Bu, duygusal durumdaki değişikliklere, başka bir deyişle ruh hali veya duyguya duyarlı olarak doğrulanan ilk fare yargısı önyargı görevidir. Herhangi bir değişkenin fare etkisi üzerindeki etkilerini araştırmak için kullanılabilir. Bu protokol, farelerin öğrenmesini kolaylaştıran etolojik bir tasarım kullanır ve aynı zamanda refah dostudur, çünkü görev ceza veya olumsuz takviye kullanımından kaçınır.
Bu görev, hayvancılığın veya deneysel prosedürlerin fare duygulanım durumları üzerindeki etkisini değerlendirebilir, bu da hayvan refahı araştırması veya insan duygusal bozukluklarının modellenmesi gibi çeşitli alanlarda değerli olmasını sağlar. Araştırmacıların engelleyici olmayan kullanım yöntemlerinde zaten rahat olduklarını varsayarsak, ana tavsiyemiz, uygun koku karışımlarını, başka bir deyişle, farelerin belirsiz olarak gördüklerini tanımlamak için eğitimden önce pilotları kullanmaktır. Bu davranış testi, bir farenin yüksek veya düşük değerli yiyecek ödülleri için kazması gereken koku tabanlı bir go-go kazma görevidir.
Deney aygıtı iki kollu dikdörtgen bir arenadan oluşur. Bir kol her zaman ortalanır ve pozitif veya negatif ayrımcı uyaran kokusu ile işaretlenir ve diğer kol her zaman kokusuzdur. Kazma kapları, delikli bir plastik bariyerle ayrılmış erişilebilir ve erişilemez bir bölme içerir.
Aparat içindeki her iki kap da her zaman yüksek ve düşük değerli yiyecekleri içerir, ancak kola ve deneme tipine bağlı olarak ikramlar erişilebilir hale getirilir. Olumlu eğitim denemeleri sırasında fare, pozitif bir ayrımcı uyaran kokusu ve gömülü yüksek değerli bir yiyecek ödülü ile işaretlenmiş bir tencere içeren kokulu kolu keşfetmeyi ve kazmayı seçebilir. Fare ayrıca, damıtılmış suyla işaretlenmiş ve düşük değerli bir yiyecek ödülü içeren kokusuz kolu kazmayı da seçebilir.
Negatif eğitim denemeleri sırasında, fare yine negatif ayrımcı uyaran kokusu ile işaretlenmiş bir tencere içeren ve erişilebilir yiyecek ödülü olmayan kokulu kol veya yine damıtılmış su ile işaretlenmiş ve düşük değerli bir yiyecek ödülü içeren kokusuz kol arasında seçim yapabilir. Daha sonra, fareler, hiçbir gıda ödülünün bulunmadığı pozitif ve negatif takviyesiz denemelerde test edilir ve görevi öğrenenler takviye edilmemiş belirsiz bir denemeye tabi tutulur. Belirsiz denemede, kokulu kol, pozitif ve negatif ayrımcı uyaran koku ipuçlarının bir karışımı ile işaretlenmiş bir tencere içerir ve belirsiz kokuyu oluştururken, kokusuz kol her zaman olduğu gibi sadece damıtılmış su ile işaretlenir.
Fareler bu belirsiz denemede yargı önyargılarını ortaya koyuyor. Deneysel hazırlık için, bir mililitrelik bir şırınga veya mikropipet kullanarak, etiketli santrifüj tüplerine nane ve vanilya özü ekleyin. Ekstraktları 1:4 damıtılmış suyla seyreltin ve birkaç kez ters çevirerek karıştırın.
Karışımların taze ve tutarlı olmasını sağlamak için bunları günlük ve kullanımdan önce tekrar tekrar ters çevirin. Belirsiz koku karışımı için, nane ve vanilya esansları seyreltildikten sonra, seyreltilmiş esansların 1: 1 karışımını yapmak için bir santrifüj tüpüne eşit hacimler ekleyin. Daha sonra, güçlendirilmiş denemeler sırasında, pozitif ayrımcı uyaran koku kabı için, erişilemeyen bölmeye bir parça chow yerleştirin ve tencerenin erişilebilir alanına bir parça muz cipsi gömün.
