Name: an orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis
Uploaded: 2016-08-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
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Supported by grants from the National Institute of Health grants CA133085, CA182518 and CA185909 (to KL) and VA Merit Review Award BX001962 (to KL).

모든 절차는 조지아 리전트 대학 동물 사용 및 관리위원회의 지침과 승인 된 프로토콜을 따르십시오. 동소 이식 유방암 종양의 1. 설립 <ol><li> 실험 하루 전에, 배양은 약 10 ㎖의 RPMI 배지에 10 cm 배양 접시에 2 × 106 4T1 룩 종양 세포는 10 % FBS를 함유. 37 ° C에서 CO 2 배양기에서 배양 접시를 품어 5 % CO 2. </li><li> 종양 세포 주사 일에, PBS를 제거 5 ㎖ 멸균 인산 완충 식염수 (PBS), 배양 접시에 pH 7.4의 추가 진공 배양 접시에서 배양 배지를 제거하고 부드럽게 배양 표면을 세척 할 식기를 흔들 진공에 의해. </li><li> 배양 접시에 2 ml의 트립신 EDTA (0.05 % 트립신 및 0.53 mM의 EDTA)을 추가 5 분 동안 37 ℃에서 CO2 인큐베이터에서 배양 한. 모든 세포가 배양 접시의 바닥에서 분리되어 있는지 확인하기 위해 거꾸로 현미경에 세포를 확인하십시오. &lt;/ 리&gt; <li> 약 450 XG RT에서 3 분 동안 15 ml의 원추형 원심 분리 튜브에 세포를 8 ml의 혈청 함유 배지, 전사 셀을 첨가함으로써 트립신을 해소. </li><li> 10 ml의 PBS에 진공에 resuspend 세포의 상층 액을 제거합니다. 원심 분리기 세포에서 약 450 XG에 3 분. 진공에 의해 뜨는을 제거하고, 10 ml의 PBS에서 세포를 재현 탁. </li><li> 피펫 커버 유리 아래 상 혈구 세포 현탁액 10 μL. 세포 농도를 결정하기 위하여 세포를 카운트. 2 × 105 세포 / ㎖의 HBSS의 밀도 PBS에 재현 탁 된 세포. 1.5 ml의 멸균의 microfuge 튜브에 세포를 전송하고 사용할 때까지 얼음에 세포를 유지합니다. </li><li> 종양 세포 주입 팔주 - 6의 여성 BALB / c 마우스를 사용합니다. <ol><li> 전자 머리 트리머를 사용하여 유두 # 3를 둘러싼 근처에 머리를 면도. 유선 3 지방 패드에 4T1 세포의 주입 재현성 폐 전이를 생성한다. 70 % 에타에 담근 면봉을 사용하여 면도 영역을 청소엘. 3 회 - microcentrifuge 관 2를 반전시켜 세포를 재현 탁. 조심스럽게 흡인 1/2의 CC 27 G 1/2 투베르쿨린 주사기로 세포 현탁액 50 μL. </li><li> Balb / c 마우스 # 3 유방 선 아래 유방 지방 패드에 종양 세포를 주입한다. 깨끗한 새장에 마우스를 놓고 동물의 주거 시설에 새장을 반환합니다. 종양 개발 30 일 - (21)는 약 기다립니다. 종양의 성장은 종양 연구 기관의 정책에 따라 정기적으로 모니터링해야합니다. </li></ol></li></ol> 종양의 성장 2. 라이브 마우스 생물 발광 영상 <ol><li> 3 일마다 촬상 시설 종양 주입 전송 마우스 후의 이미지 마우스. 종래 촬상 생쥐에 100 μL 루시페린 (PBS에 30 ㎎ / ㎖)의 복강 (IP)을 주입한다. 