Bu projenin finansmanı Dr. Colleen M. McDowell'ın ihtiyati fonları aracılığıyla sağlandı. Bu çalışma kısmen Research to Prevent Blindness, Inc.'den UW Madison Oftalmoloji ve Görsel Bilimler Bölümü'ne sınırsız bir hibe ile desteklenmiştir. Dr. Abbot F. Clark ve Weiming Mao'ya perfüzyon organ kültürü modelindeki teknik yardımları için teşekkür ederiz. Lions Göz Nakil ve Araştırma Enstitüsü'ne (Tampa, FL) insan donör gözlerini sağladığı için teşekkür ederiz.

Gözler, insan dokusunu içeren araştırmalar için Helsinki Bildirgesi hükümlerine göre elde edildi.
NOT: Saygın göz bankalarının gözleri (örneğin, Lions Eye Institute for Transplant, Research, Tampa FL) 6-12 saat içinde hasat edildi ve donör serum hepatit B, hepatit C ve insan immün yetmezlik virüsü 1 ve 2 için test edildi. Alındıktan sonra, gözler 24 saat içinde TAS modelinde parçalandı ve kuruldu. Dışlama kriterleri herhangi bir oküler patolojiyi içeriyordu. Gözler yaşa, ırka veya cinsiyete göre dışlanmadı. Retinanın alındıktan sonra yaşayabilirliğini sağlamak için doku donörlerinden retina eksplantları toplanmış ve 7 ve 14 gün boyunca kültüre edilmiştir (Ek Şekil 1). Bu retinalar ayrıca RGC belirteci için pozitif lekelenme, çoklu birleştirme (RBPMS) ile RNA bağlayıcı protein ve nörofilamentlerinde pozitif nörofilament ışık zinciri (NEFL) lekelenmesi ile 7 gün boyunca kültürde sağlıklı RGC'ler uzadı ve büyüdü (Ek Şekil 2). .
1. Ekipman ve malzemelerin hazırlanması ve sterilizasyonu
<ol><li>Tedarikçi ve katalog numaralarının yanı sıra gerekli malzemelerin tam listesi için Malzeme Tablosu'na bakın.</li>
	<li>Kullanmadan önce, etilen oksit ampulleri otoklavlayarak veya kullanarak tüm ekipman ve aletleri sterilize edin.</li>
</ol>2. Perfüzyon ortamının hazırlanması
<ol><li>1.000 mL yüksek glikoz Dulbecco'nun modifiye Eagle's medium'una (DMEM) %1 penisilin streptomisin (10.000 U/mL penisilin, %0.85 NaCl'de 10.000 μg/mL streptomisin) ve %1 L-glutamin (200 mM) ekleyin.</li>
	<li>Perfüzyon ortamını 0,22 μm filtreden geçirerek sterilize edin.</li>
</ol>3. Translaminar otonom sistem (TAS) kurulumu
<ol><li>Giriş şırınglarını (Gİb ve ICP rezervuarları) ayarlayın.<ol>
<li>30 mL şırındıya 30 mL perfüzyon ortamı (bölüm 2) ekleyin. 30 mL şırınna 3 yönlü bir stopcock takın. 3 yönlü stopcock'a 0,22 μm hidrofilik filtre takın. 0,22 μm hidrofilik filtreye 15 G Luer saplama adaptörü takın.</li>
		<li>Şırınd kurulumundan hava kabarcıklarını çıkarın. Boruyu 15 G Luer saplama adaptörüne takın. Stopcock'un yan portunun yanını düzensiz bir evrensel kilit kapağı ile kapatın. Toplam iki kurulum için yineleyin.</li>
		<li>Bir şırıng kanal 1 intrakraniyal basınç (CH1 ICP) ve diğer şırıng kanal 2 göz içi basıncı (CH2 Gİb) olarak etiketlenin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Çıkış şırıngırlarını (Gİb ve ICP rezervuarları) ayarlayın.<ol>
<li>30 mL şırınna 3 yönlü bir stopcock takın. 3 yönlü stopcock'a 15 G Luer saplama adaptörü takın. Boruyu 15 G Luer saplama adaptörüne takın.</li>
		<li>Stopcock'un yan portunun yanını düzensiz bir evrensel kilit kapağı ile kapatın. Toplam iki kurulum için yineleyin. Bir şırınnayı CH1 ICP, diğer şırındıcıyı CH2 Gİb olarak etiketle.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. İnsan tüm göz küresinin hazırlanması
NOT: Tüm gözler alınırsa, ön segmenti gözün arka kısmından ayırmak için aşağıdaki prosedürü izleyin. Gözler ikiye bölünmüş olarak alınırsa, 4.4.
<ol><li>Tüm bir gözü 2 dakika boyunca povidone-iyot çözeltisine yerleştirin.</li>
	<li>Povidon-iyotunu durulamak için gözü steril fosfat tamponlu çözeltide (PBS) durulayın. 2 kez tekrarlayın.</li>
	<li>Apartma ve makas kullanarak adnexa'yı tüm göz küresinden çıkarın. Gözün ön ve arka bölümlerini ayırmak için ekvatorda gözü ikiye ayırın.</li>
	<li>Optik sinir kılımını çıkarın. Vitreus mizahını arka segmentten çıkarın.</li>
	<li>Gİb (alt) odasının yuvarlak kubbesine iyi bir uyum sağlamak için gerekirse arka segmentten ek sklera kırpın. Forseps kullanarak, retinanın segmentin arka kısmına eşit olarak yayıldığından emin olun.</li>
	<li>Gİb (alt) oda yapısı<ol>
<li>İnsan arka segmentini, optik sinir üstte olacak şekilde yuvarlak kubbenin üzerindeki TAS'ın Gİb (alt) odasına yerleştirin.</li>
		<li>Epoksi reçine O-halkasını kullanarak arka segmenti dört vida ile kapatın ve sıkı bir sızdırmazlık sağlayın.</li>
		<li>Boruyu Gİb (alt) haznesinin IN ve OUT bağlantı noktalarına yerleştirin. Orta içeren borulu Gİb giriş şırınnası IN portuna, boş Gİb çıkış şırınnası ise borulu outflow şırınnası OUT portuna yerleştirilir.</li>
		<li>Perfüzyon ortamını giriş noktasına yavaşça demlenerek arka göz kabını doldurmak için itme/çekme yöntemini kullanın, aynı zamanda perfüzyon ortamını çıkış şırıncığından yavaşça çekerek hatlardan hava kabarcıklarını çıkarın. Hem IN hem de OUT tüpleri hava kabarcıkları boşluğuna girdikten sonra ortam infüze etmeyi bırakın.</li>
		<li>Stopcock'ları kapalı konuma kilitleyin. 30 mL şırınnayı IOP IN port filtre tertibatından çıkarın ve toplam 30 mL orta ile yeniden doldurun. 30 mL şırınnayı filtre tertibatına değiştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
ICP (üst) oda kurulumu
	<ol>
<li>ICP (üst) haznesini/kapağı arka segmentin arkasına yerleştirin. Optik sinirin üst bölmede olduğundan emin olun. Üst hazneyi dört vida ile kapatın.</li>
		<li>Boruyu ICP (üst) haznesinin IN ve OUT bağlantı noktalarına yerleştirin. Orta içeren borulu ICP giriş şırınnası IN portuna, boş ICP çıkış şırınnası ise out portuna yerleştirilir.</li>
		<li>ICP haznesini doldurmak ve itme/çekme yöntemini kullanarak hava kabarcıklarını hatlardan çıkarmak için ortamı IN bağlantı noktasına hafifçe ve yavaşça demleyin. ICP odasının yanı sıra hem IN hem de OUT boruları hava kabarcıkları geçersiz olduğunda orta demlemeyi durdurun.</li>
		<li>Stopcock'ları kapalı konuma kilitleyin. 30 mL şırınnayı bağlantı noktası filtre tertibatında ICP'den çıkarın ve toplam 30 mL orta ile yeniden doldurun. 30 mL şırınnayı filtre tertibatına değiştirin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Veri kayıt sistemi kurulumu
NOT: Veri kayıt sistemi 8 kanallı bir güç kaynağı, çok kanallı köprü amplifikatörü, hidrostatik basınç dönüştürücüleri ve veri toplama yazılımına sahip bir bilgisayardan oluşur (bkz. Malzeme Tablosu). Aşağıda sistemin nasıl ayarlandırılacağı ve kalibreılacağı açıklanmaktadır.