Negatif ayrımcı uyaran koku kabı için, erişilemeyen bölmeye bir parça chow ve bir parça muz çipi yerleştirin. Ardından, tencereyi üç santimetre mısır koçanı yatağı ile doldurun. Bu kabın erişilebilir alanında yiyecek ödülü bulunmayacaktır.
Kokulu saksılar için, erişilemeyen bölmeye bir parça muz cipsi yerleştirin ve tencerenin erişilebilir alanına bir parça chow gömün. Tüm güçlendirilmemiş deneme testleri sırasında, erişilemeyen bölmeye bir parça chow ve bir parça muz çipi yerleştirin. Ardından, tencereyi üç santimetre mısır koçanı yatağı ile doldurun.
Bu kabın erişilebilir alanında yiyecek ödülü bulunmayacaktır. Saksıları doldurduktan sonra, 100 mikrolitre uygun koku karışımı veya damıtılmış su çekmek için bir şırınga veya mikropipet kullanın ve dairesel bir hareketle doğrudan mısır koçanının üzerine enjekte edin. Daha sonra, koku dağıtıcıları hazırlamak için, doku kasetinin tabanına bir pamuklu ped parçası yerleştirin.
Daha sonra, bir mililitrelik bir şırınga veya mikropipet kullanarak, uygun koku karışımından veya damıtılmış sudan 100 mikrolitre çekin ve pamuk parçasına enjekte edin. Kokulu pamuğu içine almak ve bir koku dağıtıcısı oluşturmak için doku kasetini kapağıyla örtün. Kazma kaplarını arenanın kollarının sonuna ve koku dağıtıcılarını her kolun başına yerleştirin.
Arena kollarına girişi engellemek ve başlangıç bölmesini oluşturmak için çıkarılabilir kapıyı kaset yuvalarının hemen önüne yerleştirin. Farenin karanlık ve aktif aşamasında tüm eğitim ve test oturumlarını kırmızı ışık altında gerçekleştirin. Her antrenman veya test seansından önce hazneden yiyecekleri çıkararak fareyi kafeslerinde bir saat boyunca hızlandırın.
Kazma eğitiminin ilk gününde, yiyecek ödüllerini altına gömmek yerine üç santimetrelik mısır koçanı yataklarının üzerine yerleştirin. Ödülleri, beşinci güne kadar üç santimetrelik yatağın dibine yerleşene kadar takip eden dört gün boyunca mısır koçanının altına kademeli olarak gömün. Eğitim denemelerine başlamak için fareyi taşıma kafesinden arenanın başlangıç bölmesine getirin.
Başlangıç kapısını çıkarın, pleksiglas kapağı hemen arenanın üzerine indirin ve beş dakikalık deneme zamanlayıcısını başlatın. Ardından, kazma gecikmesini, kazmanın ilk oluşumunun gözlemlendiği zaman olarak ve yeme gecikmesini, yemenin ilk oluşumunun gözlendiği zaman olarak kaydedin. Ayrımcılık eğitimi için, bir pozitif güçlendirilmiş deneme ve ardından bir ila beş gün arasında bir negatif güçlendirilmiş deneme yapın.
6 ila 10. günlerde, denemelerin sırasını sözde randomize edin, böylece her fare günde iki pozitif ve iki negatif denemeye tabi tutulur. Test aşamasında, öğrenme kriterleri karşılanana kadar her fare için her gün bir pozitif veya negatif takviyesiz test denemesi yapın. Her gün, video kayıtlı test denemesinden önce randomize bir sırayla bir pozitif ve bir negatif güçlendirilmiş çalışma ve test denemesinden sonra başka bir pozitif ve negatif güçlendirilmiş çalışma gerçekleştirin.
Pozitif ve negatif test denemelerinin günler boyunca dönüşümlü olarak yapıldığından emin olun. Video ile kaydedilmiş güçlendirilmemiş bir test denemesi gerçekleştirmek için, fareyi taşıma kafesinden arenanın başlangıç bölmesine getirin. Ardından, kolların ucundaki her iki tencerenin de görülebilmesi ve kayda başlaması için bir tripod üzerinde bir video kamera ayarlayın.
