luciferasi. 

Video: An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast cancer metastasis, and results in poor outcomes with median survival rates of only 4.8 - 15 months. Current rodent models of breast cancer metastasis, including primary tumor cell xenograft and spontaneous tumor models, rarely metastasize to the liver. Intracardiac and intrasplenic injection models do result in liver metastases, however these models can be confounded by concomitant secondary-site metastasis, or by compromised immunity due to removal of the spleen to avoid tumor growth at the injection site. To address the need for improved liver metastasis models, a murine portal vein injection method that delivers tumor cells firstly and directly to the liver was developed. This model delivers tumor cells to the liver without complications of concurrent metastases in other organs or removal of the spleen. The optimized portal vein protocol employs small injection volumes of 5 - 10 &#956;l, &#8805; 32 gauge needles, and hemostatic gauze at the injection site to control for blood loss. The portal vein injection approach in Balb/c female mice using three syngeneic mammary tumor lines of varying metastatic potential was tested; high-metastatic 4T1 cells, moderate-metastatic D2A1 cells, and low-metastatic D2.OR cells. Concentrations of &#8804; 10,000 cells/injection results in a latency of ~ 20 - 40 days for development of liver metastases with the higher metastatic 4T1 and D2A1 lines, and &#62; 55 days for the less aggressive D2.OR line. This model represents an important tool to study breast cancer metastasis to the liver, and may be applicable to other cancers that frequently metastasize to the liver including colorectal and pancreatic adenocarcinomas.

A surgical procedure was developed to deliver mammary tumor cells to the murine liver via portal vein injection. This model permits investigation of late stages of liver metastasis in a fully immune competent host, including tumor cell extravasation, seeding, survival, and metastatic outgrowth in the liver.

Un modello di iniezione vena porta del fegato per studiare metastasi del cancro al seno

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Ricerca

Ricerca sul cancro

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, xenografts, genetic manipulation, chemical reagents induction, etc.) have various pathological characters and play important roles in investigating certain aspects of diseases. Although no single model can totally mimic the whole human disease progression, orthotopic organs disease models with a proper stromal environment play an irreplaceable role in understanding diseases and screening for potential drugs. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into the mammary fat pad in a simple, less invasive, and easy-to-handle way, and follow the metastasis to distant organs. With the proper features of primary tumor growth, breast and nipple pathological changes, and a high occurrence of other organs&#39; metastasis, this model maximumly mimics human breast cancer progression. Primary tumor growth in situ, long-distant metastasis, and the tumor microenvironment of breast cancer can be investigated by using this model.

Here, we present a protocol to implant breast cancer cells into the mammary fat pad in a simple, less invasive, and easy-to-handle way, and this mouse orthotopic breast cancer model with a proper mammary fat pad environment can be used to investigate various aspects of cancer.

Orthotopic iniezione delle cellule di cancro al seno in topi cuscinetto grasso mammario

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less aggressive breast tumors, the 5-year survival rate of TNBC patients is 77% due to their characteristic drug-resistant phenotype and metastatic burden. Toward this end, murine models have been established aimed at identifying novel therapeutic strategies limiting TNBC tumor growth and metastatic spread. This work describes a practical guide for the TNBC orthotopic model where MDA-MB-231 breast cancer cells suspended in a basement membrane matrix are implanted in the fourth mammary fat pad, which closely mimics the cancer cell behavior in humans. Measurement of tumors by caliper, lung metastasis assessment via in vivo and ex vivo imaging, and molecular detection are discussed. This model provides an excellent platform to study therapeutic efficacy and is especially suitable for the study of the interaction between the primary tumor and distal metastatic sites.

This work presets an advanced protocol to accurately assess tumor loading by detection of green fluorescent protein and bioluminescence signals as well as the integration of quantitative molecular detection technique.

