Cette méthode peut être utilisée pour répondre à des questions clés sur le rôle du micro-environnement de la moelle osseuse et la survie des tumeurs greffées du myélome. Le principal avantage de cette procédure est qu’elle peut être appliquée à des études antidrogue longitudinales et utilisée pour analyse de multiples voies biochimiques d’une manière non invasive. Le jour de l’expérience, lavez d’abord les 8226 cellules transfactées Luciferase trois fois dans le PBS glacé à 200 RCF pendant cinq minutes pour centrifigation et réutilisez la pastille dans le PBS froid de glace fraîche à cinq fois dix à six cellules pour 200 microlitres de PBS froid par souris.
Ensuite, confirmez un manque de réponse au pincement des pieds chez une souris NOG anesthésiée de quatre à six semaines et appliquez de l’onguent ophtalmique sur les yeux de l’animal. Chargez les cellules dans une seringue à insuline d’un millilitre équipée d’une aiguille de calibre 26. Injecter tout le volume de cellules dans la veine de la queue de l’animal, avant de retourner la souris dans sa cage, en surveillant jusqu’à la récupération complète.
Dix à vingt jours après le défi, injecter chaque animal greffé avec 200 microlitres de substrat in vivo grade D-luciferin dans stérile saline intraperitonealy. Placez les animaux anesthésiés dans la position supine dans un petit système d’imagerie animale dans les 5 à 10 minutes qui ont après l’injection. Mesurer l’éclat moyen dans certaines régions d’intérêt au sein du logiciel d’imagerie correspondant.
Pour la thérapie ciblée des 8226 tumeurs de Luciferase, après avoir mesuré la bioluminescence de base chez chaque animal comme juste démontré, randomiser les animaux en groupes de traitement et traiter chaque souris avec une série de 200 microlitres ip injection de Temsirolimus ou un contrôle salin. Mesurez l’activité de Luciferase deux fois par semaine et tracez les changements de bioluminescence au fil du temps. Pour mesurer les changements dans le métabolisme tumoral, retirez d’abord la nourriture de la cage à la maison des souris pendant 24 heures pour éviter l’absorption non spécifique non spécifique de Fludeoxyglucose.
Le lendemain, diluer 500 à 100 microcuries de 18 sondes fludeoxyglucose radioétiques fluorées dans une solution saline stérile à un volume final de 100 microlitres par souris et enregistrer l’heure et l’activité des sondes avec un calibreur de dose. Lorsque les sondes sont prêtes, placez le premier animal anesthésié sur un coussin chauffant dont la tête est orientée vers l’extérieur et utilisez une seringue à insuline blindée d’un millilitre munie d’une aiguille de calibre 26 pour injecter 100 microlitres de la sonde dans la veine arrière. Mesurez la radioactivité résiduelle dans l’aiguille et la seringue à l’aide du calibreur de dose et notez l’activité et le temps.
Mesurez ensuite l’activité fludeoxyglucose radioétique dans certaines régions d’intérêt qui correspondent aux tumeurs greffées d’un petit système animal d’imagerie TEP. Un engraftment réussi de tumeur de moelle peut être confirmé par la formation image de bioluminescence comme démontré. La formation image périodique de plusieurs animaux peut être employée pour visualiser la distribution des tumeurs multiples greffées de myélome de moelle.
En outre l’analyse optique de rayon X d’imagerie montre une détermination rapide et non invasive de l’emplacement exact et de la distribution des tumeurs multiples de myélome dans le squelette de souris. La bioluminescence produite par ces cellules tumorales greffées peut être mesurée en série et non invasive pour évaluer les changements dans la croissance tumorale. En outre, la survie des souris traitées avec l’inhibiteur de mTOR Temsirolimus peut être surveillée et l’émission de positron et l’analyse calculée de tomographie pour l’absorption radiolabeled de fludeoxyglucose de tumeur peuvent être employées pour démontrer des changements temsirolimus médiatisés dans le métabolisme de glucose.
Lors de l’exécution de cette procédure, il est important d’injecter les cellules IEV. Nous avons constaté que l’incapacité d’injecter les cellules dans la veine entraîne la formation de cellules tumorales greffées non moelleuses près du site d’injection. Après cette procédure, d’autres méthodes comme l’immunohistochimie et le micro-CT peuvent être utilisées pour répondre aux questions sur l’impact des tumeurs sur l’architecture osseuse et les composants cellulaires et moléculaires non tumoraux de l’environnement de la moelle osseuse.
