Protokolümüz osteoartrit gelişimi ve ilerlemesinde eklem değişikliklerinin kantitatif analizi için sağlam ve tekrarlanabilir bir yönteme karşılanmamış bir ihtiyacı gidermez. Tekniğimiz osteoartritte birden fazla eklem dokularında değişikliklerin kantitatif analizi için spesifik ve tekrarlanabilir parametreleri özetler. Bu teknik osteoartrit kantitatif analizi için izin verdiği gibi, onların terapötik etkinliğini değerlendirmek için birden fazla eklem dokuları üzerinde özel tedavilerin etkilerini karşılaştırmak için istihdam edilebilir.
Protokolümüz ayrıca diğer osteoartrit modellerine veya kıkırdak ve kemik kantifikasyonunun gerekli olduğu kas-iskelet araştırma alanlarına da uygulanabilir. Sistem basit ve sezgisel olmasına rağmen, tekrarlanabilirlik elde etmek için ölçümleri tekrartekrar elde etmek için eğitim oturumları hala gereklidir. Vengadeshprabhu Karuppagounder, laboratuvarımızdan doktora sonrası bir bilim adamı şimdi prosedürümüzü sergileyecek.
Mikroskobu, kamerayı, bilgisayarı ve dokunmatik ekranı açarak başlayın. 4X hedefini seçin ve yazılım programını başlatmak için yazılım simgesine tıklayın. Slaytı mikroskop aşamasına yerleştirin ve ölçü ızgarasının hem tibial hem de femoral eklem yüzeyinin ve tibial subkondral kemiğin ilgi çekici görüntü bölgeleri içinde yer aldığı hedefe uyacak şekilde uygun büyütmeye ayarlanmasını sağlamak için numuneyi ölçüm penceresine yerleştirin.
Ardından Dosya menüsünün altında Ayarlar'ı Oku'yu seçin. Ayarlar penceresinde, ölçülecek parametreler için uygun ayarlar dosyasını seçin. Toplam kıkırdak alanını ölçmek için Tib TC fonksiyonunu seçin ve kıkırdağın eklem boşluğuyla buluştuğu tibial kıkırdak yüzeyinin üst kenarı boyunca ve kalsifiye kıkırdağın subkondral kemikle buluştuğu kondro-osseöz kavşak boyunca iz edin.
Kalsifiye kıkırdak alanını ölçmek için Tib CC işlevini seçin ve gelgit işareti boyunca bir çizgi, kıkırdağın kalsifiye ve kireçlenmemiş bölgelerini ayıran doğal olarak oluşan bir çizgi ve kireçlenmiş kıkırdağın subkondral kemikle buluştuğu kondro-osseous kavşak boyunca izleyin. Kireçlenmemiş kıkırdak alanını belirlemek için, kalsifiye kıkırdak alanını toplam kıkırdak alanından çıkarın. Kondrosit sayısını belirlemek için, matris üreten ve matris olmayan kondrositler ayırt etmek için histomorfometri yazılımı ayarları içinde ayrı sayı fonksiyonları oluşturun.
Sonra kondrosit üreten veya üreten değil matris sayısını belirlemek için belirtilen fenotip ifade her kondrosit üzerinde küçük bir nokta yapmak için kalemkullanın. Toplam tibial eklem yüzey parametresini ölçmek için, tek tek fibrilasyonları dikkatle tanımlamak için tibial kıkırdağın yüzeyinde bir çizgi iz. Daha sonra her bölümün düzlemi için bir iç kontrol olarak hizmet etmek için gelgit işareti boyunca ikinci bir çizgi çizin ve tibial eklem yüzey fibrilasyon indeksi hesaplamak için gelgit işareti parametresi ile tibial eklem yüzey parametre bölmek.
Subkondral ilik uzay alanını ölçmek için İlik Alanı işlevini seçin. Daha sonra tibial subkondral kemik içinde kemik iliği alanının toplam alanını belirlemek için bu alanların parametresi etrafında çizgiler çizin. Toplam subkondral alanı ölçmek için Subkondral Kemik fonksiyonunu seçin ve anterior ve posterior osteofit bölgelerine yanal olarak uzanan büyüme plakasının üstün sınırında kondro-osseous kavşak arasındaki bölgeyi anahat.
Daha sonra subkondral kemik alanını hesaplamak için subkondral kemik iliği uzay alanını toplam subkondral alandan çıkarın. Osteofit alanını ölçmek için, ön osteofit fonksiyonunu seçin ve proksimal tibia nın ön osteofitini takip edin. Sonra posterior osteophyte seçin ve proksimal tibia posterior osteophyte iz.
Ön femoral sinovyal kalınlığı ölçmek için, Anterior Femur Sinovyum Menisküs tıklayın ve menisküs üzerindeki eki noktasına doğru femur üzerinde ön sinovyum iç ekleme noktasından bir çizgi çizmek ve menisküs eki doğru femur üzerinde sinovyum dış ekleme bir çizgi. Daha sonra sinovyal kalınlığı hesaplamak için sinovyal parametre ile toplam sinovyal alanı bölün. DMM indüklenen osteoartrit sonuçları sham fareler ile karşılaştırıldığında artmış Osteoartrit Araştırma Derneği Uluslararası puanı.
Yüzey erozyonu ve kıkırdak kaybı ile belirgin karakterizedir. Bu histomorfometri protokolü toplam kıkırdak ve kireçlenmemiş kıkırdak alanlarda bir azalma da dahil olmak üzere çeşitli osteoartrit ilişkili değişiklikleri tespit etmek için kullanılabilir. Toplam kondrosit sayısında bir azalma ve daha da önemlisi, kondrosit üreten matris sayısında bir kayıp.
Erozyonun şiddetini gösteren eklem yüzeyinde değişiklikler de gözlenir, fibrilasyon indeksi genel bir artış da dahil olmak üzere. Osteoartrit de subkondral kemik bölgesinde bir artış ve subkondral kemik skleroz gösteren DMM farelerde kemik iliği alanının bir azalma içerir. Hem anterior hem de posterior osteofit alanları da DMM farelerde artmıştır, yaralanma yerinde eklem yükleme değişiklikleri işlemek için bir telafi mekanizması olarak hareket eden devam eden bir subkondral kemik remodeling düşündürmektedir.
Sinovyumun histomorfometrik analizi DMM farelerde sinovyal kalınlıkta bir artış olduğunu göstermektedir. Osteoartrit ilişkili sinovyal inflamasyon ve eklem alanına inflamatuar sitokinlerin difüzyon tipik bir sonucu. Buna ek olarak, Osteoartrit Araştırma Derneği Uluslararası puan da kireçlenmemiş kıkırdak alanının histomorfometrik analizi arasında önemli bir kullanıcı arası değişkenlik gözlenmez.
Histomorfometrik analizden sonra, örnekler arasındaki protein ekspresyonundaki değişiklikleri incelemek için sıralı slaytlar ve immünoresans boyama kullanılabilir.
