이 방법은 골수 마이크로 환경의 역할과 이식 된 골수종 종양의 생존에 대한 주요 질문에 대답하는 데 사용할 수 있습니다. 이 절차의 주요 장점은 종방향 항약물 연구에 적용될 수 있으며 비침습적 방식으로 여러 생화학 경로를 분석하는 데 사용될 수 있다는 것입니다. 실험 당일 8226 루시파라제는 얼음 감기 PBS에서 5분 동안 200 RCF에서 3회 세척하고 마우스당 얼음 차가운 PBS 200 마이크로리터당 5배에서 6번째 세포로 펠릿을 재해석한다.
다음으로 마취 된 4 ~ 6 주 된 NOG 마우스에서 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인하고 동물의 눈에 안과 연고를 적용합니다. 26 게이지 바늘이 장착된 1밀리리터 인슐린 주사기에 세포를 적재합니다. 동물의 꼬리 정맥에 세포의 전체 볼륨을 주입, 그것의 케이지에 마우스를 반환하기 전에, 전체 복구 될 때까지 모니터링.
10~20일 의 도전 후, 각 이식된 동물에게 생체내 200마이크로리터의 멸균 식염수 내의 소염을 주입한다. 마취된 동물을 주사 후 5~10분 이내에 작은 동물 이미징 시스템에 척추 위치에 놓습니다. 해당 이미징 소프트웨어 내에서 선택한 관심 영역에서평균 광채를 측정합니다.
8226 루시파아제 종양의 표적 요법을 위해 각 동물의 기준선 생물발광을 측정한 후, 동물을 치료 그룹으로 무작위화하고 각 마우스를 템시롤리무스의 200 마이크로리터 IP 주입 또는 식염수 대조군으로 치료한다. 루시파아제 활성을 일주일에 두 번 측정하고 시간이 지남에 따라 생물 발광의 변화를 플롯합니다. 종양 대사의 변화를 측정하기 위해, 먼저 과잉 비특이적 방사선 표지 플루데옥시글루흡수를 피하기 위해 24시간 동안 마우스의 홈 케이지에서 음식을 제거한다.
다음 날 18개의 플루오린 방사성 라벨이 부착된 플루데옥시글루컬 프로브를 멸균 식염수로 희석하여 마우스당 100마이크로리터의 최종 부피로 희석하고 용량 교정기로 프로브의 시간과 활성을 기록합니다. 프로브가 준비되면 머리가 멀리 향하고 있는 가열 패드에 첫 번째 마취 동물을 배치하고 26 게이지 바늘을 장착 한 차폐 된 1 밀리리터 인슐린 주사기를 사용하여 프로브의 100 마이크로 리터를 꼬리 정맥에 주입합니다. 투여량 교정기와 함께 바늘과 주사기의 잔류 방사능을 측정하고 활동 및 시간을 주목한다.
그런 다음 작은 동물 PET CT 이미징 시스템에서 이식된 종양에 대응하는 관심의 선택된 영역에서 방사선 표지된 Fludeoxyglucose 활성을 측정합니다. 성공적인 골수 종양 이식은 입증된 바와 같이 생체 발광 화상 진찰에 의해 확인될 수 있습니다. 여러 동물의 연쇄 화상 진찰은 골수 이식 다발성 골수종 종양의 분포를 시각화하기 위하여 이용될 수 있습니다.
추가로 광학 화상 진찰 엑스레이 분석은 마우스 골격 내의 다발성 골수종 종양의 정확한 위치 그리고 분포의 신속하고 비 침습적인 결정을 보여줍니다. 이식된 종양 세포에 의해 생성된 생물 발광은 종양 성장의 변화를 평가하기 위하여 연속적으로 비침습적으로 측정될 수 있습니다. 더욱이, mTOR 억제제 Temsirolimus로 치료된 마우스의 생존을 감시하고 양성근 방출 및 종양 방사선 표지플루데옥당 섭취에 대한 계산단층 촬영 분석을 통해 포도당 대사의 템시롤리무스 매개 변화를 입증하는 데 사용될 수 있다.
이 절차를 수행하는 동안 세포 IEV를 주입하는 것이 중요합니다. 우리는 정맥으로 세포를 주입하는 실패가 주입의 사이트 근처 비 골수 이식 종양 세포의 형성에 결과 발견했습니다. 이 절차에 따라 면역 조직 화학 및 마이크로 CT와 같은 다른 방법은 골수 환경의 뼈 아키텍처 및 비 종양 세포 및 분자 구성 요소에 미치는 종양영향에 대한 질문을 해결하는 데 사용할 수 있습니다.