이후 약 10 분, 2 % 이소 플루 란 / O 2 흐름 유도 챔버 마우스 마취. 마우스의 다리를 터치하기 위해 집게를 사용합니다. 터치에 대한 응답은 그쪽을 확인하지마우스 t를 완전히 의식이다. <ol><li> 2 L / min의 유량으로 지속적으로 2 % 이소 플루 란과 O 2 촬상 챔버 내의 마우스 놓는다. 관심 영역 (즉, 초기 종양 주입 유방 패드) 이미징 시스템의 카메라를 향하고있는 마우스 등 놓는다. 코를 확인하고 마우스의 입을 단단히 마취 튜브 내에서 설정됩니다. 동물은 기관에서 수의학 기준에 따라 마취해야합니다. </li></ol></li><li> 다양한 노출 시간의 배열 생물 발광 영상을 획득. 예를 들어, 1.5 cm로, 25, 30 개체의 높이를 시야 (FOV)를 노출을 설정하고, 저전력 X 레이와 발광 사진 이미지를 얻을 수 있습니다. 에 측정 단위 설정 &quot;광채.&quot; <ol><li> 약 2.4 × 10 7 복사 휘도 단위의 최대 자동 선형 색상 범위를 사용합니다. 초기 이미지를 획득 한 후 (그림 설정을 조정하고 최적화 된 이미지를 얻을 수의 3, 4). </li></ol></li><li> 새장을 청소하고 마우스 주택 시설에 동물을 반환하기 전에 보행과 의식을 되 찾을 수 있도록하기 위해 마우스를 돌려줍니다. </li><li> 상기 영상 기기와 연결된 생체 이미징 소프트웨어와 데이터를 분석한다. 이미징 프로그램을 사용하여, 관심 (ROI)의 영역 주위에 둘러싸인 선을 그립니다. 투자 수익 (ROI)의 발광 강도를 결정하기 위해 이미징 소프트웨어를 사용합니다. 각 마우스의 각 ROI의 상대 강도를 기록한다. 참고 : 높은 발광 강도가 발광 세포의 높은 수준, 따라서 더 큰 종양의 성장을 나타냅니다. </li><li> 시각적으로 마우스에게 부작용에 ​​대한 3 일마다 검사합니다. 참고 : 마우스는 일주일에 한 번 무게됩니다. 15 % 체중의 체중 감소는 역효과 간주되며 궤양 종양 제 생쥐도 안락사 될 스텝에 기재된 바와 같이 종양 - 함유 마우스를 안락사된다. </li></ol> 차 종양의 3 외과 제거 아니TE : 오토 클레이브 가위, 집게 상처 클립과 상처 클립 적용자 (그림 1). <ol><li> 감염의 위험을 최소화하기 위해 무균 상태를 유지하기 위해 무균 후드에서 수술을 수행한다. 수술 전 어느 날, 전기 헤어 트리머와 종양 베어링 마우스의 종양 주변 지역을 면도. </li><li> 약 2 - 수술 전 4 시간은 5 mg / kg 체중의 투여 량으로 쥐 제형 생쥐 카프로 펜 츄어블 정제 사료. </li><li> 약 30 초 동안 산소 2 % 이소 플루 란을 포함하는 챔버에서 마우스를 넣어. 연속적으로 수술 전 기간 동안 마취 장치를 사용하여 마우스를 마취. </li><li> 마취 동안 건조를 방지하기 위해 마우스의 눈에 수의사 연고를 적용 멸균 면봉을 사용합니다. 마우스의 다리를 터치하기 위해 집게를 사용합니다. 터치에 대한 응답은 마우스가 완전히 의식이 있음을 확인합니다. </li><li> 세 개의 교대로 종양 부위 주위의 피부 영역을 소독비누 살균제 스크럽의 정리합니다. 70 % 알코올 닦아에게로 수술 부위를 닦아주십시오. </li><li> 종양 근처의 작은 절개를 잘라 살균 메스 (그림 1)를 사용합니다. </li><li> 종양 결절 (그림 2A)를 노출하는 종양 주위의 피부를 잘라 절개로 멸균 가위의 끝을 삽입합니다. 멸균 집게로 종양을 잡고 피부 (그림 2B)에서 종양을 구분하기 위해 가위를 사용합니다. -80 ° C에 냉동 냉장고 또는 장래의 사용을 10 % 포르말린 용액에 고정하여 종양 샘플을 저장한다. </li><li> 자동 클립 적용자 (그림 1)를 사용하여 9mm 상처 클립 수술 부위를 닫습니다. 