Bu yöntem doku morfogenezi sırasında hücre temaslarının uzay ve zamanda nasıl değiştiği gibi doku mekaniğinde anahtar soruların yanıtlatına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı zayıf invaziv olması ve ışık sac mikroskobu gibi canlı görüntüleme ile uyumlu olmasıdır. Bu teknik dokuya boncuk enjeksiyonu gerektirmez.
Genellikle froses almak için hangi demiere sondalar olarak kullanılan, ben heyecanlıyım. Süreci gösteren Chardes, bir mühendis, ve Raphael Clement, arazi benim düzeyde araştırma bilim adamı olacaktır. Başlamak için, yatay düz ışık levha mikroskobu için dik bir mikroskop kurmak, sonra optik cımbız olarak hareket lazer ve optik hazırlamak.
Sonra, bir cam cuvette için 500 nanometre floresan boncuk bir mikro litre dışarı boru, ve distile su 10 mililitre ekleyin. Cuvette'yi hedefin altına çivi tutucuya yerleştirin ve hedefin odak noktasını, amacın su yüzeyine değecek şekilde ayarlayın. Şimdi, satın alma yazılımını denetlemek için kullanılan Entegre Geliştirme Ortamı QT Creator'ı açın.
MicroRheo'yu açarak satın alma yazılımını açın. profili ve canlı satın alma modunu canlı seçerek açın. Lazeri açmadan önce, güvenlik gözlüğü tonulayın, sonra lazer gücünü bir watt'a ayarlayın ve lazeri açın.
Canlı yayın, lazerin odağında sıkışmış bir boncuk göstermelidir. Gerekirse, odak boncuk gözlemlemek için, ikinci teleskop lens konumunu ayarlayın. Ayrıca görüntüdeki boncuk merkezi periskop manevraları açısını ayarlamak gerekebilir.
Veri toplama panosunu ve aşağıdaki metin protokolünün üçüncü şekilinde açıklandığı gibi kaldırım bağlantılarını hazırlayın. Optik deklanşör arabiriminde, saat açık sn parametresini 000.000'e, zaman kapalı sn parametresini 000.000'e, mod parametresini teke ve tetik parametresini EXT'ye ayarlayın. Ayarlandıktan sonra etkinleştir düğmesini seçin.
QT Creator'da ot'u açın. profili projeyi açmak için. Aogenerator'daki giriş ve çıktının adını değiştirin.
kurulumunuzda kullanılan MI kartlarıyla eşleşecek cpp dosyası. Son olarak, optik cımbız yazılımını derleyin ve çalıştırın. Satın alma yazılımında, istenilen pozlama süresini, oyunu, iki görüntü arasındaki zamanı, elde edilecek görüntü sayısını ve lazerin gücünü seçin.
Daha sonra, optik cımbız yazılımında, burada gösterilen optik cımbız parametresini bir dairenin izini sürmek için ayarlayın. Ardından, AI parametreleri kutusunu, ağırlık ileri kutusunu işaretleyin ve kayıt düğmesine basın, ardından görüntü edinmeye başlayın. Optik cımbızları açın, üreten düğmeyi seçin ve kapana kısılmış boncuk en az iki tam daire tamamlamak için izin, sonra üreten düğmesini seçerek, optik cımbız durdurmak.
Son olarak, görüntü edinimi durdurun. Varsayılan klasörde bir tiff filminin ve galvanometre gerilimlerine sahip bir metin dosyasının oluşturulduğunu unutmayın. Matlab'ı açın, kalibrasyon klasörüne gidin ve pozisyon iki gerilim komut dosyasını çalıştırın Komut dosyası enterpolasyon işlevini hesaplar, galvanometre voltajlarını optik tuzak konumuna çevirin.
Ardından, kalibrasyon filmini ayarlamak için eşlik eden metin protokolünü takip edin. X ve Y lazer konumları için enterpolasyon haritasının hesaplanıp görüntülenmeip görüntülenmedigini kontrol edin. Eksik değerleri temsil eden haritadaki beyaz bölgeleri denetleyin.
