İnsan dokularında immün ve immün olmayan yolakların in vivo manipülasyonu için önemli bir araç olan insan ksenograft deri nakli modeli için gerekli teknikleri ana hatlarıyla belirtiyoruz. Bu teknik, insan derisi fizyolojisini in vitro yöntemlerden daha iyi özetler ve in vivo klinik öncesi deneysel manipülasyona izin verir. Ksenograft deri nakilleri, in vivo insan derisi iltihabını hedef alan bileşiklerin klinik öncesi testleri için kullanılabilir.
Bandaj fareleri özellikle zor olabilir, bu nedenle ameliyatları gerçekleştirmeden önce bandaj işlemini sağlıklı anestezi uygulanan farelerde uygulamanızı tavsiye ederiz. Başlamak için, insan derisi örneğini sterilize edilmiş bir diseksiyon tahtası üzerinde sterilize edilmiş bir negatif basınçlı doku kültürü davlumbazında dermatome hazırlayın. Cilt örneğini epidermis tarafı yukarı bakacak şekilde diseksiyon tahtasına yerleştirin ve epidermisi steril bir alkol hazırlama pedi ve ardından PBS ile silin.
Şimdi cildin daha yakın kenarını sabitlemek için 1,5 inçlik bir diseksiyon T pimi kullanın. Daha sonra cilt örneğini 400 mikrometre kalınlığında dermatom yapın ve 30 ila 45 derecelik bir açıyla ileri doğru keserken sabit basınç uygulayın. Petri kabının altına steril PBS'ye batırılmış steril bir gazlı bez yerleştirin ve epidermis tarafı yukarı doğru olan cildi ıslak gazlı bezin üzerine yerleştirin.
Numunenin kirlenmediğinden emin olmak için plaka kenarlarını yarı şeffaf bir sızdırmazlık filmi ile kapatın ve örtün ve aşılamadan önce numuneyi dört santigrat derecede saklayın. Steril aletleri ve cerrahi istasyonu aşılama için hazırlayın ve otoklavlanmış kağıt havluları alet ve fare yerleştirme için steril yüzeyler olarak kullanın. Anestezi indüksiyonundan sonra, fareyi bir ısıtma yastığına veya başka bir ısı kaynağına aktarın ve eldivenli bir parmakla göze küçük bir damla merhem sürerek oftalmik merhemi uygulayın.
Cildi sıkıştırın ve deri altından analjezikleri vücuda paralel bir açıyla enjekte edin. Fareyi kuyruğundan kaldırdıktan sonra, karnı açığa çıkarın ve bir mililitrelik insülin şırıngası kullanarak intraperitoneal olarak 100 mikrolitre anti-Gr1 başına 100 mikrogram enjekte edin. Ardından, farenin sırt tarafının orta ve üst kısımlarını tıraş etmek için hayvan için güvenli elektrikli makaslar kullanın.
Tüm tüyleri temizledikten sonra, tıraş olmuş cilde bol miktarda epilasyon merhemi uygulayın. 30 saniye ila bir dakika bekleyin, ardından epilasyon merhemini bir kağıt havlu ve PBS ile tamamen silin. Fareyi cerrahi istasyona aktardıktan sonra, ameliyat alanını sterilize edin ve farenin üzerine steril bir plastik sargı yerleştirin.
Plastiğin içindeki pencereyi, aşılanacak alanın boyutundan biraz daha büyük olarak kesin. Forseps arka tarafı ile donör derisini sıkıca yerinde tutun ve forsepslerin yanına neşterle aşılanmak üzere donör derisinin 10 x 10 milimetre boyutunda dikdörtgen şeklinde bir kısmını kesin. Fasyanın derinliklerini kesmemek için cildi vücuttan uzaklaştırın.
Bir greft yatağı oluşturmak için, donör cilt parçasının boyutuna uyan dikdörtgen bir fare derisi alanını kesin. Daha sonra donör deri parçasını epidermis tarafı yukarı doğru hazırlanan greft yatağına yerleştirin. Forsepslerin arkasını kullanarak, donör cilt greft yatağına karşı tamamen düz durana kadar ileri geri kayan cildi manipüle edin.
Donör cildinin fare derisiyle buluştuğu yere cerrahi tutkal dokusu yapışkan damlaları ekleyin ve fare ve donör cildini forseps ile bir ila iki saniye boyunca tutun, böylece yapıştırıcı dokulara yapışır. Greftin kenarını tamamen kapatın ve yapıştırıcının iyice kurumasını bekleyin. Daha sonra, greft bölgesini tamamen kaplayacak kadar büyük petrolatum gazlı bezi kesin.
Grefti petrolatum gazlı bezle örtün ve forseps kullanarak gazlı bezi cilde hafifçe bastırın. Şeffaf bir film pansuman şeridini uzunlamasına kesin, böylece genişlik farenin yarasını örtecek kadar büyük olur. Şeffaf film pansumanı, yapışkan tarafı aşağı bakacak şekilde gazlı bezin üzerine sıkıca bastırın.
Pansumanı gövdenin etrafına tamamen sarmak için fareyi hızlı bir şekilde yuvarlayın, solunumu engellemeden sıkıca oturduğundan ve tüm uzuvların hareket için serbest olduğundan emin olun. Fareyi bir kurtarma kafesine yerleştirdikten sonra, uyanık olana ve hareket edene kadar izleyin. İyileşmeyi takiben en az 15 dakika boyunca kafesin bir kısmında bir ısı kaynağı sağlayın.
Transplantasyondan 10 ila 21 gün sonra greftlerin analizi, greftin donörün cildinin farenin derisiyle buluştuğu kenarların etrafında yapışkan kaldığını ve greftin sağlıklı insan derisinden daha kalın ve daha iltihaplı kaldığını göstermiştir. Akış sitometrisi ile yapılan analiz, çoğu greftte insan bağışıklık hücrelerinin sürekli varlığını ortaya koydu, ancak sayımlar ksenogreftler arasında değişiyordu. Başarılı greft, insan bağışıklık hücrelerini korudu.
Bununla birlikte, donör dokunun devam eden bağlılığına ve sağkalımına rağmen, insan bağışıklık hücrelerini koruyamayan greftler başarısız kabul edilir. 35 gün sonra greftin hematoksilin ve eozin boyalı bölümlerinin analizinde sağlam epidermis saptandı ve dermis, soluk sinsityal sitoplazma ve dağınık lenfositlere sahip dolgun oval fibroblastlardan oluşan orta derecede hücreseldir. 50 gün sonra greftin analizi, sağlam epidermis ve oval fibroblastlar içeren dermis ve biraz artmış hücre dışı matriks birikimi ile benzer sonuçlar göstermiştir.
Başarılı deri ksenogreftleri, deri örneklerinin uygun şekilde hazırlanmasına, anti-Gr1 uygulaması ile fare nötrofilik immün yanıtlarının baskılanmasına, aseptik kemirgen cerrahisi yöntemlerine uyulmasına ve farelerin güvenli bandajına dayanır. İnsan ksenograft cilt nakli modeli, araştırmacıların bozulmamış organdaki insan bağışıklık tepkilerini in vivo olarak incelemelerine izin vererek translasyonel araştırmalar için yeni bir yol sağlar.