Studiare il cancro al seno triplo negativo utilizzando il modello di cancro al seno ortotopico

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. Immortalized cell lines are easy to grow and genetically modify to study molecular mechanisms, yet the selective pressure from cell culture often leads to genetic and epigenetic alterations over time. Patient-derived xenograft (PDX) models faithfully recapitulate the heterogeneity and drug response of human breast tumors. PDX models exhibit a relatively short latency after orthotopic transplantation that facilitates the investigation of breast tumor biology and drug response. The transplantable genetically engineered mouse models allow the study of breast tumor immunity. The current protocol describes the method to orthotopically transplant breast tumor fragments into the mammary fat pad followed by drug treatments. These preclinical models provide valuable approaches to investigate breast tumor biology, drug response, biomarker discovery and mechanisms of drug resistance.

Patient-derived xenograft (PDX) models and transplantable genetically engineered mouse models faithfully recapitulate human disease and are preferred models for basic and translational breast cancer research. Here, a method is described to orthotopically transplant breast tumor fragments into the mammary fat pad to study tumor biology and evaluate drug response.

Trapianto ortotopico di tumori al seno come modelli preclinici per il cancro al seno

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

In Vivo Imaging to Measure Spontaneous Lung Metastasis of Orthotopically-injected Breast Tumor Cells

Metastasis remains the primary cause of cancer-related death. The succession of events that characterize the metastatic cascade presents multiple opportunities for therapeutic intervention, and the ability to accurately model them in mice is critical to evaluate their effects. Here, a step-by-step protocol is presented for the establishment of orthotopic primary breast tumors and the subsequent monitoring of the establishment and growth of metastatic lesions in the lung using in vivo bioluminescence imaging. This methodology allows for the evaluation of treatment or its biological effects along the entire range of metastatic development, from primary tumor escape to outgrowth in the lungs. Breast orthotopic tumors are generated in mice via injection of a luciferase-labeled cell suspension in the 4th mammary gland. Tumors are allowed to grow and disseminate for a specific amount of time and are then surgically resected. Upon resection, spontaneous lung metastasis is detected, and the growth over time is monitored using in vivo bioluminescence imaging. At the desired experimental endpoint, lung tissue can be collected for downstream analysis. The treatment of established, clinically evident metastasis is critical to improve outcomes for stage IV cancer patients, and it can be evaluated through tail vein models of experimental lung metastasis. However, metastatic dissemination occurs early in breast cancer, and many patients have latent, subclinical disseminated disease after surgery. Utilization of spontaneous models such as this one provides the opportunity to study the whole spectrum of the disease, especially the systemic effects driven by treatment of the primary tumor such as pre-metastatic niche priming, and evaluate treatments on dormant and subclinical disease after surgery.

<meta charset="utf8"></head><body>Imaging in vivo per misurare le metastasi polmonari spontanee di cellule tumorali mammarie iniettate ortotopicamente

The manuscript describes a methodology for the establishment as well as longitudinal growth monitoring of spontaneous lung metastasis from orthotopically-injected breast tumors, amenable to intervention at all stages of the metastatic cascade.

In vivo Imaging per misurare le metastasi polmonari spontanee di cellule tumorali mammarie iniettate ortotopicamente

Metastasis remains the primary cause of cancer-related death. The succession of events that characterize the metastatic cascade presents multiple ...

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in exponential tumor growth and metastasis to distal tissues and the collapse of anti-tumor immunity. Many useful animal models exist to study breast cancer, but none completely recapitulate the disease progression that occurs in humans. In order to gain a better understanding of the cellular interactions that result in the formation of latent metastasis and decreased survival, we have generated an inducible transgenic mouse model of YFP-expressing ductal carcinoma that develops after sexual maturity in immune-competent mice and is driven by consistent, endocrine-independent oncogene expression. Activation of YFP, ablation of p53, and expression of an oncogenic form of K-ras was achieved by the delivery of an adenovirus expressing Cre-recombinase into the mammary duct of sexually mature, virgin female mice. Tumors begin to appear 6 weeks after the initiation of oncogenic events. After tumors become apparent, they progress slowly for approximately two weeks before they begin to grow exponentially. After 7-8 weeks post-adenovirus injection, vasculature is observed connecting the tumor mass to distal lymph nodes, with eventual lymphovascular invasion of YFP+ tumor cells to the distal axillary lymph nodes. Infiltrating leukocyte populations are similar to those found in human breast carcinomas, including the presence of &#945;&#946; and &#947;&#948; T cells, macrophages and MDSCs. This unique model will facilitate the study of cellular and immunological mechanisms involved in latent metastasis and dormancy in addition to being useful for designing novel immunotherapeutic interventions to treat invasive breast cancer.