Önemli beyaz alanlar varsa, işlemi yeni bir kalibrasyon filmi ile tekrarlayın. Burada gösterilen kalibrasyon filmi yeterli veriye sahip bir filmi temsil eder. Bir pike veya nemli bir fırça kullanarak, istenilen aşamada yaklaşık 10 embriyo seçin ve onları hizalayın.
Sonra 10 tarafından 20 bir milometre tarafından, cam slayt bir parça kesmek için bir elmas işaretleme kalem kullanın. Kesilen parçanın bir tarafına tutkal ekleyin ve 20 saniye kurumasını bekleyin, sonra kesilen parçayı ters çevirin ve slaytın kenarına yapıştırarak embriyoların çizgisine yerleştirin. Daha sonra, numune tutucuda preparat yükleyin ve tutucuyu cuvette'ye yerleştirin, sonra cuvette'yi piso-electric durumuna yerleştirin ve suyla doldurun.
Başlamak için, ilgi yerini bulun ve pisar sahnesini kullanarak hedef kavşağın orta noktasını lazer tuzağının konumuna taşıyın. Temas hattına dik salınımlar elde etmek için tuzağın parametrelerini ayarlayın. Ayrıca, temas hattına dik bir hareket için X ve Y yönlerdeki genlikleri sıfır olarak fazları ayarlayın ve genliği 0,1 volta ayarlayın.
Şimdi, saniyede 10 kare gibi hızlı bir kare hızı kullanarak satın alma başlatın. Görüntüleme başladıktan sonra, git düğmesine basarak optik cımbızları açın. Görüntüleme tamamlandığında cımbızları kapatın ve görüntü edinimi durdurun.
Belirtilen klasörde, bir film ve satın alma sırasında galvanometre voltajlarını içeren bir metin dosyası olacaktır. Toplanan kareleri gözlemlemek için filmi açın. Videonun analizini takiben, matlab'da videoyu açarak doku örneğindeki sertliği ve gerginliği ölçün.
Burada, tuzak konumunun işlevi olarak arabirim konumunu çizmek için çizim işlevini kullanın. Ardından, verilerin doğrusal bir şekilde sığması için Matlab kolay sığdırılmış ücretsiz araç kutusunu kullanın. Uyumun eğiminin tersi, tuzak konumunun arayüz konumu na göre ortalama oranını sağlar.
Bu bilgilerden, sertliği ve gerilim değerlerini belirlemek için eşlik eden metin protokolündeki denklemleri kullanın. Lazer kapanı, arabirime dik olan numunenin sinüzoidal sapması üretir. üç ardışık arayüz pozisyonları olarak burada gösterilir.
Bu da bir climograph oluşturmak için film olarak kaydedilebilir ve daha fazla alt piksel çözünürlüğü ile arabirimin konumunu belirlemek için analiz edilir. Burada, dönem beş saniye ydi. Küçük deformasyonlar rejiminde, tuzak ve arayüz konumları orantılıdır.
Arabirim sapmasının bindirmesi, bindirmeninkine göre arayüz gerilimine veya sertliğine erişim sağlar. Burada gösterilen bir çekme ve serbest bırakma deneyinin temelleri dir. Optik tuzak açıldığında, iki hücre arasındaki arabirimin orta noktasından yaklaşık bir mikrometre uzakta, arayüz kapanın konumuna doğru saptırılır.
Tuzak daha sonra istenilen süre den sonra kapatılır. Elde edilen grafik, maxwell gibi bir model gibi varsayımsal gerçek mantıksal modeller ile karşılaştırılabilir. Kızılötesi lazer ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve koruyucu gözlük takmak gibi önlemlerin bu işlemi yaparken her zaman alınması gerektiğini unutmayın.
Burada, embriyo olanlar için cımbız en sık kullanıcı ile, yöntem de gibi diğer anne sistemleri için kullanılabilir
