Bu protokol, laringgotracheal darlığı küçük bir hayvan modelinde ilaç eluting stentler araştırmak bize bize maliyet etkin bir şekilde genetiği değiştirilmiş hayvanlar kaldıraç sağlar sağlar. İlaç eluting hava yolu stentinin transoral yerleşimi, hayvanları açık bir kesiden trakeaya daha klinik olarak uygun bir laringgotracheal darlığı modelini temsil eden bir kesiden uzaktır. Bu teknik laringokraheal darlığı tedavisinde lokal ilaç dağıtım stratejilerinin klinik öncesi araştırmasını kolaylaştırmaktadır.
Bu teknik, küçük bir hayvan modelinde ilaç eluting hava yolu stentlerinin daha büyük hayvan modellerinde ve klinik uygulamada ileride araştırılması için uygulanabilecek çevirisel araştırma için uygulanabilir ve etkili bir platform sağlar. tekniği özellikle transoral entübasyon, trakea yaralanması indüksiyonu ve hava yolu stent yerleştirme adımı. Bu teknik olarak zorlu ameliyatın görsel gösterimi çok önemlidir, çünkü ince detayların çoğu kelimelerle tam olarak açıklanamaz.
Polimer çözeltisi içeren% 1 rapamisin yapmak için, bir cam şişe 70-30 PLLA-PCL 600 miligram rapamycin altı miligram ekleyin. Bir duman kaputunun altında, rapamisin takviye li ve kontrol şişesine altı mililitre diklorometan ekleyin ve her şişeye 120 mikrolitre gliserol ekleyin. Daha sonra şişeleri kaplayın ve PLLA-PCL çözeltisinin oda sıcaklığında altı ila 12 saat homojenize olmasını bekleyin.
Bir murine hava yolu stent oluşturmak için, steril malzemeler ve teknik kullanarak, kateter dönerken yavaşlarken bir 22 gauge florlu etilen propilen bazlı anjiyatörün venöz kanül üzerine rapamisin takviyeli PLLA-PCL çözeltisi bir mililitre uygulayın. Tüm çözelti uygulandığında, anjiyokateterin ucu aşağıya bakacak şekilde kalıplanmış anjiyokateteri ve bir vakum kaputunda cam petri kabının kenarındaki kateterin kabzasını hareket lendirin. Oda sıcaklığında vakum altında 24 saat sonra, yavaşça büküm ve kurutulmuş stent yapıkateti slayt ve circumferentially döküm işlemi sırasında ortaya çıkabilecek herhangi bir kusur için stent kontrol edin.
Görselleştirmeye yardımcı olmak için, stent uzunluğu aşağı ince bir siyah çizgi çizmek için yararlıdır. Kenarları eksenel olacak şekilde ince düz makas ile döküm stent her ucunu kırpın ve üç milimetre eksenel segmentler halinde her stent kesmek için makas kullanın. Daha sonra her üç milimetrelik stenti yeni bir 22 gauge venöz kateter üzerine yükleyin.
Laringorracheal stenoz indüksiyon için, parmak sıkışma yanıt eksikliği doğruladıktan sonra, supine pozisyonda bir cerrahi platform üzerine ilk fare yerleştirin ve merkezi kesici dişlerin etrafında platformun üst yapıştırılmış iplik küçük bir parça döngü. Bant ile masaya uzuvları güvenli ve farenin boynunda 1,5 santimetre orta hat dikey kesi yapmak. Üstteki timusu bölün ve trakeayı görselleştirmek için ortaya çıkan iki lobu lateralize edin.
Üstteki sternohyoid ve sternotiroid kasları iki taraflı olarak superior eki bölün ve gırtlak yoluyla transoral bir 22 gauge anjiyokateter geçmek trakea içine. Küçük büterler kullanarak, kateterin doğru yerleştirilmesine yardımcı olmak için farenin ön gırtlağa basınç uygulayın. Doğru yerleştirilmiş bir anjiyokateter, trakea yoluyla beyaz rengi ile görüntülenebilir.
