Eşzamanlılık ve beyin ve bağırsak mikrobiyota arasındaki çizgiler etkileşimleri bilinmemektedir. Bu tekniği kullanarak, farelerde travmatik beyin hasarı sonrası bağırsak mikrobiyotasındaki değişiklikler incelenebilir. Bu tekniğin en büyük avantajı nispeten basit ve verimli olmasıdır.
Prosedürü gösteren Wendong You, benim laboratuvarımdan bir yüksek lisans öğrencisi olacak. Travmatik beyin hasarı indüksiyonu için, anestezili bir farede ayak sıkışmasına yanıt eksikliğini onaylayın ve hayvanın gözlerine merhem uygulayın. Tıraştan sonra, sagital düzlemde kafa derisi kesici önce% 70 etanol ile maruz kafa derisi cilt dezenfekte.
Forseps kullanarak, her iki taraftaki kesiği geri çekin ve periostu biraz ayırın. Kafatasının sağ parietal bölgesine orta hattan iki milimetre uzakta üç milimetre çapında bir daire çizmek için bir işaret kullanın. Dura zarar vermeden dikkatle kafatası nüfuz etmek için bir elektrikli matkap kullanın.
Üç milimetrelik bir kemik penceresini ortaya çıkarmak için kemik kapağını çıkarın ve kraniyotomi üzerine plastik bir yaralanma kanüli yerleştirin. Diş akrilik ile kafatasına kanül çimentolama sonra, steril% 0.9 normal tuzlu kanül doldurmak için beş mililitrelik şırınga kullanın, kabarcıklar önlemek için özen. Osiloskopu ve amplifikatörü açın.
Yanal sıvı perküsyon yaralanma cihazının yüksek basınçlı tüp hava kabarcıkları ücretsiz olduğunu onaylayın, ve yaklaşık 10 test darbeleri teslim, cihaz sabit bir sinyal verene kadar. Sarkaç başlangıç pozisyonunun açısını ayarlayarak yaklaşık iki standart atmosferin nabzı yoğunluğuna ulaşın ve yaralanma kanülünü lateral sıvı perküsyon yaralanma cihazına bağlayın. Sarkaç serbest bırakmak için tetiği çekin, beyin hasarına neden.
Daha sonra tüm kapalı, sıvı dolu boru sistemi üzerinden dura bir darbe elde etmek ve iletmek. Beyin hasarı indüksiyonsonra, kanül kaldırmak ve kesi dikiş. Daha sonra fareyi ambulatuar olana kadar izleyerek bir ısıtma yastığına yerleştirin, hayvanı yiyecek ve suya reklam libitum erişimi ile ev kafesine geri döndürmeden önce.
Belirtilen deneysel zaman noktalarında, standart protokollere göre bağırsakları ortaya çıkarın ve caecum'u diğer bağırsak lardan nazikçe ayırmak için atravmatik enifler kullanın. Doku bulunduğunda, keskin makas ile caecum kesilmiş ve el ile steril bir pansuman üzerine caecum içeriğini ayıklayın. Sonra mikrobiyom analizi kadar eksi 80 derece santigrat depolama için, 1.5 mililitrelik mikrosantrifüj tüp içeriğini aktarın.
16S rekombinant DNA dizilemesi, travmatik beyin hasarından üç gün sonra farelerde kaecum mikrobiyotasında azalmış bir çeşitlilik olduğunu ve şemal ve travmatik beyin hasarı gruplarının kaecum içeriğinde en bol taksonun figüründe gösterildiğini göstermektedir. Ayrıca, non-metrik, çok boyutlu ölçekleme travmatik beyin hasarı sonrası kaecum mikrobiyota bileşiminde değişiklikler ortaya koymaktadır. Kafatası delme dura bozulmadan tutmak için unutmayın, ve bulmak ve diğer bağırsak yollarından caecum ayırırken nazik olmak.
Bu işlemden sonra travmatik beyin hasarı sonrası bağırsaklarda histolojik değişim ve inflamatuar yanıtı incelemek için hematoksilin ve eozin boyama ve analiz yapılabilir.
