Kemoterapi ile birlikte immünoterapi kanserde etkili tedavi geliştirmek için yenilikçi bir yaklaşım temsil eder. Ana hedefleri sinerjik elde etmektir, terapötik etkileri, doz ve toksisite azaltma, ve en aza indirmek veya ilaç direnci indüksiyon geciktirmek için. Ancak, pratik ve etik nedenlerle, hastalarda sinerji belirlemek mümkün değildir. Bu nedenle, klinik çalışmalarda doğrudan kombinasyon öncesinde, Prenicaptor kombinasyon çalışmaları, in vitro, ve / veya hayvanlarda, klinik çalışmalar için mantığı elde etmek için yapılmalıdır. Uyuşturucular arasındaki sinerji ölçmek için basit bir sağlam yöntem, bu videoda gösterildiği gibi, Shouan Talale tarafından geliştirilen kombinasyon indeks denklemine dayanmaktadır. Bu yöntemi kullanarak, ve bilgisayarlı simülasyon, burada kanıt, Monoklonal Antikor arasındaki sinerji 8B6, Hangi O-Asetil-GD2 Ganglioside nöroblastom antijen ve nöroblastom hücreleri üzerinde kemoterapötik ilaç Topotecan için özeldir. Kısaca, insan IMO'daki her bir bileşiğin 50 değeri, 5 nöroblastom hücre hattının etkin dozu belirlendikten sonra, bu hücreler iki bileşiğin eşit oranları ile entübe edildi ve kombinasyon indeksi değerleri otomatik bilgisayar simülasyonu kullanılarak hesaplandı. Daha sonra bu sonuçları Vivo'da, Bir IMO,5 tümör knenograflı modelde doğruladık. IMR-5 hücrelerini Bir T75 şişesinde büyüttük, mikroskop altında gözlemledik, hücre birliğini kontrol etmek için. Şişeden hücre ortasını asperate, 5 mL PBS ile yıkayın. %0,05 EDTA/PBS çözeltisi 3 mL ekleyin. Şişeyi 3 dakika lığına kuvöze geri verin. Hücre ayırma için mikroskop altında hücre kültürünü inceleyin. Şişeye 10 mL'lik tam hücre lisi ekleyin ve hücre süspansiyonuna steril, 15 mL konik tüpe aktarın. Hemositometre kullanarak 300 g.Count hücrelerinde beş dakika santrifüj. Supernatant'ı çıkarın ve atın. Tam Büyüme Medium.Adjust 100, 000 hücreleri / mL.Seed 84 kuyu, 96 iyi kültür plaka 10, 000 hücreleri her, hücre süspansiyon 100 mikrolitre nihai konsantrasyon elde etmek için orta hacim ayarlayın hücreleri askıya alın. Hücre Incubator.Dilute monoklonal antikor içinde 18 saat boyunca inkübate hücreleri 500 mikrolitre Komple Büyüme Orta monoklonal antikor monoklonal bir çalışma çözümü elde etmek için bir monoklonal antikor konsantrasyonu ile bir antikor çalışma solüsyonu elde etmek için 240 mL.Perform 5 iki kat seri sanrılar protokolde belirtildiği gibi. Nihai konsantrasyon 120 nanomolar ile bir ilaç çalışma çözümü elde etmek için Komple Büyüme Orta 500 mikrolitre ilaç seyreltin. Protokolde belirtildiği gibi 5, iki kat seri sanrılar gerçekleştirin. İlacın artı monoklonal anibodies çözeltileri aynı şekilde seyreltin. Son konsantrasyona ulaşmak için, bu deneysel düzende gösterildiği gibi ilgili kuyularda her ilaç çözeltisinin 50 mikrolitre transfer. Hücreleri 72 saat kuluçkaya yatırın. Her kuyuya 10 mikrolitre MTT reaktif çözeltisi ekleyin. 