멸균 침구와 깨끗한 케이지에 마우스를 돌려줍니다. 동물은 기관의 가이드 라인에 따라 모니터링해야합니다. 참고 : 마우스가 충분 의식을 회복하고 새장에 약 10 움직이기 시작 - 수술 후 30 분. </li><li> 에 카프로 펜을 관리수술 후 마우스 다시 24 시간. 카프로 펜은 수술 후 진통제 용이며 수술 후 진통제로 처방하는 기관의 수의 직원과 직접 상담하여 확인해야합니다. (- 칠일 수술 후 보통 내 5) 상처 치유 후 상처 클립을 제거합니다. 자동 클립 제거제를 사용하여 상처 클립을 제거합니다. </li></ol> 종양의 전이 4. 라이브 마우스 생물 발광 영상 <ol><li> 수술 후 이미지 마우스 3 일마다 2 단계에 설명 된대로. </li></ol> 종양 베어링 폐의 인도 잉크 인플레이션를 사용하여 검증 폐 전이 (5) 참고 : 루시퍼 라제 라이브 종양 이미징 결과를 확인 종양 결절을 정량화하는 종양 베어링 마우스 폐의 인도 잉크 인플레이션을 수행합니다. 4T1 세포는 다른 장기와 조직 (그림 5) 필요에 따라서, 종양 전이를 확인하기 위해 이들 기관의 조직 학적 검사가 수행되어야로 전이. 이 프로토콜을 사용 LUN예로서 g 전이. <ol><li> 안락사에 대한 기존의 홈 케이지에 마우스를 유지합니다. 다른 동물들과 함께 보관하면, 다른 케이지에 안락사되지 않고 그 쥐를 변경합니다. </li><li> 케이지 필터 상단을 제거하고 CO 2 필터 상단으로 교체합니다. 이산화탄소 필터 상단에 연결되어있는 압축 CO 2 가스 실린더 (100 %)를 켭니다. 2 L / 분의 유량을 설정하고 적어도 10 분 동안의 CO 2를 유지한다. 생쥐는 여전히 10 분의 끝에서 호흡하면 쥐 호흡을 중단 한 후, 적어도 1 분까지의 CO 2를 떠난다. CO 2 실린더 제어 및 유량계의 전원을 끄십시오. 3 분 이상 기다린 필터 상단을 제거합니다. </li><li> 폴리스티렌 보드의 뒷면에 희생 마우스를 놓습니다. 기도에 방해받지 않는 접근을 보장하기 위해 다리를 핀. 70 % 에탄올로 쥐를 분무. </li><li> 가위를 사용하여, SalI을 향해 흉곽 통해 마우스의 중앙 복부 정중선을 따라 잘라땀샘을 다릅니다. 기관을 준수하십시오. 기관을 노출하는 기관을 주위 조직을 제거하는 집게를 사용합니다. </li><li> 기관 아래에 피펫 팁 스레드. 한 손으로 끝을 잡고 부드럽게 떨어져 몸에서기도를 올립니다. </li><li> 마우스를 180 °를 들고 플랫폼을 돌립니다. 기도를 통해 폐로 인도 잉크 (10 % 인도 잉크와 0.1 % 암모늄 수산화물)을 주입하는 ½의 CC 27 G 1/2 투베르쿨린 주사기를 사용합니다. 강한 저항이 느껴질 때까지 잉크로 완전히 폐 팽창. </li><li> 기관을 잘라 가위를 사용합니다. 마우스를 잡고 집게를 사용하여 폐 아래 포셉의 다른 세트를 삽입하고 마우스에서 폐 로브를 당깁니다. 비커에 들어있는 물에 폐 간단히 씻어. </li><li> 화학 퓸 후드에서, Fekete의 용액 (50 % 에탄올, 6 % 포름 알데히드, 3 % 빙초산) 3 ㎖을 함유하는 유리 섬광 바이알로 폐를 옮긴다. 증발 용액을 방지하기 위해 유리 병 모자. 노트: 조직 무기한 Fekete의 용액에 저장 될 수있다. </li><li> 몇 분 후, 검은 폐 (그림 5)에 하얀 점으로 종양 결절을 관찰합니다. 흰색 종양 결절은 눈으로 볼 수 있습니다. 흄 후드에서 접시에 폐를 전송하고 흰 반점의 수를 계산합니다. 각각의 백색 반점은 하나의 전이성 종양 결절을 나타냅니다. </li></ol>