<ol><li>Güç kablosunu 8 kanallı güç kaynağının arkasına bağlayın ve bir pil yedekleme cihazına takın.</li>
	<li>USB kablosunu 8 kanallı güç kaynağından bilgisayarın arkasına bağlayın.</li>
	<li>Birlikte verilen I2C kablosunu kullanarak 8 kanallı güç kaynağını çok kanallı köprü amplifikatörüne bağlayın.</li>
	<li>Bayonet Neill-Concelman (BNC) kablolarını 8 kanallı güç kaynağının önündeki kanal girişlerine ve kabloların ucunun ucuna çok kanallı amplifikatörün arkadaki ilgili kanallara bağlayın.</li>
	<li>Dönüştürücü kablolarını çok kanallı amplifikatörün önüne bağlayın.</li>
	<li>Veri toplama yazılımını bilgisayara yükleyin.<ol>
<li>Veri alma yazılımı kurulum yükleyicisini sağlanan yazılım CD'sinden çalıştırın.</li>
		<li>Bilgisayar ekranındaki yönergeleri izleyin.</li>
		<li>Yükleme tamamlandığında Son'u seçin.</li>
	</ol></li>
	<li>8 kanallı güç kaynağını açın.</li>
	<li>Bilgisayarı açın ve veri toplama yazılımını başlatın.<ol>
<li>Dosya | Seç Yeni.
</li>
		<li>Kur | Seç Kanal Ayarları. Üç kanal seçin (ekranın sol alt kısmı). Kanal Başlığı sütununda kanalları aşağıdaki gibi yeniden adlandırın: CH1 ICP; CH2 Gİb; CH3 TLPG (IOP-ICP).</li>
		<li>Tüm kanallarda Aralık için 2 mV seçin. Hesaplama sütununda 1 ve 2 numaralı kanallar için Hesaplama Yok'u seçin.</li>
		<li>Hesaplama sütununda Kanal 3 için Aritmetik'i seçin. Formül bölümünde: Kanalları/CH2'yi seçin; Aritmetik "-" seçeneğini belirleyin; Kanalları/CH1'i seçin. Çıktı bölümünde mmHg'yi seçin. Tamam'ı seçin. Yeniden Tamam'ı seçin.</li>
	</ol></li>
	<li>Hidrostatik basınç dönüştürücülerini kurun ve kalibre edin. NOT: Hidrostatik basınç dönüştürücüleri deneylerden önce aşağıdaki yöntem kullanılarak kalibre edilmelidir.<ol>
<li>Hidrostatik basınç dönüştürücülerini çok kanallı köprü amplifikatörüne bağlı dönüştürücü hatlarına bağlayın.</li>
		<li>CH1 (ICP) basınç dönüştürücüsün yan bağlantı noktasına hava dolu 30 mL şırınna takın. Sfigmomanometreyi CH1 (ICP) basınç dönüştürücüsunun altına takın.</li>
		<li>Grafikte, veri toplama yazılımının sayfasını görüntüleyin, örnekleme süresinin yanındaki oku sol tıklatarak örnekleme hızını ayarlayın ve 100'ü seçin. Ardından sayfanın CH1 (ICP) alanını sağ tıklatın.</li>
		<li>Köprü Amplifiktörü'nü seçin. Şebeke Filtresi'ni seçin. Sıfır'ı seçin ve basınç dönüştürücüslerini hareket ettirmemeye dikkat ederek sistemin sıfıra inmesini bekleyin.</li>
		<li>Basınç dönüştürücüslerinin beyaz sekmelerini sıkıştırın ve sfigmomanometrede 40 mmHg elde edilene kadar havayı dönüştürücüden geçirin. Beyaz sekmeleri bırakın ve şırınnak ve sfigmomanometreyi çıkarın.</li>
		<li>Birim Dönüştürme sayfasında 'eksi (-)' işaretini seçin. 40 mmHg'yi göstermek için en yüksek platoyu vurgulayın. Nokta 1 için Ok'a tıklayın ve 40 girin.</li>
		<li>0 mmHg'yi belirtmek için en düşük platoyu vurgulayın. Nokta 2 için Ok'a tıklayın ve 0 girin. Birimler için mmHg'yi seçin. Tamam'ı seçin.</li>
		<li>Tamam'ı seçin (Köprü Amp sayfası). En yüksek plato için 100 mmHg ve en düşük plato için 0 kullanarak CH2 (Gİb) için 9,1–9,7 adımlarını yineleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>TAS/posterior segment birimini veri toplama sistemine bağlayın.<ol>
<li>TAS/posterior segment ünitesini bir inkübatöre yerleştirin (%37 °C, %5 CO2). ICP boruyu OUT bağlantı noktasından CH1 (ICP) basınç dönüştürücüse takın.</li>
		<li>Gİb borularını OUT bağlantı noktasından CH2 (Gİb) basınç dönüştürücüse takın.</li>
		<li>Şırınd kurulumlarını (ICP ve Gİb) IN bağlantı noktalarından halka standına orta ile takın.</li>
		<li>Grafik görünümü sayfasında Örneklemesi Başlat'ı seçin. Örnekleme süresinin yanındaki oku sol tıklatarak örnekleme hızını ayarlayın ve Yavaş ve 1 dk'yı seçin.</li>
		<li>ICP ve Gİb basınçlarını protokol gereksinimlerine göre düzenlemek için halka standındaki şırınnaları yukarı veya aşağı ayarlayın.</li>
		<li>İtme ve çekme yöntemiyle her 48-72 saat içinde sistemdeki ortamın sistemik ikmalini gerçekleştirin.</li>
	</ol></li>
</ol>6. Veri alma ve analiz
<ol><li>Veri toplama yazılımında veri dosyasını açın.</li>
	<li>Veri Defteri bölümünde, Veri Defterine Çoklu Ekle simgesine tıklayın. Yeni bir pencere görünecektir.<ol>
<li>Kullanarak Bul bölümünde, açılan menüden Zaman'ı seçin.</li>
		<li>Seç bölümünde açılır menülerden her 1 saatte bir 1 saat seçin.</li>
		<li>Adım Adım bölümünde Tüm Dosya'yı seçin ve Ekle'yi tıklatın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Veri Defteri bölümünde Veri Defteri Görünümü simgesine tıklayın. Tüm verileri vurgulayın ve elektronik tabloya kopyala/yapıştır.</li>
	<li>Her 24 saat için Gİb, ICP ve TLPG için ortalama ve standart sapmaları hesaplayın. Elektronik tablo programındaki ve grafiğindeki özet tablo seçeneğini kullanarak verileri harmanlama.</li>
</ol>7. İmmünohistokimya ve hematoksilin ve arka segmentlerin eozin lekesi
<ol><li>TAS modelinden çeşitli zaman noktalarını takip eden arka göz segmentlerini çıkarın ve paraffinizlemeden önce formalin olarak düzeltin.</li>
	<li>Sagittal doku düzlemleri üretmek için gözleri bölümle.</li>
	<li>Parafin gömülü segmentleri %100 ksilen, %95 etanol, %50 etanol çözeltisi ile deparaffinize edin.</li>
	<li>Slaytları PBS ile 10 dakika yıkayın ve oda sıcaklığında 1 saat boyunca bir engelleme tamponu ile engelleyin.</li>
	<li>Birincil antikorları olan etiket bölümleri: anti-kollajen IV (Hücre Dışı Matris (ECM) işaretleyici, NB120-6586, 1:100) ve anti-laminin (ECM işaretleyici, NB300-144, 1:100, anti-RBPMS (RGC işaretleyici), GTX118619, 1:50).</li>
	<li>Alexa Fluor ikincil antikorlarını kullanarak birincil antikorları tespit edin (Alexa Fluor 488 keçi anti-tavşan, A11008, 1:500).</li>
	<li>DAPI solmaya karşı çözüm kullanarak hücre çekirdeğine karşı koyma.</li>
	<li>Floresan mikroskop kullanarak 4x ve 10x objektif lenslerle lekeli bölümlerin ve faz görüntülerinin görüntülerini yakalayın (bkz. Malzeme Tablosu).</li>
	<li>Hematoksilin ve eozin (H&E) boyama için, bölümleri otomatik bir boyama sisteminde işleyin (bkz. Malzeme Tablosu) %100, ksilen %95 etanol, %50 etanol çözeltisi ve H&E ile leke kullanarak deparaffinizasyon için.</li>
	<li>Parlak alan ışık kaynağına sahip bir mikroskop kullanarak 4x ve 10x objektif lenslerle görüntü yakalayın.</li>
</ol>