4 saat boyunca 37 derecede kuluçkaya yat. Çok kanallı pipet kullanarak her kuyuya 100 mikrolitre liken çözeltisi ekleyin ve pipetleme ile iyice karıştırın. Nemlendirilmiş bir odada 4 saat boyunca 37 derecede kuluçkaya yat. Bir spektrofotometre kullanarak 570 ve 620 nanometre emiciler kurtulun. Hücrenin canlılığını aşağıdaki gibi hesaplayın. Aşağıdaki denklemi kullanarak etkilenen kesir değerlerini hesaplayın. Simülasyon yazılımı çalıştırın, ana pencereyi elde etmek için yeni deneme düğmesine tıklayın. Deneyin adını yazın. Yeni tek ilaç tıklayın. Adı yazın. Kısaltmayı yazın. İlaç toplama birimini yazın. Veri 1 doz ve FA değerini girin. Enter.Tüm veri noktaları girilene kadar bu adımı yineleyin' e basın. Bitti'yi tıklatın.Monoklonal antikor veri noktalarıgirmek için aynı adımları izleyin. Tıklayın Yeni İlaç Combo.Select ilaç ve monoklonal antikorlar. Sabit Oran'ı seçin.Tamam'ı tıklatın. Adı yazın. Kısaltmayı yazın. İlacın monoklonal antikor oranını yazın. Veri 1 doz girin. Enter.The program abasın otomatik olarak Monoklonal Antikor 8B6 ve açılan dozlarını hesaplar. Veri 1 FA değerini girin.Enter.Tüm veri noktaları girilene kadar bu adımı yineleyin' e basın. Tamamlandı.Sonra Raporu Oluştur'u tıklatın.İlaç ve monoklonal antikor seçin ve ardından Tamam'ı tıklatın. Combo'yu seçin ve ardından Tamam'ı tıklatın. Üstbilgi, CI Tablosu ve Özet Tablo'yu seçin ve ardından Tamam'ı tıklatın. Dosya adını ve çözümlemesi yazın ve raporu oluşturmak için kaydet'i tıklatın. Rapor, kişinin varsayılan web tarayıcısında otomatik olarak açılır. Rapor, başlık, tarih, son ad, açıklama notu, m, Dm ve r parametreleri, monoterapi veya kombinasyon olarak kullanılan ajan için etkili doz 50 ve etkili doz50, 75, 90 ve 95.A kombinasyon indeks değeri 1'den daha az olan kombinasyon indeks tablosunu içeren bir özet tablo bölümü içerir. Bir değer bir değere eşittir, katkıyı gösterir. 1'den büyük bir değer düşmanlığı gösterir. Kullanmadan önce 4 derece C buzdolabında buz şişebatırarak bir gecede çözülme bodrum membran matris. Tüm kültür giyim, ya da medya bodrum membran metrik ile temas eden önceden soğutulmuş olmalıdır. Hasat kültür IMR5. Hücreleri 15 mL konik tüpe ve santrifüje 300 g'da 5 dakika aktarın. Supernatant atın. Hücreleri 15 mL buz gibi PBS ile iki kez yıkayın. Buz gibi PBS'de mL başına 5 milyon hücre için bir hücre süspansiyonu hazırlayın. Hücre süspansiyonuna 1,5 mL mikrotüp aktarın. Döner bazik membran matris şişe. ML başına 2,5 milyon hücre hücre süspansiyon elde etmek için pipetleme ile karışık bodrum membran matris reaktifi 1 hacim ekleyin.Buz üzerinde hücre süspansiyon tutun. Enjeksiyonun yapılacağı yerin kanadını tıraş edin. Hücreleri karıştırın ve hücre süspansiyonuna 21 g iğneyle monte edilmiş 1 mL şırınganın içine dikkatlice çizin. Şırıngada hava kabarcığı olmadığından emin ol. Farelerin aşı alanını antiseptik bir solüsyonla dezenfekte edin. Yavaşça enjeksiyon yerinde parmakları arasında yan fare deri sıkmak. İğneyi tam olarak deri kıvrımına takın. Subkutan enjeksiyonu sigortalamak için iğneyi dokunun derinliklerine yerleştirmeyin. 100 mikrolitre IMR5 hücre süspansiyonuna deri altı enjekte edin. Sıvı yayılmasını önlemek için şırıngayı döndürün ve iğneyi geri çekin. Vücut ağırlığı ve tümör büyümesi için fareleri izleyin. Tümörün uzunluğunu ve genişliğini kalibre ile ölçün. Bu formülü kullanarak tümör hacmini hesaplayın. Tümörler ortalama 50-60 mm hacmine ulaştığında tedaviye başlayın