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Mice were purchased from the Jackson Laboratory and housed in the Georgia Regents University animal facility. Experiments and care/welfare were in agreement with federal regulations and an approved protocol by the Georgia Regents University IACUC committee. The authors have nothing to disclose.

유방암 전이 트랜스 제닉 마우스 모델의 많은 종류가 개발되었다. 하나 이들 트랜스 제닉 마우스는 60 내지 100 % 범위의 높은 종양 발생을 갖는다. (- 14 100 %) 그러나, 이들 트랜스 제닉 마우스의 전이 발생률은 종양 발생 빈도보다 낮다. 종양 세포는 유방암 전이 이들 트랜스 제닉 마우스 모델에서 대부분의 LN 및 폐 전이. 전이 대기 시간은 모델에 따라 다르며 2 ~ 8 개월의 범위. 유방암 전이 ...

미국 암 협회에 따르면, 유방암은 미국 여성 암 중 가장 많이 진단 형태이다. 최근 개발 표적 요법과 조합 조기 발견이 상당히 지난 20 년간 유방암 사망률을 감소시켰다. 그러나 유방암은 여전히 미국의 한 여성에서 암 관련 사망의 두 번째 주요 원인이다. 유방암 환자의 사망의 대부분은 종양 세포의 전이 때문이다. 불행하게도, 대부분의 유방암은 침습적이고 자주 뼈, 폐, 간, 뇌를 포함한 원격 장기에이어서 림프절에 전이를합니다. 1, 2는 현재 전이성 유방암에 대한 효과적인 치료가 없습니다. 따라서, 화학 요법 및 면역 치료제의 개발은 전이성 유방암은 큰 의미입니다 억제합니다. 다양한 유방암 자발적 전이 마우스 모델 B 조EEN 유방 종양 세포의 진행 및 전이 및 치료제의 개발을위한 모델로서 사용되는 기초가되는 분자 기전을 연구하기 위해 개발 하였다. 1,3-5 그러나, 이러한 마우스 모델의 대부분은 유전 적 종양 모델임을 반면 기계적 대한 우수한 모델 연구는 전이 이러한 유전 모델 개발 개월 걸리므하여 항암제의 고가의 장기 투여를 요구하는, 치료제를 시험하기에 적합하지 않다. 살아있는 쥐 -6,7- 모니터링 종양 진행은 기술적으로 어려운 것이다. 반대로 이식 유방암 전이 모델은 단기간 종양 진행 및 라이브 마우스에서 종양 진행을 쉽게 추적의 장점이있다. 4T1 동소 유방암 자발적 전이 마우스 모델은 이식 종양 모델. 팔이 모델이며, 유방 종양 세포가 일차 종양 결절을 확립 유방 지방 패드로 이식된다. 차 종양수술 후 인간 유방암 환자에서 제거 될 수있다. 4T1 종양 세포는 매우 침습적이다. 8,9, 3,10 거의 모든 종양 베어링 마우스는 유방 지방 패드로 종양 이식 후 30 일에 전이을 개발한다. 그러나, 4T1 종양은 기본 사이트에서 적극적으로 성장하고 종양의 크기는 종종 대부분의 동물 프로토콜에 허용되는 한도를 초과. 이 단계에서, 전이는 종종 미세 전이된다. 따라서, 치료제를 시험하기위한 전이 진행하도록 주 종양을 제거하는 것이 필수적이다. 여기서는 차 종양 이식 원발 종양 및 생체 내에서 4T1 종양의 성장과 진행 생물 발광 이미징 기반 정량 제거 수술 단순하면서도 중요한 절차의 확립을보고한다.