Makalenin yazarlarının açıklayacak potansiyel bir çıkar çatışması yoktur.

İnsan ölüm sonrası dokuları, insan nörodejeneratif hastalıklarının incelenmesi için özellikle değerli bir kaynaktır, çünkü hayvan modellerinde geliştirilen potansiyel ilaçların tanımlanmasının insanlara çevrilebilir olması gerekir47. İnsan Gİb yüksekliğinin etkileri iyi belirlenmiştir, ancak anormal ONH translaminer basınç değişiklikleri üzerinde minimum araştırma gerçekleşmiştir. Birden fazla hayvan modeli ve insan ONH'nin sonlu modellemesi mevcut olsa da, t...

Son anketlerdeki küresel tahminler, 39 milyon'ı görme engelli olmak üzere 285 milyon kişinin görme bozukluğuyla yaşadığını gösteriyor1. 2010 yılında, Dünya Sağlık Örgütü, listelenen dokuz önde gelen körlük nedenlerinden üçünün gözün arka segmentinde meydana geldiğini belgeledi1. Arka segment göz hastalıkları retina, koroid ve optik siniri içerir2. Retina ve optik sinir beynin merkezi sinir sistemi (CNS) uzantılarıdır. Retina ganglion hücresi (RGC) aksonları, optik siniri oluşturmak için optik sinir başlığından (ONH) gözden çıktıkları için hasara karşı savunmasızdır3. ONH, lamina cribrosa (LC)4 adı verilen bağ dokusu ışınlarının 3D mesh çalışması nedeniyle RGC aksonları için en savunmasız nokta olmaya devam etmektedir. ONH, glokomda RGC aksonlarına hakaretin ilk yeridir5,6,7 ve ONH içindeki gen ekspresyon değişiklikleri oküler hipertansiyon ve glokom modellerinde çalışılmıştır8,9,10. RGC aksonları, göz içi basıncı (Gİb) olarak adlandırılan göz içi bölmesi arasındaki basınç farkları ve intrakraniyal basınç (ICP)11 adı verilen dış perioptik subaraknoid alanı içindeki basınç farkları nedeniyle ONH'de hassastır. LC bölgesi, 10-21 mmHg ve ICP arasında değişen Gİb ile normal basınç farklarını koruyarak her iki alanı da ayırır ve 5-15 mmHg12 arasında değişen bir değere sahiptir. İki oda arasındaki lamina arasındaki basınç farkına translaminer basınç gradyanı (TLPG)13 denir. Glokomun önemli bir risk faktörü yüksek IOP14'tür.
Artan Gİb, laminar bölge içindeki ve genelindeki gerginliği artırır6,15,16. İnsanlarda ve hayvan modellerinde deneysel gözlemler ONH'yi aksonal hasarın ilk bölgesi olarak göstermektedir17,18. ONH'de glaukom hasarına neden olan Gİb ile ilgili stres ve suşun biyomekanik paradigması da glokomun patofizyolojisini etkiler19,20,21. İnsanlarda basınç kaynaklı değişiklikler RGC axons22'ye mekanik olarak zarar verse de, lamina içinde kollajen plakaları olmayan kemirgenler de glokom geliştirebilir7,23. Ayrıca, yüksek Gİb primer açık açılı glokom hastalarında en belirgin risk faktörü olmaya devam ederken, normal gerilim glokom hastalarında yüksek Gİb olmasa bile glaukom optik nöropati gelişir. Ayrıca, optik sinir hasarı göstermeyen oküler hipertansif hastaların bir alt kümesi de vardır. Ayrıca beyin omurilik sıvı basıncının (CSFp) glokom patogenezinde rol oynayabileceği ileri sürülmektedir. Kanıtlar, GLOKOM hastalarında ICP'nin normal bireylere göre ~5 mmHg'ye düşürüldüğü ve böylece translaminer basıncın artmasına neden olduğu ve hastalıkta önemli bir rol oynadığı göstermektedir24,25. Daha önce, bir köpek modelinde, Gİb ve CSFp değişikliklerini kontrol ederek, optik diskin büyük yer değiştirmeleri olabileceği gösterilmiştir26. Porcine gözlerde CSFp'nin yükseltilmesi, LC bölgesi ve retrolaminer sinir dokusunda da artmış ana zorlanma göstermiştir. RGC'ler ve LC bölgesi üzerindeki artan yük, aksonal taşıma tıkanıklığı ve RGC'lerin kaybına katkıda bulunur27. RGC'lerin progresif dejenerasyonu trofik destek kaybı28,29, inflamatuar süreçlerin/immün regülasyonun uyarılması30,31 ve apoptotik efektörler29,32,33,34,35 ile ilişkilendirilmiştir. Ek olarak, aksonal yaralanma (Şekil 3) RPC'ler üzerinde zararlı etkilere neden olur ve rejeneratif başarısızlığı tetikler36,37,38,39. Gİb'in etkileri iyi çalışılmış olsa da anormal translaminer basınç değişimleri üzerinde minimal araştırma gerçeklenmiştir. Glokom için çoğu tedavi Gİb stabilize odaklanır. Bununla birlikte, Gİb'in düşürülmesi hastalığın ilerlemesini yavaşlatsa da, görme alanı kaybını tersine çevirmez ve RGC'lerin tam kaybını önlemez. Glokomda basınca bağlı nörodejeneratif değişiklikleri anlamak RGC ölümünü önlemek için çok önemli olacaktır.
Mevcut kanıtlar, travmatik veya nörodejeneratif görme bozukluklarından muzdarip hastalarda çeşitli mekanik, biyolojik veya fizyolojik değişikliklere bağlı translaminer basınç modülasyonlarının önemli görme kaybına neden olabileceğini göstermektedir. Şu anda, ex vivo insan ONH içinde glaukomöz biyomekanik hasarın incelenmesine izin verebilecek gerçek bir preklinik insan posterior segment modeli yoktur. Gözün arka segmentinin gözlemlenmesi ve tedavisi oftalmolojide büyük bir zorluktur27. Yüksek eliminasyon oranları, kan-retina bariyeri ve potansiyel immünolojik yanıtlar da dahil olmak üzere arka gözü hedeflemek için fiziksel ve biyolojik engeller vardır40. Yeni ilaç hedefleri için çoğu etkinlik ve güvenlik testi in vitro hücresel ve in vivo hayvan modelleri kullanılarak gerçekleştirilir41. Oküler anatomi karmaşıktır ve in vitro çalışmalar doku modeli sistemlerinin sunduğu anatomik ve fizyolojik engelleri doğru bir şekilde taklit etmez. Hayvan modelleri farmakokinetik çalışmalar için bir gereklilik olsa da, insan arka gözünün oküler fizyolojisi retinanın hücresel anatomisi, vaskülat ve ONH41,42 dahil olmak üzere çeşitli hayvan türleri arasında değişebilir.
Canlı hayvanların kullanımı yoğun ve ayrıntılı etik düzenlemeler, yüksek finansal bağlılık ve etkili tekrarlanabilirlik gerektirir43. Son zamanlarda, deneysel araştırmalarda hayvanların etik kullanımı için birden fazla kılavuz ortaya çıktı44,45,46. Hayvan testlerine bir alternatif, hastalık patogenezini araştırmak için ex vivo insan gözü modellerinin kullanılması ve ONH hasarını korumak için ilaçların potansiyel analizidir. İnsan ölüm sonrası dokusu, özellikle insan nörodejeneratif hastalıkları durumunda insan hastalığı paradigmalarını incelemek için değerli bir kaynaktır, çünkü hayvan modellerinde geliştirilen potansiyel ilaçların tanımlanması insanlara çevrilebilir olma ihtiyacını gerektirir47. Ex vivo insan donör dokusu, insan bozukluklarının incelenmesi için yoğun olarak kullanılmıştır47,48,49 ve insan ön segment perfüzyon organ kültürü sistemleri daha önce yükseltilmiş Gİb50,51,52 patofizyolojisini incelemek için benzersiz bir ex vivo modeli sağlamıştır.
İnsan gözünde Gİb ve ICP ile ilgili translaminer basıncı incelemek için, insan donör gözlerinden arka segmentleri kullanarak Gİb ve ICP'yi bağımsız olarak düzenleyebilen iki odalı bir translaminer otonom sistem (TAS) tasarladık ve geliştirdik. Translaminer basıncı inceleyen ve TLPG'nin ONH üzerindeki biyomekanik etkilerinden yararlanan ilk ex vivo insan modelidir.
