Questo metodo può essere utilizzato per rispondere a domande chiave sul ruolo del micro-ambiente del midollo osseo e sulla sopravvivenza dei tumori del mieloma innestati. Il vantaggio principale di questa procedura è che può essere applicato a studi longitudinali anti-farmaci e utilizzato per saggiare più vie biochimiche in modo non invasivo. Il giorno dell'esperimento lavare per la prima volta le 8226 cellule trasfatte luciferasi tre volte in PBS ghiacciato a 200 RCF per cinque minuti per centrifigazione e rimescolare il pellet in PBS freddo ghiaccio fresco a cinque volte dieci al sesto cellule per 200 microlitri di PBS ghiacciato per topo.
Successivamente confermare una mancanza di risposta al dito del dito in un topo NOG anestetizzato di quattro o sei settimane e applicare un unguento oftalmico agli occhi dell'animale. Caricare le cellule in una siringa per insulina da un millilitro dotata di un ago calibro 26. Iniettare l'intero volume di cellule nella vena di coda dell'animale, prima di riportare il mouse nella sua gabbia, monitorando fino al pieno recupero.
Da dieci a venti giorni dopo la sfida, iniettare ogni animale innestato con 200 microlitri di substrato D-luciferina di grado in vivo in intraperitonealy salina sterile. Posizionare gli animali anestetizzati in posizione supina in un piccolo sistema di imaging animale entro 5-10 minuti dall'iniezione. Misurare la luminosità media in aree di interesse selezionate all'interno del software di imaging corrispondente.
Per una terapia mirata dei tumori della Luciferasi 8226, dopo aver misurato la bioluminescenza di base in ogni animale come appena dimostrato, randomizzare gli animali in gruppi di trattamento e trattare ogni topo con una serie di iniezione IP di 200 microlitri di Temsirolimus o un controllo salino. Misurare l'attività della Luciferasi due volte a settimana e tracciare i cambiamenti nella bioluminescenza nel tempo. Per misurare i cambiamenti nel metabolismo tumorale, rimuovere prima il cibo dalla gabbia domestica dei topi per 24 ore per evitare l'assorbimento di fludeossiglucosio non specifico in eccesso.
Il giorno successivo diluire da 500 a 100 microcuries di 18 sonda fludeossiglucosio radioetichettata fluoro in salina sterile ad un volume finale di 100 microlitri per topo e registrare il tempo e l'attività delle sonde con un calibratore di dose. Quando le sonde sono pronte, posizionare il primo animale anestetizzato su una pastiglia riscaldante con la testa rivolta verso l'interno e utilizzare una siringa per insulina da millilitro schermata dotata di un ago calibro 26 per iniettare 100 microlitri della sonda nella vena della coda. Misurare la radioattività residua nell'ago e nella siringa con il calibratore di dose e annotare l'attività e il tempo.
Quindi misurare l'attività del fludeossiglucosio radioetichettato in regioni selezionate di interesse che corrispondono ai tumori innestati in un piccolo sistema di imaging PET CT animale. Un'innesto tumorale del midollo osseo di successo può essere confermata dall'imaging a bioluminescenza come dimostrato. L'imaging seriale di più animali può essere utilizzato per visualizzare la distribuzione del midollo osseo innestato tumori multipli del mieloma.
Inoltre, l'analisi ottica dei raggi X mostra una determinazione rapida e non invasiva della posizione esatta e della distribuzione dei tumori multipli del mieloma all'interno dello scheletro del topo. La bioluminescenza prodotta da queste cellule tumorali innestati può essere misurata in modo seriale e non invasivo per valutare i cambiamenti nella crescita tumorale. Inoltre, la sopravvivenza dei topi trattati con l'inibitore mTOR Temsirolimus può essere monitorata e l'emissione di positroni e l'analisi tomografica computerizzata per l'assorbimento di fludeossiglucosio radioetichettato tumorale possono essere utilizzate per dimostrare i cambiamenti mediati del Temsirolimus nel metabolismo del glucosio.
Durante l'esecuzione di questa procedura è importante iniettare le celle IEV. Abbiamo scoperto che la mancata iniezione delle cellule nella vena provoca la formazione di cellule tumorali non innestati dal midollo vicino al sito di iniezione. Seguendo questa procedura, altri metodi come l'immunoistochimica e la micro-TC possono essere utilizzati per affrontare domande sull'impatto dei tumori sull'architettura ossea e sui componenti cellulari e molecolari non tumorali dell'ambiente del midollo.