<table><tbody><tr><td>Ami-X Imaging System&amp;nbsp;</td><td>Spectral Instruments Imaging Inc. Tucson, AZ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IsoTec SurgiVet</td><td>Anesthesia Service &amp;amp; Equipment , Inc., Atlanta, GA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AutoClip Physicians Kit</td><td>Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td><td>427638</td><td></td></tr><tr><td>9 mm AutoClip Applier&amp;nbsp;</td><td>Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td><td>427630</td><td></td></tr><tr><td>9 mm AutoClip Remover</td><td>Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td><td>427637</td><td></td></tr><tr><td>9 mm AutoClip Wound Clip</td><td>Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td><td>427631</td><td></td></tr><tr><td>Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td><td>Fisher</td><td>8940</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting Fine-Pointed Forceps</td><td>Fisher</td><td>8875</td><td></td></tr><tr><td>1/2 CC 27&amp;nbsp;G&amp;nbsp;1/2 tuberculin syringe</td><td>Becton Dickinson and Co. NJ&amp;nbsp;</td><td>305620</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium</td><td>Mediatech Inc</td><td>10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Mediatech Inc</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td>Ultrapure-usa.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Mediatech Inc</td><td>25-040-CI</td><td></td></tr></tbody></table>

an orthotopic mouse model of spontaneous breast cancer metastasis

전이 유방암 환자의 사망의 주요 원인이다. 유방암의 전이를 포함한 암 세포 전이, 기본 메커니즘은 크게 알려지지 암 연구의 초점이다. 다양한 유방암 자발적 전이 마우스 모델이 확립되었다. 여기서는 동 소성 이식 유방암 원발 종양을 수립 인간 유방암 전이 모방 자발적 전이를 생성하는 간단한 방법을보고한다. 생물 발광 라이브 종양 영상과 결합,이 마우스 모델은 종양의 성장 및 진행 속도론을 모니터링하고 정량화 할 수 있습니다. 이 모델에서, 4T1-루크 유방암 세포 저용량 (1 × 104 세포) 투베르쿨린 주사기를 이용하여 BALB / C 마우스의 유방 지방 패드에 주입했다. 마우스는 주사 루시페린 및 생물 발광 이미징 시스템을 사용하여 다양한 시점에서 이미징 하였다. 차 종양은 appr합니다 (IACUC 승인 프로토콜과 크기 제한으로 성장하는 경우oximately 30 일), 마우스는 2 % 이소 플루 란과 산소의 일정한 흐름 하에서 마취시켰다. 종양 영역을 70 % 에탄올로 소독 하였다. 종양 주위 마우스 피부 멸균 가위로 제거하고 종양을 노출 절제 하였다. 주 종양의 제거를 한 달 동안 4T-1 담암 마우스의 생존을 연장한다. 생쥐는 다음 반복적으로 원격 장기로 확산 전이성 종양에 대한 몇 군데 있었다. 치료제는이 시점에서 종양 전이를 억제하기 위해 투여 될 수있다. 이 모델은 기본 사이트 및 원격 장기로 진행 동역학 유방암 세포의 성장을 정량화 단순하면서도 민감하고, 따라서, 생체 내에서 항 - 전이 치료 및 면역 치료제를 시험 유방암의 성장 및 진행을 연구하기위한 훌륭한 모델 .

동소 이식 유방 암 마우스 모델 구축 4T1는 공격적인 유방 암 세포주이다. 유방 지방 패드에 적은 4 10 × 1과 세포의 주입 주입 (그림 2A)의 사이트에서 하나의 종양 결절의 설립으로 이어질 수 있습니다. 따라서, 종양은 사람 유방 암종 주 모방. 거의 100 %의 마우스는 종양의 동 소성을 개발한다. 종양 크기는 디지털 캘리퍼스 또는 살아?...

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An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis

동소 유방암 차 종양 모델 원발 종양의 외과 적 제거가 기재되어 자발적 전이를 생성하는 마우스의 수명을 연장한다. 종양 성장 및 진행 모니터링하고 루시퍼 형광 이미징에 의해 정량화된다.