Bu ex vivo insan TAS modeli keşfetmek ve IOP veya ICP kronik yükseklik nedeniyle meydana gelen hücresel ve fonksiyonel modifikasyonları sınıflandırmak için kullanılabilir. Bu raporda, TAS insan posterior segment modelinin parçalanması, kurulması ve izlenmesinin adım adım protokolünü detaylandırıyoruz. Protokol, diğer araştırmacıların biyomekanik hastalık patogenezini incelemek için bu yeni eks vivo basınçlı insan posterior segment modelini etkili bir şekilde yeniden üretmelerine izin verecektir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>#122, 1-1/8&#34; Inside x 1-5/16&#34; Outside Diam, Viton O-Ring, 3/32&#34; Thick, 
			755 Durometer 50 Pack</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07DRGPPZJ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>114 Buna-N O-Ring, 70A Durometer, Black, 5/8&#34; ID, 13/16&#34; OD, 3/32&#34; Width (Pack of 100)</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B000FMYRHK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 mL Syringes without Needle</td>
			<td>Vitality Medical</td>
			<td>302832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Way Stopcock, 2 Female Luer Locks, Swivel Male Luer Lock, Vented Cap</td>
			<td>QOSINA</td>
			<td>2C6201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-40 X 1/2 PH PAN MS SS/CHROME &#38; appropriate sized phillips screwdriver</td>
			<td>Brikksen Stainless Steel Fastners</td>
			<td>PPMSSSCH4C.5</td>
			<td>&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANPROLENE 16 LARGE AMPULE</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9085343</td>
			<td>&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Purdue</td>
			<td>PUR1815001EACH</td>
			<td>&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 100 x 20mm tissue-culture treated culture dishes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS430167-100EA</td>
			<td>&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;L-glutamine Solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MT25005CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Covidien 3033 Curity Gauze Sponge, 4&#34; x 4&#34;, 12-Ply, Sterile, 1200/CS</td>
			<td>Med Plus Medical Supply</td>
			<td>COV-3033-CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dressing Forceps Delicate Curved (serrated)</td>
			<td>Katena</td>
			<td>K5-4010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 - Fine Forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye Scissors Standard Curved</td>
			<td>Katena</td>
			<td>K4-7410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 150 x 15mm Plain Sterile Disposable Petri Dishes</td>
			<td>Capitol Scientific</td>
			<td>351058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand 4 oz. Specimen Containers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>16-320-730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Instant Sealing Sterilization Pouches</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>01-812-54</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Instant Sealing Sterilization Pouches</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>01-812-55</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Instant Sealing Sterilization Pouches</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>01-812-58</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone Dulbecco&#39;s Modified Eagles Medium</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SH3024302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone Penicillin Streptomycin 100X Solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophilic Filter with Female Luer Lock Inlet, Male Luer Slip Outlet, Blue and Clear</td>
			<td>Qosina</td>
			<td>28217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrostatic pressure transducers, DELTRAN &#174; II, Catalog # DPT-200 with a 3CC/HR flow rate</td>
			<td>AD instruments</td>
			<td>DPT-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JG15-0.5HPX 15 Gauge 0.5&#34; NT Premium Series Dispensing Tip 50/Box</td>
			<td>Jenson Global</td>
			<td>JG15-0.5HPX 15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Keyence B2&#8208;X710 microscope</td>
			<td>Keyence</td>
			<td>B2-X710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LabChart 8</td>
			<td>AD instruments</td>
			<td>LabChart 8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica ST5020 Multi-stainer</td>
			<td>Leica</td>
			<td>ST5020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Vented Universal Luer Lock Cap, White</td>
			<td>QOSINA</td>
			<td>65811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Octal Bridge Amp (Model # FE228)</td>
			<td>AD instruments</td>
			<td>FE228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pharmco Products ETHYL ALCOHOL, 200 PROOF</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1675398</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Solution (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerLab 8/35 (Model # PL3508)</td>
			<td>AD instruments</td>
			<td>PL3508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant with DAPI</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>P36935</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Push-to-Connect Tube Fitting for Air and Water&#160;Straight Adapter, 1/8&#34; Tube OD x 1/8 NPT Male</td>
			<td>McMAster-Carr</td>
			<td>7880T113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Push-to-Connect Tube Fitting with Universal Thread&#160;for Air and Water, Adapter, 1/8&#34; Tube OD x 1/8 Pipe</td>
			<td>McMAster-Carr</td>
			<td>51235K101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saint-Gobain Tygon S3 E-3603 Flexible Tubing 500 ft.</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-171-268</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superblock T20</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>PI37536</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors - Sharp-Blunt</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14001-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Forceps Delicate 1x2 Teeth Curved</td>
			<td>Katena</td>
			<td>K5-4110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Translaminar Autonomous System (TAS)</td>
			<td>University of North Texas Health Science Center</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USA Size 030 O-ring Buna-N, B1000, 70 Durometer, Black, Buna-N 
			(NBR, Nitrile, Buna)</td>
			<td>Marco Rubber &#38; Plastics</td>
			<td>B1000-030</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

