この方法は、骨髄微小環境の役割と生着骨髄腫腫瘍の生存に関する重要な質問に答えるために使用することができます。この手順の主な利点は、縦方向抗薬物研究に適用することができ、非侵襲的な方法で複数の生化学的経路をアッセイするために使用できることです。実験当日、8226ルシファーゼトランスファクタル細胞を200 RCFの氷冷PBSで200 RCFで3回、1回の百分数で5分間洗浄し、新鮮な氷冷PBS中のペレットを1匹の氷冷PBS200マイクロリットル当たり200マイクロリットル当たり6細胞あたり5倍から6番目の細胞で再懸濁した。
次に、4〜6週齢のNOGマウスでつま先ピンチへの応答の欠如を確認し、動物の目に眼科軟膏を適用する。26ゲージ針を備えた1ミリリットルのインスリン注射器に細胞をロードする。動物の尾静脈に細胞の全容を注入し、マウスをケージに戻す前に、完全な回復まで監視する。
チャレンジ後10~20日、各生着動物に200マイクロリットルのインビボグレードD-ルシフェリン基質を無菌生理食塩水内腹腔内に注入する。麻酔動物を注射後5~10分以内に小さな動物イメージングシステムの中で、スピーニンの位置に置きます。対応するイメージングソフトウェア内の関心のある選択された領域の平均輝度を測定します。
8226ルシファーゼ腫瘍の標的治療のために、ちょうど実証したように、各動物のベースライン生物発光を測定した後、動物を治療群に無作為化し、テムシロリムスまたは生理食塩水の一連の200マイクロリットルIP注入で各マウスを治療する。ルシファーゼ活性を週に2回測定し、時間の経過に伴う生物発光の変化をプロットします。腫瘍代謝の変化を測定するために、最初にマウスのホームケージから24時間食べ物を取り除き、過剰な非特異的標識フルデオキシグルコース取り込みを避ける。
翌日、滅菌生理食塩水で18フッ素蛍光標識フルデオキシグルコースプローブの500〜100マイクロキュリーを1回のマウスあたり100マイクロリットルの最終体積に希釈し、用量較正装置でプローブの時間と活性を記録する。プローブが準備ができたら、最初の麻酔動物をヘッドを向けた加熱パッドに置き、26ゲージ針を装備したシールドされた1ミリリットルのインスリン注射器を使用して、プローブの100マイクロリットルを尾静脈に注入します。針と注射器の残留放射能を用量キャリブレーターで測定し、活性と時間をメモします。
次に、小動物PET CTイメージングシステムにおける生着腫瘍に対応する選択された関心領域における放射性標識フルデオキシグルコース活性を測定する。骨髄腫瘍の生着が成功した場合、実証したように生物発光イメージングによって確認できる。複数の動物の連続画像化は、骨髄が多発性骨髄腫腫瘍を生着した分布を可視化するために使用することができる。
さらに光学イメージングX線分析は、マウス骨格内の多発性骨髄腫腫瘍の正確な位置および分布の迅速かつ非侵襲的な決定を示す。これらの生着腫瘍細胞によって産生される生物発光は、腫瘍増殖の変化を評価するために逐次および非侵襲的に測定することができる。さらに、mTOR阻害剤であるテムシロリムスで治療したマウスの生存をモニタリングし、腫瘍標識フルデオキシグルコース取り込みのための陽電子放出およびコンピュータ断層撮影分析を使用して、グルコース代謝のテムシロリムス媒介性変化を実証することができる。
この手順を実行している間、細胞IEVを注入することが重要です。静脈に細胞を注入しないと、注射部位の近くに非骨髄が生着した腫瘍細胞が形成されることがわかりました。この手順に従って、免疫組織化学およびマイクロCTのような他の方法は、骨アーキテクチャおよび非腫瘍細胞および分子成分の骨髄環境に対する腫瘍の影響に関する質問に対処するために使用することができる。