자발적 유방암 전이의 동소 이식 마우스 모델

Metastasis is the primary cause of mortality of breast cancer patients. The mechanism underlying cancer cell metastasis, including breast cancer ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

30.7K 조회수.  Augusta University.  동소 유방암 차 종양 모델 원발 종양의 외과 적 제거가 기재되어 자발적 전이를 생성하는 마우스의 수명을 연장한다. 종양 성장 및 진행 모니터링하고 루시퍼 형광 이미징에 의해 정량화된다. 

비디오: An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast cancer metastasis, and results in poor outcomes with median survival rates of only 4.8 - 15 months. Current rodent models of breast cancer metastasis, including primary tumor cell xenograft and spontaneous tumor models, rarely metastasize to the liver. Intracardiac and intrasplenic injection models do result in liver metastases, however these models can be confounded by concomitant secondary-site metastasis, or by compromised immunity due to removal of the spleen to avoid tumor growth at the injection site. To address the need for improved liver metastasis models, a murine portal vein injection method that delivers tumor cells firstly and directly to the liver was developed. This model delivers tumor cells to the liver without complications of concurrent metastases in other organs or removal of the spleen. The optimized portal vein protocol employs small injection volumes of 5 - 10 &#956;l, &#8805; 32 gauge needles, and hemostatic gauze at the injection site to control for blood loss. The portal vein injection approach in Balb/c female mice using three syngeneic mammary tumor lines of varying metastatic potential was tested; high-metastatic 4T1 cells, moderate-metastatic D2A1 cells, and low-metastatic D2.OR cells. Concentrations of &#8804; 10,000 cells/injection results in a latency of ~ 20 - 40 days for development of liver metastases with the higher metastatic 4T1 and D2A1 lines, and &#62; 55 days for the less aggressive D2.OR line. This model represents an important tool to study breast cancer metastasis to the liver, and may be applicable to other cancers that frequently metastasize to the liver including colorectal and pancreatic adenocarcinomas.

A surgical procedure was developed to deliver mammary tumor cells to the murine liver via portal vein injection. This model permits investigation of late stages of liver metastasis in a fully immune competent host, including tumor cell extravasation, seeding, survival, and metastatic outgrowth in the liver.

포탈 정맥 주입 모델 간 전이 유방암의 공부를

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

연구

암 연구학

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, xenografts, genetic manipulation, chemical reagents induction, etc.) have various pathological characters and play important roles in investigating certain aspects of diseases. Although no single model can totally mimic the whole human disease progression, orthotopic organs disease models with a proper stromal environment play an irreplaceable role in understanding diseases and screening for potential drugs. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into the mammary fat pad in a simple, less invasive, and easy-to-handle way, and follow the metastasis to distant organs. With the proper features of primary tumor growth, breast and nipple pathological changes, and a high occurrence of other organs&#39; metastasis, this model maximumly mimics human breast cancer progression. Primary tumor growth in situ, long-distant metastasis, and the tumor microenvironment of breast cancer can be investigated by using this model.

Here, we present a protocol to implant breast cancer cells into the mammary fat pad in a simple, less invasive, and easy-to-handle way, and this mouse orthotopic breast cancer model with a proper mammary fat pad environment can be used to investigate various aspects of cancer.

Orthotopic 쥐 유 방 지방 패드 유방암 세포의 주입

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less aggressive breast tumors, the 5-year survival rate of TNBC patients is 77% due to their characteristic drug-resistant phenotype and metastatic burden. Toward this end, murine models have been established aimed at identifying novel therapeutic strategies limiting TNBC tumor growth and metastatic spread. This work describes a practical guide for the TNBC orthotopic model where MDA-MB-231 breast cancer cells suspended in a basement membrane matrix are implanted in the fourth mammary fat pad, which closely mimics the cancer cell behavior in humans. Measurement of tumors by caliper, lung metastasis assessment via in vivo and ex vivo imaging, and molecular detection are discussed. This model provides an excellent platform to study therapeutic efficacy and is especially suitable for the study of the interaction between the primary tumor and distal metastatic sites.

This work presets an advanced protocol to accurately assess tumor loading by detection of green fluorescent protein and bioluminescence signals as well as the integration of quantitative molecular detection technique.