translaminar autonomous system model for the modulation of intraocular and intracranial pressure in human donor posterior segments

Glokom patogenez ile ilgili çeşitli patojenik paradigmaları tanımlayabilen intrakraniyal basınç (ICP) ve göz içi basıncı (Gİb) kullanarak hastalık etiyolojisi ex vivo'yu hedef alabilen yeni bir preklinik insan modeline karşılanmamış bir ihtiyaç vardır. Ex vivo insan ön segment perfüzyon organ kültürü modelleri daha önce glokom patogenezinin keşfi ve terapötiklerin test edilmesi için etkili teknolojiler olarak başarıyla kullanılmıştır ve uygulanmıştır. Ex vivo insan organ sistemleri üzerinde yapılan preklinik ilaç taraması ve araştırmaları klinik araştırmalara daha fazla çevrilebilir. Bu makalede translaminar otonom sistem (TAS) adı verilen yeni bir ex vivo insan translaminer basınç modelinin üretimi ve çalışması ayrıntılı olarak açıklanmaktadır. TAS modeli, insan donör arka segmentlerini kullanarak ICP ve Gİb'i bağımsız olarak düzenleyebilir. Model, patogenezin preklinik bir şekilde incelenmesine izin verir. Oftalmik araştırmalarda canlı hayvanların kullanımını azaltabilir. In vitro deneysel modellerin aksine, optik sinir kafası (ONH) doku yapısı, karmaşıklığı ve bütünlüğü ex vivo TAS modeli içinde de korunabilir.

