Bu protokol, sıcak su aklamanın dezenfeksiyon etkinliğini test eder. Bir yıkayıcı ve kurutucunun bir virüs tarafından kontamine olmuş giysileri temizlemek için uygun olup olmadığını değerlendirmeye yardımcı olabilir. Bu aklama tekniğinin temel avantajı, kalite güvence sürecinden geçen prosedürler kullanılarak diğer laboratuvarlarda daha küçük ölçekte çoğaltılabilmesidir.
Prosedürü gösteren, bir mikrobiyolog olan Ahmed Abdel-Hady, Mariela Monge ve Jonathan Sawyer, araştırma bilimcileri ve laboratuvarımızdan diğerleri olacak. Başlamak için, modifiye triptik soya agarını, içeriği metinde açıklandığı gibi deiyonize suda tartarak ve karıştırarak hazırlayın. Daha sonra, yumuşak agar'a bir mililitre seyreltilmemiş, konsantre Phi6 aliquot ve 100 mikrolitre log fazlı pseudomonas şırınga kültürü ekleyin.
Daha sonra, 100 milimetre çapında katılaşmış modifiye edilmiş triptik soya agar plakasının yüzeyine yumuşak agar dökün. Plakaları nazikçe döndürerek ve yumuşak agar'ı katı agar yüzeyine eşit olarak dağıtarak kabarcıkları veya dökülmeleri önleyin. Oda sıcaklığında gece boyunca inkübasyondan sonra, üç plakanın içeriğini steril bir hücre yayıcı ile 15 mililitre SM tamponu içeren steril bir 50 mililitrelik kronik tüpe yavaşça kazıyın.
Agar'ı kırmak için tüpleri maksimum ayarda vorteks yapın ve daha sonra 7.000 kez G.'de 15 dakika boyunca santrifüj yapın, sonra süpernatantı toplayın ve 0.2 mikronluk bir şırınga filtresinden süzün. Filtrelenmiş süpernatantı bir mililitre alikot olarak kriyovyallerde 80 santigrat derecede daha fazla kullanana kadar saklayın. Çeşitli yerlerde yıkanmamış kişisel koruyucu ekipmanların veya KKD öğelerinin uzunluğunu ve genişliğini ölçerek ve kaydederek ön test görsel değerlendirmesi yapın.
Aşılama için, toplam 10 mililitre 1X PBS hacminde bir gram sığır eti ekstraktını çözerek% 10'luk bir sığır eti özü çözeltisi hazırlayın. Filtre, 0,2 mikronluk bir şırınga filtresi kullanarak çözeltinin tüm hacmini sterilize edin. Daha sonra biyo güvenlik kabininin içinde, test ve pozitif kontrol kuponlarını, numune başına yaklaşık 10 ila yedinci plak şekillendirme ünitesi ile 10 mikrolitrelik bir çözelti miktarını KKD maddesine birden fazla damlacık olarak pipetleyerek ve pipetin ucunu kullanarak damlacığı yayarak aşılayın.
Bir sıcak plaka ve karıştırma çubuğu kullanarak yıkama solüsyonunu 50 santigrat dereceye kadar ısıtın. Daha sonra yıkama çözeltisinin pH ve sıcaklığını ölçüp kaydedin ve sterilite kontrolü için 10 mililitre çözelti toplayın. Ardından, sterilize edilmiş bir yıkayıcıya 3,25 litre yıkama çözeltisi dökün.
KKD öğelerini, bir aşılanmış yüz kaplamasını ve dört adet kirlenmemiş film maskesini kuponsuz olarak yıkayıcıya yerleştirin. KKD ürünlerini 18 dakika yıkadıktan sonra, yıkayıcıyı boşaltın ve köpüğü çıkarmak için her seferinde beş litre oda sıcaklığında musluk suyuyla üçlü durulayın. Yıkayıcıya 3,25 litre oda sıcaklığında sterilize edilmiş musluk suyu ekleyin ve dokuz dakika süren bir durulama döngüsü gerçekleştirin.
Ardından, KKD öğelerini beş dakika boyunca döndürmek için yıkayıcı sıkma tarafına taşıyın. KKD ürünlerini kurutucuda 93 santigrat derece yüksek ısı ayarında 80 dakika kurutun. Ardından KKD öğelerini kurutucudan steril çalışma alanına taşıyın.
Kuponları aşılanmış öğelerden aseptik olarak çıkarın ve konik tüplere yerleştirin. Daha sonra, kuponları% 10 Dey-Engley'in 10 mililitrelik nötralize et suyunu, ekipmanın maksimum ayarında iki dakika boyunca vorteks yaparak çıkarın. Ekstraktları geleneksel bir yumuşak üst agar kaplama yöntemi kullanarak plakalamak için, altı mililitre yumuşak agar ve 100 mikrolitre log fazı P şırıngası içeren yumuşak agar tüpüne test numunesi alikotları ekleyin.
Daha sonra, yumuşak agar'ı katılaşmış modifiye triptik soya agar plakasının yüzeyine dökün ve yumuşak agar'ı plakayı döndürerek katı agar yüzeyine eşit olarak dağıtın. Oda sıcaklığında gece boyunca inkübasyondan sonra, platform ünitelerini her plakadaki manuel olarak numaralandırın. Tam boyutlu KKD veya giysilerden viral dezenfeksiyonun aklama etkinliğini değerlendirmek için yapılan sistematik laboratuvar testleri, platform ünitesinin veya PFU plaka sayısının ve ekstrakte edilen numune hacminin, test kuponu başına platform birimi sayısının hesaplanmasını sağladığını göstermiştir.
Yüz örtme testi için temsili viral iyileşmenin sonuçları elde edildi. Aklama testleri, giyim eşyalarının gerilmesi veya büzülmesi gibi malzeme özellikleri ve protokolün kalite kontrollü verileri hakkında bilgi sağlamıştır. Sıcak su yıkamanın Phi6'dan yüz kaplamaları, denim ve ovma KKD malzemelerinin dezenfekte edilmesindeki etkinliği, yıldızların tam dezenfeksiyonu gösterdiği bu grafikte gösterilmiştir.
Çapraz kontaminasyonu önlemek için bu prosedür boyunca aseptik tekniklerin kullanılması önemlidir. Ayrıca, kuponlar için inokülum kurutma süreleri her malzeme için benzersizdir ve testten önce belirlenir. Diğer ücretsiz yöntemler arasında, malzeme bozulmasını araştırmak için mikroskopi ve sıvı penetrasyon testleri veya bariyer korumasının kullanıcıya hala uymasını sağlayan daha fazla boyut değerlendirmesi bulunmaktadır.
Bu teknik, tam ölçekli giysiler ve KKD ürünleri için aklama etkinliğini ve malzeme testini ölçeklendirmek için temel oluşturdu. Ayrıca, başka bir bulaşma olayı veya pandemi sırasında etkili aklama prosedürlerinin oluşturulmasına yardımcı olabilir.