정형외 유방암 모델을 사용하여 삼중 음성 유방암 을 연구

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. Immortalized cell lines are easy to grow and genetically modify to study molecular mechanisms, yet the selective pressure from cell culture often leads to genetic and epigenetic alterations over time. Patient-derived xenograft (PDX) models faithfully recapitulate the heterogeneity and drug response of human breast tumors. PDX models exhibit a relatively short latency after orthotopic transplantation that facilitates the investigation of breast tumor biology and drug response. The transplantable genetically engineered mouse models allow the study of breast tumor immunity. The current protocol describes the method to orthotopically transplant breast tumor fragments into the mammary fat pad followed by drug treatments. These preclinical models provide valuable approaches to investigate breast tumor biology, drug response, biomarker discovery and mechanisms of drug resistance.

Patient-derived xenograft (PDX) models and transplantable genetically engineered mouse models faithfully recapitulate human disease and are preferred models for basic and translational breast cancer research. Here, a method is described to orthotopically transplant breast tumor fragments into the mammary fat pad to study tumor biology and evaluate drug response.

유방암을 위한 전임상 모형으로 유방 종양의 정형소 이식

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

In Vivo Imaging to Measure Spontaneous Lung Metastasis of Orthotopically-injected Breast Tumor Cells

Metastasis remains the primary cause of cancer-related death. The succession of events that characterize the metastatic cascade presents multiple opportunities for therapeutic intervention, and the ability to accurately model them in mice is critical to evaluate their effects. Here, a step-by-step protocol is presented for the establishment of orthotopic primary breast tumors and the subsequent monitoring of the establishment and growth of metastatic lesions in the lung using in vivo bioluminescence imaging. This methodology allows for the evaluation of treatment or its biological effects along the entire range of metastatic development, from primary tumor escape to outgrowth in the lungs. Breast orthotopic tumors are generated in mice via injection of a luciferase-labeled cell suspension in the 4th mammary gland. Tumors are allowed to grow and disseminate for a specific amount of time and are then surgically resected. Upon resection, spontaneous lung metastasis is detected, and the growth over time is monitored using in vivo bioluminescence imaging. At the desired experimental endpoint, lung tissue can be collected for downstream analysis. The treatment of established, clinically evident metastasis is critical to improve outcomes for stage IV cancer patients, and it can be evaluated through tail vein models of experimental lung metastasis. However, metastatic dissemination occurs early in breast cancer, and many patients have latent, subclinical disseminated disease after surgery. Utilization of spontaneous models such as this one provides the opportunity to study the whole spectrum of the disease, especially the systemic effects driven by treatment of the primary tumor such as pre-metastatic niche priming, and evaluate treatments on dormant and subclinical disease after surgery.

<meta charset="utf8"></head><body>orthotopically 주입된 유방 종양 세포의 자발적 폐 전이를 측정하기 위한 In vivo imaging

The manuscript describes a methodology for the establishment as well as longitudinal growth monitoring of spontaneous lung metastasis from orthotopically-injected breast tumors, amenable to intervention at all stages of the metastatic cascade.

생체 내 Orthotopically injected breast tumor cells의 자발적 폐 전이를 측정하기 위한 이미징

Metastasis remains the primary cause of cancer-related death. The succession of events that characterize the metastatic cascade presents multiple ...

Initiation of Metastatic Breast Carcinoma by Targeting of the Ductal Epithelium with Adenovirus-Cre: A Novel Transgenic Mouse Model of Breast Cancer

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in exponential tumor growth and metastasis to distal tissues and the collapse of anti-tumor immunity. Many useful animal models exist to study breast cancer, but none completely recapitulate the disease progression that occurs in humans. In order to gain a better understanding of the cellular interactions that result in the formation of latent metastasis and decreased survival, we have generated an inducible transgenic mouse model of YFP-expressing ductal carcinoma that develops after sexual maturity in immune-competent mice and is driven by consistent, endocrine-independent oncogene expression. Activation of YFP, ablation of p53, and expression of an oncogenic form of K-ras was achieved by the delivery of an adenovirus expressing Cre-recombinase into the mammary duct of sexually mature, virgin female mice. Tumors begin to appear 6 weeks after the initiation of oncogenic events. After tumors become apparent, they progress slowly for approximately two weeks before they begin to grow exponentially. After 7-8 weeks post-adenovirus injection, vasculature is observed connecting the tumor mass to distal lymph nodes, with eventual lymphovascular invasion of YFP+ tumor cells to the distal axillary lymph nodes. Infiltrating leukocyte populations are similar to those found in human breast carcinomas, including the presence of &#945;&#946; and &#947;&#948; T cells, macrophages and MDSCs. This unique model will facilitate the study of cellular and immunological mechanisms involved in latent metastasis and dormancy in addition to being useful for designing novel immunotherapeutic interventions to treat invasive breast cancer.