Translaminer otonom sistemin tasarımı ve oluşturulması Translaminer basınç diferansiyel, glokom da dahil olmak üzere çeşitli hastalıkların patogenezinde potansiyel bir anahtar mekanizmadır. Açıklanan modelin kullanım alanları arasında glokom (yüksek Gİb, belki de azalmış ICP), travmatik beyin hasarı (yüksek ICP) ve mikro yerçekimi ile ilişkili görme bozukluğuna (yükseltilmiş ICP, yükseltilmiş Gİb) uzun süreli maruz kalma çalışması yer almaktadır, ancak bunlarla s?...

Watch this Scientific Journal Video about Translaminar Autonomous System Model for the Modulation of Intraocular and Intracranial Pressure in Human Donor Posterior Segments at JoVE.com

Translaminar Autonomous System Model for the Modulation of Intraocular and Intracranial Pressure in Human Donor Posterior Segments

Translaminer otonom sistemin kullanımını açıklar ve detaylandırırız. Bu sistem, glaukomöz optik nöropatinin özelliklerini taklit eden translaminer basınç gradyanı oluşturmak için segmentin içindeki basıncı (göz içi) ve optik siniri (intrakraniyal) çevreleyen basıncı bağımsız olarak düzenlemek için insan arka segmentini kullanır.

İnsan Donör Arka Segmentlerinde Göz İçi ve İntrakraniyal Basıncın Modülasyonu için Translaminer Otonom Sistem Modeli

There is a current unmet need for a new preclinical human model that can target disease etiology ex vivo using intracranial pressure (ICP) and intraocular ...

translaminar-autonomous-system-model-for-modulation-intraocular

Research

JoVE Journal

Neuroscience

2.9K Görüntüleme.  University of North Texas Health Science Center. Translaminer otonom sistemin kullanımını açıklar ve detaylandırırız. Bu sistem, glaukomöz optik nöropatinin özelliklerini taklit eden translaminer basınç gradyanı oluşturmak için segmentin içindeki basıncı (göz içi) ve optik siniri (intrakraniyal) çevreleyen basıncı bağımsız olarak düzenlemek için insan arka segmentini kullanır.

Video: Translaminar Autonomous System Model for the Modulation of Intraocular and Intracranial Pressure in Human Donor Posterior Segments

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of the olfactory epithelium continuously give rise to new sensory neurons that extend their axons into the olfactory bulb, where they face the challenge to integrate into existing circuitry. Because of this particular feature, the olfactory system represents a unique opportunity to monitor axonal wiring and guidance, and to investigate synapse formation. Here we describe a procedure for in vivo labeling of sensory neurons and subsequent visualization of axons in the olfactory system of larvae of the amphibian Xenopus laevis. To stain sensory neurons in the olfactory organ we adopt the electroporation technique. In vivo electroporation is an established technique for delivering fluorophore-coupled dextrans or other macromolecules into living cells. Stained sensory neurons and their axonal processes can then be monitored in the living animal either using confocal laser-scanning or multiphoton microscopy. By reducing the number of labeled cells to few or single cells per animal, single axons can be tracked into the olfactory bulb and their morphological changes can be monitored over weeks by conducting series of in vivo time lapse imaging experiments. While the described protocol exemplifies the labeling and monitoring of olfactory sensory neurons, it can also be adopted to other cell types within the olfactory and other systems.

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

We describe a protocol for in vivo labeling of olfactory sensory neurons by electroporation and subsequent confocal laser-scanning or multiphoton microscopy to visualize neuronal morphology and its development over time.

Bir Model Olarak Koku Sistemi Akson Büyüme Modelleri ve Morfoloji Eğitim için<em&gt; In Vivo</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Nörobilim

Enrichment of Bruch's Membrane from Human Donor Eyes

Age-related macular degeneration (AMD) is a leading cause of visual impairment in the developed world. The disease manifests itself by the destruction of the center&#160;of the retina, called the macula, resulting in the loss of central vision. Early AMD is characterised by the presence of small, yellowish lesions called soft drusen that can progress onto late AMD such as geographic atrophy (dry AMD) or neovascularisation (wet AMD). Although the clinical changes are well described, and the understanding of genetic influences on conferring AMD risk are getting ever more detailed, one area lacking major progress is an understanding of the biochemical consequences of genetic risk. This is partly due to difficulties in understanding the biochemistry of Bruch&#8217;s membrane, a very thin extracellular matrix that acts as a biological filter of material from the blood supply and a scaffold on which the retinal pigment epithelial (RPE) cell monolayer resides. Drusen form within Bruch&#8217;s membrane and their presence disrupts nutrient flow to the RPE cells. Only by investigating the protein composition of Bruch&#8217;s membrane, and indeed how other proteins interact with it, can researchers hope to unravel the biochemical mechanisms underpinning drusen formation, development of AMD and subsequent vision loss. This paper details methodologies for enriching either whole Bruch&#8217;s membrane, or just from the macula region, so that it can be used for downstream biochemical analysis, and provide examples of how this is already changing the understanding of Bruch&#8217;s membrane biochemistry.

Enrichment of Bruch&#039;s Membrane from Human Donor Eyes

Identifying proteins specifically associated with Bruch&#8217;s membrane in human eyes is an important step in understanding the biochemical mechanisms behind eye diseases such as age-related macular degeneration. This protocol describes how to enrich this sheet of extracellular matrix for down-stream biochemical analysis.

İnsan Donör Gözler gelen Bruch Membran zenginleştirilmesi

Age-related macular degeneration (AMD) is a leading cause of visual impairment in the developed world. The disease manifests itself by the destruction of ...

Autonomous and Rechargeable Microneurostimulator Endoscopically Implantable into the Submucosa

Gastric dysmotility can be a sign of common diseases such as longstanding diabetes mellitus. It is known that the application of high-frequency low-energetic stimulation can help to effectively moderate and alleviate the symptoms of gastric dysmotility. The goal of the research was the development of a miniature, endoscopically implantable device to a submucosal pocket. The implantable device is a fully customized electronic package which was specifically designed for the purpose of experiments in the submucosa. The device is equipped with a lithium-ion battery which can be recharged wirelessly by receiving an incident magnetic field from the charging/transmitting coil. The uplink communication is achieved in a MedRadio band at 432 MHz. The device was endoscopically inserted into the submucosal pocket of a live domestic pig used as an in vivo model, specifically in the stomach antrum. The experiment confirmed that the designed device can be implanted into the submucosa and is capable of bidirectional communication. The device can perform bipolar stimulation of muscle tissue.

