Açık küre yaralanmaları tedavi edilmezse kalıcı görme kaybına yol açabilir. Bu ön segment organ kültürü modeli, hayvan testine ihtiyaç duyan bu yaralanmaların değerlendirilmesini sağlar. Bu protokol, açık küre yaralanmalarını ve terapötikleri izlemenin, bir organ kültürü platformuyla yaralanmayı üç veya daha fazla gün boyunca stabilize etmesine izin verir.
Prosedürü gösteren, Dr.Boice laboratuvarından bir araştırma teknisyeni olan Trent Pearson olacak. Başlamak için, cerrahi örtü ve brüt diseksiyon için gerekli aletleri döşeyin. Diseksiyon mikroskopunda gözleri görselleştirmek için biyogüvenlik kabinini kurun.
Bulaşık montajı için biyogüvenlik kabinini kurun. Biyogüvenlik kabininin içindeki açık küre yaralanma indüksiyon çalışma alanını kurun. Çapraz izleme mengenesini laboratuvar jakına, delinme platformunun önüne yerleştirin.
Ekstra orbital dokuları çıkardıktan ve gözleri antibiyotik antimycotic PBS ile yıkadıktan sonra, gözü nemlendirerek gözü antibiyotik antimykotik PBS ıslatılmış gazlı bez üzerine yerleştirin. Gözün ekvatorunun yakınında bir kesi oluşturmak için steril bir jilet veya neşter kullanın. Daha sonra ön gözü izole etmek için kavisli cerrahi makas kullanarak gözü yarımnect.
Ön segmentten vitreus mizahını kepçeyle almak ve lensi ön segmentten mikro makasla çıkarmak için kürek olarak mikro makas kullanın. Trabeküler meshwork görünene kadar iris köküne yavaş yavaş kesin. Tüm trabeküler meshwork bölgesini ortaya çıkarmak ve gerekirse trabeküler meshwork'ü kaplayan kalan irisleri temizlemek için kesimi irisin etrafına 360 derece uzatın.
Silier gövde kalıntılarını trabeküler meshwork bölgesine sadece bir milimetre incelikte doku bandı bırakarak kırpın. Ön segmenti Petri kabına yerleştirdikten sonra. Medyada bir pamuklu çubuk ıslatın ve herhangi bir pigmenti çıkarmak için korneanın ortasına hafifçe dablayın.
Gözleri asalarla tutun ve silerek skleranın etrafındaki ekstra pigmenti çıkarın. Ters ön segmenti alt kabın yükseltilmiş bölgesinin üzerine yerleştirin ve korneanın yükseltilmiş bölgenin merkezinde kalmasını sağlayın. Sıkma halkasını yeni yerleştirilen ön segmentin üzerine yerleştirin ve vidaları L tuşuyla hafifçe sıkın.
Her iki akışkan konektörü de O halkalı olarak kabın altındaki dişli bağlantı noktalarına takın. İlk akışkan konektöre 18 ölçer 90 derece bükülmüş iğne göbeği, boru uzunluğu, 18 kalibrelik iğne göbeği, naylon şırınga filtresi, üç yönlü valf ve medya ile dolu 20 milimetre şırınga takın. İkinci akışkan konektöre 18 ölçer 90 derece bükülmüş iğne göbeği, bir boru uzunluğu, 18 kalibrelik bir iğne göbeği, ilk sıvı konektörü için gösterildiği gibi üç yönlü bir valf takın ve ardından sıvıyı ve kabarcıkları yakalamak için bir rezervuar görevi görecek steril 10 mililitrelik bir şırınganın namlu kısmını takın.
Üç yönlü vanaları şırınna uygun şekilde açık tutun, ilk akışkanlar konektör bağlantı noktasını kullanarak ortamı yavaşça sistemden geçirin. Ön segmenti şişirmek için boruyu ortamla doldurun ve sonunda rezervuarı doldurun. Ortamı yavaşça yemeğe iterek kabarcıkları çıkarın ve kabarcıkları dışarı itmek için tabağı ters çevirin.
Ön segment organ kültürü çanasını hücre kültürü inkübatörüne yerleştirin. Kapının açılıp kapanmasına müdahaleyi önlemek için boru hatlarını inkübatör kapısının altından dışarı doğru yönlendirin. Boru hatlarını basınç dönüştürücü cihazına rezervuar ile yerleştirin.
Hava kabarcıklarının boru hatlarına girmesini önlemek için PBS çizgiden akarken yan üç yönlü vanayı basınç dönüştürücüye bağlayın. Açık yaralanma indüksiyonu için hazırlanan biyo güvenlik kabininin içinde, 4,5 milimetre çapa kadar olan nesnelerde yeterli delinme kuvveti üretmek için delinme platformundaki basınç regülatörünü inç kare başına 50 pound kuvvete ayarlayın. Çapraz izleme mengenesini laboratuvar jakına delinme platformunun önüne yerleştirin.
Piston kolunu maksimum mesafesine uzatın ve kornea tepesini delici nesnenin bir milimetre bölgesi içinde konumlandırın, piston kolunu geri çekin ve ön segmenti delici nesneye bir santimetre yaklaştırın. Delinme cihazını ateşlemek için cihazı açın ve solenoid vanayı cihazdaki ikinci anahtarla açın. Cihazı gözlerden geri çekmek için ikinci düğmeye basın, yaralanma bölgesinden sızan görsel inceleme ve ortamla uygun yaralanma indüksiyonunu doğrulayın.
Ameliyattan sonra kornea epitel bütünlüğü optik koherens tomografisi kullanılarak görüntüleme ile değerlendirildi. Yaralanan ön segment dokusu yaralanmadan hemen sonra ve yaralanma sonrası 72 saat görüntülendi. Kontrol edilen gözler korneada gözle görülür bir bozulma göstermezken, yaralanmadan sonra korneadan net yaralanmalar tespit edildi.
Yukarıdan aşağıya maksimum yoğunluk projeksiyonundan, yaralanmaların şekil ve boyut olarak düzensiz olduğu açıktı, ancak yaralanma boyutu 72 saat içinde azaldı. Kabul edilebilir aralıkta basınç stabilitesini belirlemek için ameliyattan önceki ilk üç gün gözlenen interoküler basınç gözlendi. Temsili sonuçlarda her beş gözden üçü kabul edilebilir interoküler basınç aralığına girer.
Açık küre yaralanması ve terapötik müdahale nedeniyle interoküler basınç değişir. Açık küre yaralanma indüksiyonu sonrasında basınç önemli ölçüde azaldı ve deney tamamlanana kadar düşük kaldı. Yaralı dokuların dermabond yapıştırıcı ile tedavisi, tedavi edilmemiş dokuya kıyasla göz içi basıncının artmasına neden oldu, bu da bu yöntemin göz içi basıncını geri yüklemek için terapötiklerin etkinliğini ölçmek için kullanılabileceğini gösteriyor.
Segmentin organ kültüründe ilk kurulumu dokunun uzun süreli stabilitesi için kritik öneme sahiptir. Halkanın aşırı sıkması doku üzerinde strese neden olabilir ve uyumu azaltabilir.