Activation of latent mutations with adenovirus-Cre into the mammary ductal system results in a clinically relevant metastatic breast cancer. Incorporation of a YFP promoter allows tracking of distal metastatic tumor cells. This model is useful to study latent metastasis, anti-tumor immunity, and for designing novel immunotherapies to treat breast cancer.

유방암의 소설 형질 전환 마우스 모델 : 아데노 바이러스 크레와 유관 상피의 대상으로 전이성 유방암의 개시

Breast cancer is a heterogeneous disease involving complex cellular interactions between the developing tumor and immune system, eventually resulting in ...

의학

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

마우스의 유방 지방 패드에 유방암 세포의 소성 주입은 종양의 성장을 연구한다.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of cancer metastasis are still unclear. Animal models are essential for elucidating the mechanisms and for evaluating novel strategies for the treatment of metastatic cancers. Here, an in-depth description of a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model for exploring the mechanisms of metastasis of solid organ tumors is provided. The survival surgical implantation of BNL 1ME A.7R.1 mouse hepatocellular carcinoma cells directly into the liver (the organ of origin) of the inbred wild-type immune competent laboratory mouse strain, BALB/c is described. The success and reproducibility of this methodology recommends it for widespread use in elucidating the biological mechanisms of solid organ cancer metastasis.

The metastatic spread of cancer is the major cause of cancer-related deaths. We provide an in-depth description of our survival surgery methodology for establishing a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model system for studying the mechanisms of metastasis in solid organ tumors.

&quot;환자와 같은&quot;동소 이식 동계 마우스 모델 간세포 암의 전이

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy

In vivo mouse models to assess breast cancer progression are essential for cancer research, including preclinical drug developments. However, the majority of the practical and technical details are commonly omitted in published manuscripts which, therefore, makes it challenging to reproduce the models, particularly when it involves surgical techniques. Bioluminescence technology allows for the evaluation of small amounts of cancer cells even when a tumor is not palpable. Utilizing luciferase-expressing cancer cells, we establish a breast cancer orthotopic inoculation technique with a high tumorigenesis rate. Lung metastasis is assessed utilizing an ex vivo technique. We, then, establish a mastectomy model with a low local recurrence rate to assess the metastatic tumor burden. Herein, we describe, in detail, the surgical techniques of orthotopic implantation and mastectomy for breast cancer with a high tumorigenesis rate and low local recurrence rates, respectively, to improve breast cancer model efficiency.

We introduce a murine orthotopic breast cancer model and radical mastectomy model with bioluminescence technology to quantify the tumor burden to mimic human breast cancer progression.

Murine Orthotopic 전이성 유방암 암 모델을 생성 하 고 수행 Murine 과격 한 유 방 절제술

In vivo mouse models to assess breast cancer progression are essential for cancer research, including preclinical drug developments. However, the majority ...

자발적 유방암 전이의 동소 이식 마우스 모델

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생체 내 Orthotopically injected breast tumor cells의 자발적 폐 전이를 측정하기 위한 이미징

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생체 내 Orthotopically injected breast tumor cells의 자발적 폐 전이를 측정하기 위한 이미징

마우스의 유방 지방 패드에 유방암 세포의 소성 주입은 종양의 성장을 연구한다.

"환자와 같은"동소 이식 동계 마우스 모델 간세포 암의 전이

Murine Orthotopic 전이성 유방암 암 모델을 생성 하 고 수행 Murine 과격 한 유 방 절제술