The application of high-frequency low-energetic stimulation can alleviate the symptoms of gastric dysmotility. In this research, a miniature, endoscopically implantable and wirelessly rechargeable device which is implanted into a submucosal pocket is presented. Successful both-way communication and stimulation control were achieved during an experiment on live pig.

Özerk ve şarj edilebilir Microneurostimulator endoskopik submukoza implante

Gastric dysmotility can be a sign of common diseases such as longstanding diabetes mellitus. It is known that the application of high-frequency ...

Analyzing Neural Activity and Connectivity Using Intracranial EEG Data with SPM Software

Measuring neural activity and connectivity associated with cognitive functions at high spatial and temporal resolutions is an important goal in cognitive neuroscience. Intracranial electroencephalography (EEG) can directly record electrical neural activity and has the unique potential to accomplish this goal. Traditionally, averaging analysis has been applied to analyze intracranial EEG data; however, several new techniques are available for depicting neural activity and intra- and inter-regional connectivity. Here, we introduce two analytical protocols we recently applied to analyze intracranial EEG data using the Statistical Parametric Mapping (SPM) software: time-frequency SPM analysis for neural activity and dynamic causal modeling of induced responses for intra- and inter-regional connectivity. We report our analysis of intracranial EEG data during the observation of faces as representative results. The results revealed that the inferior occipital gyrus (IOG) showed gamma-band activity at very early stages (110 ms) in response to faces, and both the IOG and amygdala showed rapid intra- and inter-regional connectivity using various types of oscillations. These analytical protocols have the potential to identify the neural mechanisms underlying cognitive functions with high spatial and temporal profiles.

We present two analytical protocols that can be used to analyze intracranial electroencephalography data using the Statistical Parametric Mapping (SPM) software: time-frequency statistical parametric mapping analysis for neural activity, and dynamic causal modeling of induced responses for intra- and inter-regional connectivity.

Sinirsel aktivite ve bağlanırlığı İntrakraniyal EEG veri SPM yazılım programıyla analiz

Measuring neural activity and connectivity associated with cognitive functions at high spatial and temporal resolutions is an important goal in cognitive ...

How to Obtain Reliable Visual Event-related Potentials in Newborns

The present study discusses the characteristics of visual event-related potentials (VEPs) and outlines methodological steps for obtaining reliable measurements in newborns. Obtaining high-quality, reliable VEPs is crucial for the early detection of abnormal development of the central nervous system in at-risk newborns, and for implementing successful early interventions. Recommendations are based on a previous study which showed that when post-conceptional age, polysomnography-identified sleep stages, and light-emitting diodes (LEDs) googles as the luminous source are controlled, no more than 4 repetitions of VEP averages are required to obtain replicable recordings, variability decreases, and reliable VEPs can be obtained. By controlling for these sources of variability and using statistical analyses, we were able to clearly and reliably identify the amplitude and latency of three main components (NII, PII and NIII) present in 100% of newborns (n = 20) during active sleep. Recording VEPs during awake states, quiet sleep and transitional sleep is not recommended because VEP morphology may differ significantly from one average to the next, leading to the risk of misleading clinical prognoses. Moreover, it is easier to obtain VEPs during active sleep because this state can be clearly and reliably identified at this stage of development, sleep cycles are short enough to allow measurements to be taken in a reasonable time, and the method does not require new o expensive equipment.

Several important points for obtaining high-quality reliable visual evoked potentials (VEPs) in newborns while minimizing variability and the risk of misleading prognoses are presented.

Yenidoğanlarda Görsel Etkinlikle İlgili Güvenilir Potansiyeller Nasıl Elde Edilene

The present study discusses the characteristics of visual event-related potentials (VEPs) and outlines methodological steps for obtaining reliable ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of sciatic nerve injury rodent models. In this protocol, we describe a novel kinematic analysis method that uses a three-dimensional (3D) motion capture apparatus for functional evaluations using a rat sciatic nerve crush injury model. First, the rat is familiarized with treadmill walking. Markers are then attached to the designated bone landmarks and the rat is made to walk on the treadmill at the desired speed. Meanwhile, the posterior limb movements of the rat are recorded using four cameras. Depending on the software used, marker tracings are created using both automatic and manual modes and the desired data are produced after subtle adjustments. This method of kinematic analysis, which uses a 3D motion capture apparatus, offers numerous advantages, including superior precision and accuracy. Many more parameters can be investigated during the comprehensive functional evaluations. This method has several shortcomings that require consideration: The system is expensive, can be complicated to operate, and may produce data deviations due to skin shifting. Nevertheless, kinematic analysis using a 3D motion capture apparatus is useful for performing functional anterior and posterior limb evaluations. In the future, this method may become increasingly useful for generating accurate assessments of various traumas and diseases.

We introduce a kinematic analysis method that uses a three-dimensional motion capture apparatus containing four cameras and data processing software for performing functional evaluations during fundamental research involving rodent models.

Siyatik Sinir Ezilme Hasarının Sıçan Modelinde Fonksiyonel Değerlendirme için 3D Kinematik Analiz

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...

Simultaneous Application of Transcranial Direct Current Stimulation during Virtual Reality Exposure

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a form of non-invasive brain stimulation that changes the likelihood of neuronal firing through modulation of neural resting membranes. Compared to other techniques, tDCS is relatively safe, cost-effective, and can be administered while individuals are engaged in controlled, specific cognitive processes. This latter point is important as tDCS may predominantly affect intrinsically active neural regions. In an effort to test tDCS as a potential treatment for psychiatric illness, the protocol described here outlines a novel procedure that allows the simultaneous application of tDCS during exposure to trauma-related cues using virtual reality (tDCS+VR) for veterans with posttraumatic stress disorder (NCT03372460). In this double-blind protocol, participants are assigned to either receive 2 mA tDCS, or sham stimulation, for 25 minutes while passively watching three 8-minute standardized virtual reality drives through Iraq or Afghanistan, with virtual reality events increasing in intensity during each drive. Participants undergo six sessions of tDCS+VR over the course of 2-3 weeks, and psychophysiology (skin conductance reactivity) is measured throughout each session. This allows testing for within and between session changes in hyperarousal to virtual reality events and adjunctive effects of tDCS. Stimulation is delivered through a built-in rechargeable battery-driven tDCS device using a 1 (anode) x 1 (cathode) unilateral electrode set-up. Each electrode is placed in a 3 x 3 cm (current density 2.22 A/m2) reusable sponge pocket saturated with 0.9% normal saline. Sponges with electrodes are attached to the participant&#8217;s skull using a rubber headband with the electrodes placed such that they target regions within the ventromedial prefrontal cortex. The virtual reality headset is placed over the tDCS montage in such a way as to avoid electrode interference.