Activation of latent mutations with adenovirus-Cre into the mammary ductal system results in a clinically relevant metastatic breast cancer. Incorporation of a YFP promoter allows tracking of distal metastatic tumor cells. This model is useful to study latent metastasis, anti-tumor immunity, and for designing novel immunotherapies to treat breast cancer.

Avvio del carcinoma metastatico della mammella dalla Targeting del duttale con Adenovirus-Cre: A Novel modello di topo transgenico di cancro al seno

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...

Medicina

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

Iniezione ortotopico di cellule di carcinoma mammario nel mammaria Fat Pad di Mice per studiare la crescita del tumore.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of cancer metastasis are still unclear. Animal models are essential for elucidating the mechanisms and for evaluating novel strategies for the treatment of metastatic cancers. Here, an in-depth description of a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model for exploring the mechanisms of metastasis of solid organ tumors is provided. The survival surgical implantation of BNL 1ME A.7R.1 mouse hepatocellular carcinoma cells directly into the liver (the organ of origin) of the inbred wild-type immune competent laboratory mouse strain, BALB/c is described. The success and reproducibility of this methodology recommends it for widespread use in elucidating the biological mechanisms of solid organ cancer metastasis.

The metastatic spread of cancer is the major cause of cancer-related deaths. We provide an in-depth description of our survival surgery methodology for establishing a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model system for studying the mechanisms of metastasis in solid organ tumors.

A &quot;paziente-Like&quot; ortotopico Singenico modello murino della carcinoma epatocellulare Metastasi

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy

In vivo mouse models to assess breast cancer progression are essential for cancer research, including preclinical drug developments. However, the majority of the practical and technical details are commonly omitted in published manuscripts which, therefore, makes it challenging to reproduce the models, particularly when it involves surgical techniques. Bioluminescence technology allows for the evaluation of small amounts of cancer cells even when a tumor is not palpable. Utilizing luciferase-expressing cancer cells, we establish a breast cancer orthotopic inoculation technique with a high tumorigenesis rate. Lung metastasis is assessed utilizing an ex vivo technique. We, then, establish a mastectomy model with a low local recurrence rate to assess the metastatic tumor burden. Herein, we describe, in detail, the surgical techniques of orthotopic implantation and mastectomy for breast cancer with a high tumorigenesis rate and low local recurrence rates, respectively, to improve breast cancer model efficiency.

We introduce a murine orthotopic breast cancer model and radical mastectomy model with bioluminescence technology to quantify the tumor burden to mimic human breast cancer progression.

Generazione di un modello di cancro al seno metastatico murino ortotopico ed eseguendo murino mastectomia radicale

In vivo mouse models to assess breast cancer progression are essential for cancer research, including preclinical drug developments. However, the majority ...

Un modello murino ortotopico di spontanea Breast Cancer metastasi

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Un modello di iniezione vena porta del fegato per studiare metastasi del cancro al seno

Orthotopic iniezione delle cellule di cancro al seno in topi cuscinetto grasso mammario

Studiare il cancro al seno triplo negativo utilizzando il modello di cancro al seno ortotopico

Trapianto ortotopico di tumori al seno come modelli preclinici per il cancro al seno

In vivo Imaging per misurare le metastasi polmonari spontanee di cellule tumorali mammarie iniettate ortotopicamente

Avvio del carcinoma metastatico della mammella dalla Targeting del duttale con Adenovirus-Cre: A Novel modello di topo transgenico di cancro al seno

In vivo Imaging per misurare le metastasi polmonari spontanee di cellule tumorali mammarie iniettate ortotopicamente

Iniezione ortotopico di cellule di carcinoma mammario nel mammaria Fat Pad di Mice per studiare la crescita del tumore.

A "paziente-Like" ortotopico Singenico modello murino della carcinoma epatocellulare Metastasi

Generazione di un modello di cancro al seno metastatico murino ortotopico ed eseguendo murino mastectomia radicale