Yaralanmayı tetiklemek için, içine yerleştirilen anjiyokateterden Bleomisin kaplı tel fırça geçirin ve kateteri yavaşça geri çekin, böylece sadece tel fırça nefes borusunda kalır. İnce pratisyen ler kullanarak, kateteri fırçanın üzerine trakeaya yeniden takmadan önce trakeal lümeni fırçayla mekanik olarak bozmak için trakeaya karşı basınç uygulayın. Tel fırçasını çıkarın ve fırçayı sadece gösterildiği gibi dört kez daha takmadan ve çıkarmadan önce Bleomisin'i yeniden uygulayın.
Son Bleomisin uygulamasından sonra kateteri trakeadan çıkarın. PLLA-PCL'nin transoral yerleşimi için, her stentin içine ince siyah dikey bir çizgi nin dahil olduğundan emin olun ve önceden yüklenmiş anjiyokateter ile fareyi transoral entübasyona dönüştürün. Stent transservikal kesi ile trakea içinde görselleştirilmelidir.
Stent yerinde yken, stenti yerinde tutmak ve kateteri çıkarmak için kesiği kesin olarak ancak nazikçe kavramak için ince çerterler kullanın. Stenti mümkün olduğunca dikkatli yerleştirmek çok önemlidir. Trakea üzerinde çok fazla basınç stent çökmesine neden olacak hava yolu tıkanıklığı ve hayvan ölümüne neden olur.
Burada kullanılan doku tutkal veya emilebilir 4-0 kromik dikişler ile kesi kapatın ve fare ev kafese hayvan dönmeden önce izleme ile kurtarmak için izin. Uygun deneysel bitiş noktasında, cerrahi platformda supine pozisyonda ilgi fare yerleştirin ve kesi yeniden açmak için ince kavisli iris makası kullanın. Gösterildiği gibi trakea maruz ve stent seviyesinin altına distal trakea bölmek için makas kullanın.
Daha sonra proksimal trakeayı gırtlak ve stentin üzerine bölve bölünmüş trakeayı yemek borusundan posteriora ayırın. Daha sonra stenti trakeadan çıkarın ve 24 saat boyunca %10 formalin le trakeayı düzeltin. Bu çalışmada kullanılan biyobozunur rapamisin yüklü PLLA-PCL stent yapısı fizyolojik koşullar altında tutarlı ve öngörülebilir bir şekilde rapamisin eluting yeteneğine sahiptir.
Bu resimde, minyatürleştirilmiş biyouyumlu stent, yarı saydam fare trakeası ile görselleştirilen stentteki siyah marker ile gösterildiği gibi trakea içinde yerinde gözlemlenebilir. 21 gün sonra, siyah boya işareti trakea içinde stent pozisyonunun bakım onaylamak için kullanılabilir. Akut ve kronik inflamasyon belirteçleri için immünofloresan boyama kullanılarak yapılan biyouyumluluk testleri, PLLA-PCL stent yapısının, yaralanma yokluğunda yerleştirildikten sonra mevcut olan immün hücrelerin en az sayıda tespit edilerek immünreaktif olmadığını göstermektedir.
Hava yolunu hassas ve atravmatik bir şekilde manipüle etmek işlemin başarısı için çok önemlidir. Aşırı güç, çoklu entübasyonlar ve stent çökmesi hayvan ölümüne yol açabilir. Rapamisin eluting stenti ile tedavi den sonra, sağkalım değerlendirmesi, kantitatif gerçek zamanlı PCR ile gen ekspresyonu, akış sitometrisi dahil immünoassay, ELISA ve immünohistokimya yapılabilir.
Bir fare modelinde ilaç elüsyonu için başarılı bir platform sağladığından, bu teknik laringgotracheal darlıkta lokal olarak uygulanan terapötiklerin gelecekteki araştırmalarının önünü açmaktadır. Diklorometan aşındırıcı bir sıvıdır. Her zaman bir duman başlık, kişisel koruyucu ekipman ve aşındırıcı olmayan malzemeler kullandığınızdan emin olun