This manuscript outlines a novel protocol to allow the simultaneous application of transcranial direct current stimulation during exposure to warzone trauma-related cues using virtual reality for veterans with posttraumatic stress disorder.

Sanal Gerçekliğe Maruz Kalma Sırasında Transkraniyal Doğru Akım Stimülasyonunun Eşzamanlı Uygulaması

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a form of non-invasive brain stimulation that changes the likelihood of neuronal firing through ...

Activity of Posterior Lateral Line Afferent Neurons during Swimming in Zebrafish

Sensory systems gather cues essential for directing behavior, but animals must decipher what information is biologically relevant. Locomotion generates reafferent cues that animals must disentangle from relevant sensory cues of the surrounding environment. For example, when a fish swims, flow generated from body undulations is detected by the mechanoreceptive neuromasts, comprising hair cells, that compose the lateral line system. The hair cells then transmit fluid motion information from the sensor to the brain via the sensory afferent neurons. Concurrently, corollary discharge of the motor command is relayed to hair cells to prevent sensory overload. Accounting for the inhibitory effect of predictive motor signals during locomotion is, therefore, critical when evaluating the sensitivity of the lateral line system. We have developed an in vivo electrophysiological approach to simultaneously monitor posterior lateral line afferent neuron and ventral motor root activity in zebrafish larvae (4-7 days post fertilization) that can last for several hours. Extracellular recordings of afferent neurons are achieved using the loose patch clamp technique, which can detect activity from single or multiple neurons. Ventral root recordings are performed through the skin with glass electrodes to detect motor neuron activity. Our experimental protocol provides the potential to monitor endogenous or evoked changes in sensory input across motor behaviors in an intact, behaving vertebrate.

We describe a protocol to monitor changes in the afferent neuron activity during motor commands in a model vertebrate hair cell system.

Zebra Balıklarında Yüzme Sırasında Posterior Lateral Line Afferent Neurons'un Aktivitesi

Sensory systems gather cues essential for directing behavior, but animals must decipher what information is biologically relevant. Locomotion generates ...

Caenorhabditis elegans as a Model System for Discovering Bioactive Compounds Against Polyglutamine-Mediated Neurotoxicity

Age-related misfolding and aggregation of pathogenic proteins are responsible for several neurodegenerative diseases. For example, Huntington&#39;s disease (HD) is principally driven by a CAG nucleotide repeat that encodes an expanded glutamine tract in huntingtin protein. Thus, the inhibition of polyglutamine (polyQ) aggregation and, in particular, aggregation-associated neurotoxicity is a useful strategy for the prevention of HD and other polyQ-associated conditions. This paper introduces generalized experimental protocols to assess the neuroprotective capacity of test compounds against HD using established polyQ transgenic Caenorhabditis elegans models. The AM141 strain is chosen for the polyQ aggregation assay as an age-associated phenotype of discrete fluorescent aggregates can be easily observed in its body wall at the adult stage due to muscle-specific expression of polyQ::YFP fusion proteins. In contrast, the HA759 model with strong expression of polyQ-expanded tracts in ASH neurons is used to examine neuronal death and chemoavoidance behavior. To comprehensively evaluate the neuroprotective capacity of target compounds, the above test results are ultimately presented as a radar chart with profiling of multiple phenotypes in a manner of direct comparison and direct viewing.

Caenorhabditis elegans as a Model System for Discovering Bioactive Compounds Against Polyglutamine-Mediated Neurotoxicity

Here, we present a protocol to assess the neuroprotective activities of test compounds in Caenorhabditis elegans, including polyglutamine aggregation, neuronal death, and chemoavoidance behavior, as well as an exemplary integration of multiple phenotypes.

Poliglutamin aracılı nörotoksisiteye karşı biyoaktif bileşiklerin keşfedilmesi için bir model sistem olarak Caenorhabditis elegans

Age-related misfolding and aggregation of pathogenic proteins are responsible for several neurodegenerative diseases. For example, Huntington&#39;s ...

Intracranial Pressure Monitoring In Nontraumatic Intraventricular Hemorrhage Rodent Model

Survivors of intraventricular hemorrhage are often left with significant long-term memory impairment; thus, research utilizing intraventricular hemorrhage animal models is essential. In this study, we sought out ways to measure intracranial pressure, mean arterial pressure, and cerebral perfusion pressure during nontraumatic intraventricular hemorrhage in rats. The experimental design included three Sprague Dawley groups: sham, standard 200 &#181;l intraventricular hemorrhage, and vehicle control groups. By introducing an intraparenchymal fiberoptic pressure sensor, precise intracranial pressure measurements were obtained in all groups. Cerebral perfusion pressures were calculated with the knowledge of intracranial pressure and mean arterial pressure values. As expected, the intraventricular hemorrhage and vehicle control groups both experienced a rise in the intracranial pressure and subsequent decline in cerebral perfusion pressure during intraventricular injection of autologous blood and artificial cerebrospinal fluid, respectively. The addition of an intraparenchymal fiberoptic pressure sensor is beneficial in monitoring precise intracranial pressure changes.

Monitoring intracranial pressure in rodent&#160;models of nontraumatic intraventricular hemorrhage is not common in the current literature. Herein, we demonstrate a technique for measuring intracranial pressure, mean arterial pressure, and cerebral perfusion pressure during intraventricular hemorrhage in a rat&#160;animal model.

Nontravmatik İntraventriküler Kanama Kemirgen Modelinde İntrakraniyal Basınç İzleme

Survivors of intraventricular hemorrhage are often left with significant long-term memory impairment; thus, research utilizing intraventricular hemorrhage ...