우리는 생체 내에서 인간 조직에서 면역 및 비면역 경로를 조작하기 위한 중요한 도구인 인간 이종이식 피부 이식 모델에 필요한 기술을 간략하게 설명합니다. 이 기술은 시험관 내 방법보다 인간의 피부 생리학을 더 잘 요약하여 생체 내 전임상 실험 조작을 허용합니다. 이종이식 피부 이식은 생체 내에서 인간 피부 염증을 표적으로 하는 화합물의 전임상 시험에 사용할 수 있습니다.
붕대를 감는 것은 특히 어려울 수 있으므로 수술을 수행하기 전에 건강한 마취 된 쥐에게 붕대 과정을 연습하는 것이 좋습니다. 시작하려면 멸균 된 해부 보드의 멸균 된 음압 조직 배양 후드에서 인간 피부 샘플을 피부 분절로 준비하십시오. 표피가 위로 오도록 피부 샘플을 해부 보드에 놓고 멸균 알코올 준비 패드와 PBS로 표피를 닦습니다.
이제 1.5인치 해부 T 핀을 사용하여 피부의 더 가까운 가장자리를 고정합니다. 그런 다음 피부 표본을 400 마이크로 미터 두께로 피부 분혈하고 30-45도 각도로 앞으로 절단하면서 일정한 압력을 가합니다. 멸균 PBS에 적신 멸균 거즈를 페트리 접시 바닥에 놓고 표피 쪽이 위로 오도록 피부를 젖은 거즈 위에 놓습니다.
반투명 밀봉 필름으로 플레이트 가장자리를 밀봉하고 덮어 샘플이 오염되지 않도록 하고 접목 전에 샘플을 섭씨 4도에서 보관하십시오. 접목을 위해 멸균 기구와 수술 스테이션을 준비하고 고압멸균 종이 타월을 기구 및 마우스 배치를 위한 멸균 표면으로 사용합니다. 마취 유도 후 마우스를 가열 패드 또는 다른 열원으로 옮기고 장갑을 낀 손가락으로 눈에 작은 연고 방울을 두드려 안과 연고를 투여하십시오.
피부를 꼬집고 진통제를 신체와 평행 한 각도로 피하 주사하십시오. 꼬리로 마우스를 들어 올린 후 복부를 노출시키고 1 밀리리터 인슐린 주사기를 사용하여 30도 각도로 복강 내 항 -Gr1 100 마이크로 리터 당 100 마이크로 그램을 주사합니다. 그런 다음 동물용 전기 클리퍼를 사용하여 마우스 등쪽의 중간 및 상부를 면도합니다.
모든 머리카락을 제거한 후 면도 한 피부에 충분한 양의 제모 연고를 바르십시오. 30 초에서 1 분 동안 기다린 다음 종이 타월과 PBS로 제모 연고를 완전히 닦으십시오. 마우스를 수술 스테이션으로 옮긴 후 수술 부위를 소독하고 마우스 위에 멸균 플라스틱 랩을 놓습니다.
접목 할 영역의 크기보다 약간 큰 플라스틱의 창을 자릅니다. 집게 뒷면으로 기증자 피부를 단단히 잡고 메스로 집게와 함께 접목 할 기증자 피부의 10 x 10mm 직사각형 부분을 자릅니다. 근막이 깊숙이 베이지 않도록 피부를 몸에서 빼내십시오.
이식 침대를 만들려면 기증자 피부 조각의 크기와 일치하는 마우스 피부의 직사각형 영역을 잘라냅니다. 그런 다음 표피가 위로 오도록 기증자 피부 조각을 준비된 이식편 침대에 놓습니다. 집게의 뒷면을 사용하여 기증자 피부가 이식 침대에 완전히 평평해질 때까지 피부를 앞뒤로 미끄러지듯 조작합니다.
기증자 피부가 마우스 피부와 만나는 곳에 수술 접착제 조직 접착제 방울을 추가하고 접착제가 조직에 부착되도록 마우스와 기증자 피부를 집게로 1-2 초 동안 유지합니다. 이식편의 가장자리를 완전히 밀봉하고 접착제가 완전히 건조되도록 합니다. 다음으로, 이식편 부위를 완전히 덮을만큼 충분히 큰 바셀린 거즈를 자릅니다.
바셀린 거즈로 이식편을 덮고 집게를 사용하여 거즈를 피부에 가볍게 누릅니다. 투명 필름 드레싱 스트립을 세로로 잘라 너비가 마우스의 상처를 덮을만큼 충분히 커지도록합니다. 접착면이 아래로 향하도록 투명 필름 드레싱을 거즈 위로 단단히 누릅니다.
마우스를 빠르게 굴려 드레싱을 몸통 주위로 완전히 감싸서 호흡을 방해하지 않고 단단히 고정되고 모든 팔다리가 자유롭게 움직일 수 있도록 합니다. 마우스를 복구 케이지에 넣은 후 마우스가 경고하고 움직일 때까지 모니터링합니다. 회복 후 최소 15 분 동안 케이지 부분에 열원을 제공하십시오.
이식 후 10-21 일 동안 이식편을 분석 한 결과, 이식편은 기증자의 피부가 마우스의 피부와 만나는 가장자리 주위에 부착되어 있었고 이식편은 건강한 사람의 피부보다 두껍고 염증이 많은 것으로 나타났습니다. 유세포 분석에 의한 분석은 대부분의 이식편 내에서 인간 면역 세포의 지속적인 존재를 밝혀 냈지만 개수는 이종 이식편마다 다양했습니다. 성공적인 이식편은 인간 면역 세포를 유지시켰다.
그러나 기증자 조직의 지속적인 부착 및 생존에도 불구하고 인간 면역 세포를 유지하지 못한 이식편은 실패한 것으로 간주됩니다. 35일 후 이식편의 헤마톡실린 및 에오신 염색 부분을 분석한 결과, 표피는 손상되지 않았으며 진피는 창백한 세포융합 세포질과 흩어진 림프구가 있는 통통한 타원형 섬유아세포로 구성된 중간 정도의 세포질로 나타났습니다. 50일 후 이식편의 분석은 온전한 표피 및 타원형 섬유아세포를 포함하는 진피와 약간 강화된 세포외 기질 침착과 유사한 결과를 나타내었다.
성공적인 피부 이종 이식은 피부 표본의 적절한 준비, 항 -Gr1 투여에 의한 마우스 호중구 면역 반응 억제, 무균 설치류 수술 방법 준수 및 마우스의 안전한 붕대에 의존합니다. 인간 이종이식 피부 이식 모델을 통해 연구자들은 생체 내 온전한 장기에서 인간 면역 반응을 연구할 수 있어 중개 연구를 위한 새로운 길을 제공합니다.