Video puanlaması sırasında işaret kartını fare kör kodu ve deneme türüyle kaydettiğinizden emin olun. Başlangıç kapısını çıkarın, pleksiglas kapağı hemen arenanın üzerine indirin ve iki dakikalık deneme zamanlayıcısını başlatın. Testten sonra, fareyi taşıma kafesine geri getirin.
Farelerin öğrenme kriterlerini karşılayıp karşılamadığını değerlendirmek için test gününde pozitif ve negatif test deneme videolarını puanlayın. Aynı gün video puanlamasını sağlayın, çünkü öğrenme kriterlerini karşılayan hayvanlar ertesi gün belirsiz testlere tabi tutulacaktır. Olay kayıt yazılımı veya kronometre kullanarak, tedaviye kör olan araştırmacının, pozitif ve negatif test denemelerinin ilk dakikasında her farenin her bir tencerede kazma ve kazma süresini kaydetme gecikmesini kaydetmesine izin verin.
Kazma gecikmesini, kazmanın ilk oluşumunun gözlemlendiği zaman olarak ve kazma süresini farenin kazmak için harcadığı toplam süre olarak kaydedin. Farelerin görevi ayırt edip edemeyeceğini belirlemek için kokulu tenceredeki kazma süresini pozitif ve negatif denemeler arasında karşılaştırın. Pozitif ayrımcı uyaran koku kabındaki kazma süresi, testin ilk dakikasında negatif ayrımcı uyaran koku kabının en az iki katı ise, öğrenme kriterleri karşılanır.
Öğrenme kriterlerini karşılayan fareler için, belirsiz koku karışımına verilen yanıtları test edin. Randomize bir sırayla bir pozitif ve bir negatif güçlendirilmiş çalışma gerçekleştirin. Ardından, belirsiz koku karışımını kullanarak video ile kaydedilmiş bir test denemesi gerçekleştirin.
Veri analizi için, sunulan belirsiz ipucunun ara olarak yorumlandığını doğrulamak için her deneme türünde en küçük kareli gecikme araçlarını çizin. Hem bir hem de iki dakikalık testte yargı yanlılığını değerlendirirken, pozitif ayrımcı uyaran-koku etkileşimi ile deneme tipi anlamlıydı. Bu, pozitif ayırıcı uyaranları olarak nane bulunan farelerin beklenmedik bir şekilde belirsiz koku karışımlarını pozitif olarak yorumladığını, pozitif ayırıcı uyaran olarak vanilyalı farelerin ise aynı belirsiz koku karışımlarını ara olarak ele aldığını ortaya koymaktadır.
Bu bulgu, sadece pozitif ayırıcı uyaran olarak vanilyalı farelerin, koku karışımını pozitif ve negatif ayrımcı uyaran arasında ara madde olarak ele almak için teknik gereksinimi karşıladığını göstermiştir. Böylece, pozitif ayrımcı uyaranları olarak nane içeren fareler, sonraki yargı önyargısı analizlerinden dışlandı. Olumlu ayrımcı uyaranları olarak vanilya bulunan farelerde, barınma kazma gecikmelerini etkiledi; geleneksel olarak barındırılan hayvanlar, çevresel olarak zenginleştirilmiş farelere göre belirsiz denemelerde kazmak için daha yavaştı, ancak olumlu veya olumsuz denemeler için değil.
Geleneksel olarak barındırılan fareler tarafından belirsiz ipuçlarının bu kötümser yorumları, olumsuz etkinin göstergesi olan olumsuz yargı önyargılarını yansıtır. Bu protokolü gerçekleştirirken, teknik kriterlerin karşılanması önemlidir. Fareler, ipuçları arasında ayrım yapabildiklerini gösteren öğrenme kriterini karşılamalı ve belirsiz ipucunu orta seviye olarak yorumlamalıdır.
Bu yeni yargı yanlılığı görevinin geliştirilmesi, hem hayvan refahı hem de klinik etkileri olan fare duygusal durumları hakkındaki önemli hipotezleri test etmek için kapıyı açıyor.
